《蛋白質(zhì)工程》ppt課件(文件)
【正文】 n a known structure. ? Protein design requires an understanding of the process by which proteins fold. by use of puter models, ? Protein design is also referred to as inverse folding. Hence, designing a new protein involves the identification of the sequences which have the chosen structure as free energy minimum. 蛋白質(zhì)創(chuàng)造和改造 ? 蛋白質(zhì)的改造，從物理、化學(xué)法到基因重組。突變庫 ? 選擇， Selection: 理想突變的掃描或選擇。上一輪的結(jié)果供下輪創(chuàng)建一個新庫。 ? 選擇特殊環(huán)境，利用酶定向進化技術(shù)重新設(shè)計及改進酶分子的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，可以逐步接近和滿足將酶催化用于工業(yè)生產(chǎn)的需要。 ? 1994年， Stemmer將 DNA重組方法引用到酶分子的定向進化中。重復(fù)循環(huán)，直至得到預(yù)期性狀的酶。 ? 此法突變具有一定的密碼偏向性。 ? 分子育種 DNA改組原理 ； ； 段復(fù)性； 2244步后可獲得全 DNA片段片段 單個基因的 DNA改組 ? 從突變體基因庫中分離出的 DNA片段用脫氧核糖核酸酶 I隨機切割得到的隨機片段 ? 經(jīng)過不加引物的多次PCR循環(huán) ? 在 PCR循環(huán)過程中，隨機片段之間互為模板和引物進行擴增，直到獲得全長的基因， ? 這導(dǎo)致來自不同基因片段之間的重組 基因家族改組技術(shù) (family shuffling) ? 采用基因家族的改組效果明顯高于單個基因的改組效果。 高通量篩選技術(shù) ? 突變微生物分離 ? 瓊脂板涂布法在特殊條件下培養(yǎng)突變菌通過宿主菌的生長情況、培養(yǎng)基顏色、特定反應(yīng)的出現(xiàn)等判斷是否具有目的基因。溶解血栓，目前進行 tPA蛋白質(zhì)工程的研究主要是構(gòu)建長半衰期的 tPA 突變體。 。 枯草桿菌蛋白酶 ? 枯草桿菌蛋白酶是重要的工業(yè)用酶。 ? 流式細(xì)胞計數(shù)法 :細(xì)胞經(jīng)熒光染色后，通過 高速流動系統(tǒng)，排成單行，逐個通過流式細(xì) 胞計數(shù)儀進行測定。 ?突變體基因篩選能否成功的關(guān)鍵是將基因的表型和能通過定量表征的篩選手段緊密聯(lián)系。 DNA改組技術(shù) (DNA shuffling) ? 又稱有性 PCR，指 DNA分子的體外重組，是基因在分子水平上進行有性重組。 ? 關(guān)鍵是控制 DNA的突變頻率。 定向進化的
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