【正文】 ,以乙醇定容。在苷類成分的提取 液中 ,親水性強(qiáng)的植物成分如糖類、鞣質(zhì)等常與苷類同時(shí)被提出 ,用 弱極性的大孔吸附樹脂吸附后 ,很容易用水將糖等成分洗脫下來(lái) ,然 后再用不同濃度的乙醇洗脫被大孔樹脂吸附的苷類 ,達(dá)到純化目的。指紋圖譜必須具 備指紋惶 ,印 :專屬性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性 .中藥指紋圖譜借用了法醫(yī) 學(xué)的指紋鑒定的概念 ,不強(qiáng)調(diào)個(gè)體的絕對(duì)唯一性 ,而強(qiáng)調(diào)同一藥材群 體的相似性 ,即物種群體內(nèi)的唯一性。 ”。因此 ,應(yīng)該通過(guò)色 譜指紋圖譜顯示其所含的各種成分在草藥及其制劑中是穩(wěn)定的 ,其含 量比例能保持恒定。指紋圖譜 ?等分子 生物學(xué)方法。但未見其活性部位指紋圖譜的相關(guān)研究 ,活性成分的含量測(cè)定 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁(yè)絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 也僅僅停留于用紫外分光光度法、薄層掃描法進(jìn)行測(cè)定 ,較為滯后 . 絞股藍(lán)提取物方面的研究報(bào)道則少而又少 ,故有必要對(duì)紋股藍(lán)用現(xiàn)代 的儀器分析展開質(zhì)量控制方面的深入研究 ,對(duì)紋股藍(lán)提取物進(jìn)行提 取、純化、指紋圖譜 ,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等方面的研究 ,對(duì)絞股藍(lán)的研究進(jìn)一 步的深入。 第一節(jié)絞股藍(lán) %總皂苷提取物提取工藝的研究 生產(chǎn)工藝的研究 .材料、試劑與儀器絞股藍(lán)藥材采自湖北省神農(nóng)架林區(qū)松柏鎮(zhèn)絞股藍(lán) 種 植基地 ,人參皂苷 .對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所提供 ,批號(hào) ? ,乙醇工業(yè)用乙醇 , %,其它試劑均為分析純 ,型分光光 度計(jì)上海精密儀器廠 ,型電子天平湘儀天平儀器廠。印 :取紋股藍(lán)粗粉 ,加 %乙醇浸漬 的速度進(jìn)行滲漉 ,收集 %藥材量的初漉液另器保存 ,繼續(xù)滲漉 ,俟 皂苷完全漉出 ,續(xù)漉液回收乙醇后與初漉液合并 .并濃縮至適量 ,減壓 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁(yè)絞股藍(lán) %,皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 干燥 ,印得。 討論本法采用滲漉法提取絞股藍(lán)總皂苷 ,雖然提取效率較低 ,但可以避免“通 法”提取中用乙醇回流提取對(duì)絞股藍(lán)有效成分的破壞 ,也可以避免用正丁醇萃取 皂苷不完全 ,成本過(guò)高等弊端。并濃縮至適量一減壓干燥 ,即得。在 .?.有良 歸方程為 :.一 . 好的線性關(guān)系。 初始濃度一吸附后濃度吸附液體積 飽和吸附量 ??????丐磊再 ???????一 結(jié)果表明 ,在靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)中 ,。型樹脂?！? 表五種樹脂解吸附測(cè)定結(jié)果 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁(yè)絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)的研究 靜態(tài)解吸附實(shí)驗(yàn)表明 ,。 初始濃度一吸附后濃度吸附液體積 比吸附量 ??????。與之相比 沒有很大的差別 ,經(jīng)綜合評(píng)定幾種樹脂的性能并考慮經(jīng)濟(jì)原則和實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的條 件 ,選定型樹脂純化分離樣品溶液中的總皂苷。大孔樹脂購(gòu)于北京慧德穎科技有限責(zé)任公司 。