小麥rubisco單克隆抗體的制備-powerpoint文檔(文件)
【正文】 每孔加入100μL， 4℃ 包被過夜。結(jié)果判定 洗 滌 終 止 顯 色 洗 滌 加 二 抗 每孔加入稀釋至工作濃度的羊抗鼠IgG二抗 100μL，37℃ 孵育 2h。雜交瘤細(xì)胞的克隆化雜交瘤細(xì)胞的克隆化 ?a、 制備小鼠腹腔細(xì)胞。?d、 每種雜交瘤細(xì)胞分裝 96孔板一塊，每個稀釋度 32孔，每孔量為 ， 每孔的雜交瘤細(xì)胞數(shù)分別為 、 3和 10。b、 臨用前將 % 瓊脂糖生理鹽水溶液與等量雙倍濃度的 HT培養(yǎng)基混勻，配成 1% 瓊脂糖培養(yǎng)液， 45℃ 水浴中溫育。f、 吸取上清，檢測抗體，陽性孔可繼續(xù)克隆化，或擴大培養(yǎng)、凍存。d、 取雜交瘤細(xì)胞懸液 1ml， 加入 1% 瓊脂糖培養(yǎng)液 1ml混勻，鋪于上層。?f、 取抗體檢測陽性孔的細(xì)胞擴大培養(yǎng)，并凍存。?b、 制備待克隆的雜交瘤細(xì)胞懸液，用含20% 血清的 HT培養(yǎng)基稀釋至每毫升含 、15和 50個細(xì)胞 3中不同的稀釋度。 在 490nm波長下測定樣品的 OD值，結(jié)果以 P／N比值表示，即將樣品的 OD值與陰性樣品 OD值的均值相比，若大于，即判為陽性。 每孔加入經(jīng)稀釋液稀釋的待測抗血清樣品 100μL， 同時設(shè)立陰性對照， 37℃ 孵育 2h?？梢?，該法具有靈敏、快速、容易操作和無需昂貴儀器等優(yōu)點，而且經(jīng)改用醛化紅細(xì)胞以后，克服原來重復(fù)性差的缺點。單抗與多抗的比較優(yōu)點 缺點單抗針對單一抗原純度高專一性強重復(fù)性好能持續(xù)地?zé)o限量體外繁殖獲得高效價的單抗往往需要耗費較多的人力物力與時間，因此其價格也較高 ,適應(yīng)性窄 多抗 識別的適應(yīng)性寬，制備價格相對較低 針對多個抗原純度不高專一性不強重復(fù)性較好每次都要從動物血清中提取雜交瘤細(xì)胞的篩選雜交瘤細(xì)胞的篩選? 方法
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