免疫學(xué)檢測(cè)與免疫學(xué)技術(shù)(文件)
【正文】 分子的檢測(cè)方法目前大多采用免疫學(xué)技術(shù)檢查其在細(xì)胞膜上的分布和測(cè)定某些樣品中的含量 。 ? *核酸探針技術(shù)的操作主要包括： ① 質(zhì)粒 DNA的提取； ② 靶 DNA片段的分離； ③ 靶 DNA片段的標(biāo)記； ④ 待測(cè)樣品 mRNA的提?。?⑤ 標(biāo)記cDNA探針與待測(cè)樣品進(jìn)行雜交； ⑥ 放射自顯影或顯色分析 。 ? 2. PCR擴(kuò)增技術(shù) :正常多克隆淋巴細(xì)胞群DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物含有不同長(zhǎng)度的片段 ， 電泳檢查呈現(xiàn)彌漫涂片狀結(jié)構(gòu)或多條帶 。 ? 2． 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性 (PCRRFLP)技術(shù)：此項(xiàng)技術(shù)特別適用于個(gè)別標(biāo)本和小樣本的檢測(cè) 。 ? 4． 序列特異性引物 PCR技術(shù) (PCRSSP)：該法操作簡(jiǎn)單 、 快速 、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易判斷 ， 雜合子也很易檢出 。 ? 6. SNP(單個(gè)核苷酸多態(tài)性 )分析 ? (四 )補(bǔ)體基因分析 ? (五 )抗體基因分析 ? (六 )細(xì)胞膜分子基因分析 七、免疫標(biāo)記技術(shù) ? (一 )免疫熒光技術(shù) (二 )放射免疫分析法 ? (三 )酶免疫技術(shù) (四 )發(fā)光免疫測(cè)定 八、免疫 PCR(IMPCR)技術(shù) ? 免疫 PCR是將抗原抗體的特異性反應(yīng)與PCR技術(shù)結(jié)合起來(lái) ,用以檢測(cè)微量蛋白質(zhì)的方法 。 ? (1) 模板替換 :使用與鼠對(duì)應(yīng)部分有較大同源性的人 FR替換鼠 FR區(qū) , 例如可通過(guò) CDR移植構(gòu)建 “ 改型抗體 ” ? (2)表面重塑 :對(duì)鼠 CDR及 FR表面殘基進(jìn)行重塑或鑲飾 ,使之類似于人抗體 CDR的輪廓或人FR的型式 。其脾、淋巴結(jié)、骨髓中的 B細(xì)胞可表達(dá)人的 ??鏈。 ? *細(xì)胞內(nèi)免疫用于病毒性疾病的治療 ? *抗 EGFR胞外區(qū)的 ScFvR IR,并在 ScFvR IR的C末端連接 KDEL肽 ,提供 ER滯留 ? (五 )基因工程抗體衍生技術(shù) ? 1． 雙特異性抗體 (BsAb)或稱雙功能抗體(BfA)。 ? *按其功能則可分為輔助性和細(xì)胞毒性 T細(xì)胞克隆 。 ? *細(xì)胞壞死時(shí) ,細(xì)胞 DNA隨機(jī)降解 ,電泳不呈梯狀圖譜 。 ? *細(xì)胞壞死時(shí) ,往往是成團(tuán)細(xì)胞死亡 。② 冰凍切片 。 ? * HE 染色核 DNA 呈藍(lán)色 , 而 PI 染色呈紅色 ,DAPI染色呈藍(lán)白色 ,AO染色呈黃綠色 。 壞死細(xì)胞則由于 PI復(fù)染 ， 呈紅色熒光 。 對(duì)照活細(xì)胞的 HO藍(lán)色熒光最強(qiáng) ， 而早期凋亡細(xì)胞由于其DNA降解和丟失 ， 其 HO藍(lán)色熒光較弱 ，也有很弱的 PI紅色熒光 。 ?三 、 免疫學(xué)方法 (ELISA法 ) ? *細(xì)胞凋亡的發(fā)生 ,是由于內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶的激活 ,核小體間區(qū)雙鏈 DNA解開 ,產(chǎn)生單 /低聚核小體片段 ,而核小體 DNA由于與組蛋白 H2A、 H2B、 H3和 H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶裂解 。 ? (一 )熒光標(biāo)記法 ? *采用美國(guó) Oncor公司 ApopTag TM 試劑盒 ，或德國(guó) Boehringer Mannheim公司 In Situ Cell Death Detection試劑盒 ? (二 )酶標(biāo)記法 ? *采用美國(guó) Oncor公司 ApopTagTMPeroxidase試劑盒 。 ?四 、 原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù) (TdT或TUNEL) ? 凋亡細(xì)胞由于內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶的激活 ,核DNA被切割成許多雙鏈 DNA片段以及高分子量DNA單鏈斷裂點(diǎn) (缺口 ),暴露出大量 339。 ? 3． 凋亡小體的電鏡觀察 小體系由細(xì)胞膜卷曲 、 脫落形成的小泡 ,其內(nèi)包含有完整的細(xì)胞器及核片段 。 ? *樣品來(lái)源 培養(yǎng)細(xì)胞或離體細(xì)胞制成的單個(gè)細(xì)胞懸液 。晚期凋亡細(xì)胞表現(xiàn)為核碎裂成大小不等的圓形小體被細(xì)胞膜包繞 ,即凋亡小體 。 ? 方法一： ① PI染液：碘化丙啶 (propidium iodide,PI)； ② DAPI染液； ③ AO染液： ? *熒光顯微鏡下觀察 。 ?三 、 研究細(xì)胞凋亡的意義 ? 1. 細(xì)胞凋亡在腫瘤形成和治療中具有重要作用 。 ? *細(xì)胞壞死時(shí) ,細(xì)胞內(nèi)容物外溢 ,引起局部炎癥反應(yīng)或組織損傷 。 ? 二 、 細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死的區(qū)別 ? *細(xì)胞壞死是細(xì)胞膜 ,線粒體膜結(jié)構(gòu) 、 流動(dòng)性 、滲透性及受體等均受損 , 進(jìn)而細(xì)胞溶解 、 壞死；而細(xì)胞凋亡時(shí)上述結(jié)構(gòu)和功能均保持不變； ? *細(xì)胞壞死時(shí) ,ATP和蛋白質(zhì)合成抑制及終止 。 ? 3． 抗體重組免疫毒素 ? (catalytic antibody)或抗體酶
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1