將上樣流速、 上樣藥液的濃度及值每因素各設(shè)水平 ,待吸附完全后以水洗去雜質(zhì) , 再用 %乙醇以 /流速洗脫 ,測(cè)定洗脫液中總皂苷含量。 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . .. . . . . . . . .. . . . . . . 表 ?方差分析結(jié)果 顯著性 . . .. . . 。樹脂柱上 , 以 /的流速通過(guò)。 圖泄磊曲線圖 .乙醇洗脫濃度考察 另取樹脂四份上柱 ,按以上條件進(jìn)行吸附 ,適量水沖洗后 ,分別以適量 %.%、 %、 %乙醇以 /洗脫 ,并測(cè)定洗脫液中總皂苷含量以及所 得浸膏的純度 ,結(jié)果見表。結(jié)果見圖。 湖北中 醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁(yè)絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 討論 .膠股藍(lán)中含有大量的糖類 ,為皂苷類成分的富集帶來(lái)了較大的困難 ,在樹 脂吸附后的水洗過(guò)程中 ,需要用大量的蒸餾水沖洗才能除去糖分等雜質(zhì)。 第四節(jié) 中試放大試驗(yàn)研究 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 紋股藍(lán)藥材采自湖北省神農(nóng) 。 本實(shí)驗(yàn)僅著重于研究通過(guò)大孔樹脂純化絞股藍(lán)總皂苷 ,在此過(guò)程中未考慮富 集其它的成分 ,例如大量氨基酸、有機(jī)酸 和糖類等有效或有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的成分。 .水洗條件考察 取按上述條件吸附好的大孔樹脂柱 ,用蒸餾水沖洗 ,流速為 ?~,每 個(gè)流分收集 ,濃縮至 ,用 反應(yīng)檢識(shí) ,當(dāng)反應(yīng)呈陰性時(shí) ,停止水 洗。 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁(yè)絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 .洗脫速率考察 按上述條件進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附 ,以 %乙醇為洗脫劑 ,分別以 .,/的 速度洗脫 ,分別測(cè)定乙醇洗脫物中總皂苷洗脫率 ,結(jié)果表明洗脫速率為 . /、 /時(shí)有較好的洗脫效果 ,為提高生產(chǎn)效率 ,確定洗脫流速為 /。 測(cè)定結(jié)果見圖 ?。 , 直觀分析表明 ,個(gè)因 素對(duì)絞股藍(lán)總皂苷在大孔吸附樹脂上的吸附 結(jié)果分析 效率的影響程度依次為 :上樣濃度”上樣流速藥液 ,優(yōu)選 組合為 ::.方差分析表明 ,在絞股藍(lán)總皂苷的吸附過(guò)程中 ,、三因素 有顯著影響 ,且因素影響極為顯著。試驗(yàn) ,因素及水平安 排見表。所用試棄 均為分析純 ,型分光光度計(jì)上海精密儀器廠。 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁(yè)絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 第三節(jié)。故本實(shí)驗(yàn)決定選 用大孔樹脂對(duì)絞股藍(lán)總皂苷進(jìn)行純化。 但均高于其它樹脂。并按下式計(jì)算洗脫率 ,試 驗(yàn)結(jié)果見表。型樹脂對(duì)樣品中總皂苷的 飽和吸附量比較接近 ,但均高于 :。三角瓶中 , 精密加入樣品溶液 ,置振蕩器上持續(xù)振搖 .使其充分吸附后 ,取上層液 測(cè)定總皂苷濃度。 ..供試品溶液的制備取本品約 .,精密稱定 ,置具塞錐形瓶中 ,精密 加入甲醇 ,稱定重量 ,超聲處理分鐘 ,放冷 ,再稱定重量 ,用甲醇補(bǔ) 足減失的重量 ,濾過(guò) ,取續(xù)濾液 ,即得。 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果 .絞股藍(lán) %提取物中總皂苷的含量測(cè)定 ..測(cè)定波長(zhǎng)的選擇根據(jù)對(duì)顯色后人參皂苷 ,對(duì)照品溶液紫外一可見光 譜的測(cè)定 ,選擇測(cè)定波長(zhǎng)為。 