小麥rubisco單克隆抗體的制備-powerpoint文檔(文件)
【正文】 每孔加入100μL， 4℃ 包被過(guò)夜。結(jié)果判定 洗 滌 終 止 顯 色 洗 滌 加 二 抗 每孔加入稀釋至工作濃度的羊抗鼠IgG二抗 100μL，37℃ 孵育 2h。雜交瘤細(xì)胞的克隆化雜交瘤細(xì)胞的克隆化 ?a、 制備小鼠腹腔細(xì)胞。?d、 每種雜交瘤細(xì)胞分裝 96孔板一塊，每個(gè)稀釋度 32孔，每孔量為 ， 每孔的雜交瘤細(xì)胞數(shù)分別為 、 3和 10。b、 臨用前將 % 瓊脂糖生理鹽水溶液與等量雙倍濃度的 HT培養(yǎng)基混勻，配成 1% 瓊脂糖培養(yǎng)液， 45℃ 水浴中溫育。f、 吸取上清，檢測(cè)抗體，陽(yáng)性孔可繼續(xù)克隆化，或擴(kuò)大培養(yǎng)、凍存。d、 取雜交瘤細(xì)胞懸液 1ml， 加入 1% 瓊脂糖培養(yǎng)液 1ml混勻，鋪于上層。?f、 取抗體檢測(cè)陽(yáng)性孔的細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，并凍存。?b、 制備待克隆的雜交瘤細(xì)胞懸液，用含20% 血清的 HT培養(yǎng)基稀釋至每毫升含 、15和 50個(gè)細(xì)胞 3中不同的稀釋度。 在 490nm波長(zhǎng)下測(cè)定樣品的 OD值，結(jié)果以 P／N比值表示，即將樣品的 OD值與陰性樣品 OD值的均值相比，若大于，即判為陽(yáng)性。 每孔加入經(jīng)稀釋液稀釋的待測(cè)抗血清樣品 100μL， 同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照， 37℃ 孵育 2h。可見，該法具有靈敏、快速、容易操作和無(wú)需昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn)，而且經(jīng)改用醛化紅細(xì)胞以后，克服原來(lái)重復(fù)性差的缺點(diǎn)。單抗與多抗的比較優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn)單抗針對(duì)單一抗原純度高專一性強(qiáng)重復(fù)性好能持續(xù)地?zé)o限量體外繁殖獲得高效價(jià)的單抗往往需要耗費(fèi)較多的人力物力與時(shí)間，因此其價(jià)格也較高 ,適應(yīng)性窄 多抗 識(shí)別的適應(yīng)性寬，制備價(jià)格相對(duì)較低 針對(duì)多個(gè)抗原純度不高專一性不強(qiáng)重復(fù)性較好每次都要從動(dòng)物血清中提取雜交瘤細(xì)胞的篩選雜交瘤細(xì)胞的篩選? 方法
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