基因工程原理第七章(文件)
【正文】 基因尋靶 克隆羊 核移植 ? 其他脊椎動物 爪蟾 ? 無脊椎動物 果蠅 產生轉基因哺乳動物的方法 ? 體細胞 卵細胞核替換 ? 顯微注射受精卵 ? 反病毒侵染胚胎干細胞或早期胚 轉基因小鼠 ? 大多數(shù)動物細胞在發(fā)育能力上受到限制，不能產生轉基因動物：分化的細胞無法完全去分化和重復發(fā)育 ? 動物中實現(xiàn)生殖細胞系轉化的唯一途徑就是在形成生殖細胞系的發(fā)育階段之前把 DNA導入全能細胞 ? 胚胎干細胞 (Es Cells)是這樣一個動物體特殊的全能細胞 轉基因小鼠中的 DNA轉移方法 ? 直接顯微注射：注入剛受精卵細胞的雄或雌性原核中 ? 重組反轉錄病毒：不適宜產生完全的轉基因動物，可用于形成胚轉基因部分 ? Es細胞轉染：可利用標準標記進行篩選 胚胎干細胞 (Es Cells) ? 取自生殖細胞發(fā)育前的早期胚 ? 具有發(fā)育成動物的所有組織的能力 ? 受同源重組影響顯著，可以用于基因尋靶，即可用外源 DNA的同源片段精確地替換內源基因組的片段。 ? Southern blot ? PCR ? Western blot 。 ? 標記基因已被運用到尋靶過程和其后的篩選 尋靶載體 ? 特化的質粒載體，導入到 Es細胞后可以促進同源重組 ? 促進同源重組的原因主要是含有一段同源區(qū) ? 轉染前載體的線性化，有助于重組效率的提高 ? 多數(shù)基因尋靶是為了打斷內源基因位點，使之無效，稱為基因敲除 兩種類型的尋靶載體：替代與插入 ? 插入載體是打斷了原基因，也會出現(xiàn)選
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鄂ICP備17016276號-1