表 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 因素 試驗(yàn)號(hào) 總皂菩含量 % % / ~ ● 一 ● ~● ~ 。 將乙醇濃度、浸漬時(shí)間及滲漉流速每因素各設(shè)水平 ,并以總皂苷含量為評(píng)價(jià)指 標(biāo)進(jìn)行 ,‘試驗(yàn)。二是“大孔吸附樹脂法”即將藥材水提取 ,提液濾過(guò) , 濾液通過(guò)大孔吸附樹脂柱 ,再依次用水、不同濃度的乙醇進(jìn)行梯度洗脫 ,制得絞 股藍(lán)總皂苷。近年來(lái) ,王龍星等””提出一種評(píng)價(jià)中藥指紋圖譜相 似性的新方法一一向量夾角法以及孟慶華等提出的色譜指紋圖譜相 似度的新算法””。國(guó)家食品藥 品監(jiān)督管理局 年第季度也下發(fā)Ⅸ中藥注射劑指紋圖譜研究的 技術(shù)要求》 ,率先要求中藥注射劑推行指紋圖譜的質(zhì)控辦法。 中藥指紋圖譜是建立在中藥化學(xué)、分析化學(xué)等學(xué)科基礎(chǔ)上的綜 合鑒別手段 ,近年來(lái)色譜技術(shù)的日益發(fā)展 ,檢測(cè)手段和能力的不斷增 強(qiáng)為指紋圖譜的研究提供了良好的工作平臺(tái) ,國(guó)外對(duì)天然藥物的認(rèn)識(shí) 是基于全面的化學(xué)成分及藥理學(xué)研究的基礎(chǔ)之上 ,所含化學(xué)成分是對(duì) 其質(zhì)量評(píng)份的依據(jù) ,美國(guó)允許草藥保健品申報(bào)資料可以提供色譜指紋圖鑒別資料“” .在 年草藥評(píng)價(jià)指導(dǎo) 原則””中也有規(guī)定 , 如在“ ”及“ ”章節(jié)中都提到 “如果不可能鑒別有效成分 ,則鑒別一種或幾種特征成分如色譜指 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁(yè)絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 紋圖譜以保證制劑和產(chǎn)品質(zhì)量的一致””。分析色 譜指紋圖譜強(qiáng)調(diào)的是“準(zhǔn)確的辨認(rèn) ”而不是“精密 的計(jì)算 ” 。 大孔吸附樹脂純化中藥有效 成分效果常因純化物質(zhì)的理化性質(zhì) 的不同而有所不同“” .常以比上柱量 , 、比吸 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁(yè)絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 .比洗脫量 , 、吸附率、 附量 , 解吸率、精制度等為評(píng)價(jià)指標(biāo) ,考察提取液預(yù)處理 ,值、溫度 . 鹽效應(yīng) ,濃度、樹脂種類、用量、洗脫值 ,速度三方面 ,確 定純化中藥有效成分的優(yōu)化工藝條件 . 第六節(jié) 指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用 目前 ,指紋圖譜作為中藥材單味藥和復(fù)方全組成 及其提取物的質(zhì)量控制方法 ,己經(jīng)成為國(guó)際公認(rèn)的控制中藥或天然藥 物質(zhì)量的最有效手 段之一 .指紋圖譜 系指某種中藥材 或中成藥經(jīng)適當(dāng)處理后采用一定的分析手段得到的能夠標(biāo)示該中藥 特征的色譜、光譜或其他圖譜。大孔吸附樹脂是一種不含交 換基團(tuán)的具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑 ,主要以苯乙烯 ,【一甲基苯 乙烯 ,【一甲基丙烯酸甲酯 ,丙腈等為原料 ,加入一定量致孔劑二乙 烯苯聚合而成 ,由于所選用的單體分子結(jié)構(gòu)不同 ,大孔吸附樹脂按極 性不同可分為非極性 .中極性、極性和強(qiáng)極性。 第頁(yè) 湖北 中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 ..薄層掃描法““ 樣品采用高效薄層板分離或硅膠板分離后 ,顯色。 ..柱層析一比色法“” 樣品以甲醇回流提取 ,回收甲醇 ,殘?jiān)铀芙?,以水飽和的正 %甲醇水溶液溶解后上氧化鋁柱 丁醇萃取 ,回收正丁醇 ,殘留物以 層析 ,以 %甲醇溶液洗脫 ,濃縮至干