《蛋白質(zhì)工程》ppt課件-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 ? 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析 ? ? 結(jié)構(gòu)、功能的設(shè)計(jì)和預(yù)測(cè) ? 創(chuàng)造和改造 兩個(gè)戰(zhàn)略 ?合理設(shè)計(jì) 蛋白質(zhì)計(jì)算機(jī)設(shè)計(jì)。 ? 國(guó)外有許多研究機(jī)構(gòu)正在致力于研究蛋白質(zhì)與核酸、酶抑制劑與蛋白質(zhì)的結(jié)合情況，以開(kāi)發(fā) 具有高度專一性的藥用蛋白質(zhì)。 計(jì)算機(jī)輔助蛋白質(zhì)設(shè)計(jì) ? 計(jì)算機(jī)輔助蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)（ＣＡＰＤ）是指在蛋白質(zhì)工程中，應(yīng)用計(jì)算機(jī)技術(shù)，通過(guò)對(duì)已知的蛋白質(zhì)順序、分子構(gòu)象、結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系等數(shù)據(jù)的分機(jī)處理，預(yù)測(cè)和評(píng)估蛋白質(zhì)改造中各種方案，做出最佳選擇，具體地講，是蛋白質(zhì)工程中蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)的軟件的研究。 定向進(jìn)化 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 多樣化， Diversification: 在此步驟中常用的技術(shù)是易錯(cuò) PCR和 DNA改組。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果將執(zhí)行一個(gè)以上的回合。 定向進(jìn)化與自然進(jìn)化的差別 定向進(jìn)化的一般過(guò)程 酶 定向進(jìn)化的意義 ? 酶作為生物催化劑其專一性和高效性是一般催化劑所不能比擬的，但是天然酶的許多性質(zhì)不適應(yīng)工業(yè)生產(chǎn)的條件。 ? 1993年， Arnold研究組提出易錯(cuò) PCR的方法。這個(gè)過(guò)程可通過(guò)靈敏的篩選方法，選擇陽(yáng)性突變子。 ? 此法的不足之處： ? 靶序列長(zhǎng)度一般在 ，應(yīng)用范圍有限； ? 中性突變較多； ? 較為耗時(shí)、費(fèi)力； ? 獲得的 DNA序列中堿基的轉(zhuǎn)換高于顛換。 ? 通過(guò)改變單個(gè)基因（或基因家族）原有的核苷酸序列創(chuàng)造新基因，并賦予表達(dá)產(chǎn)物以新功能。 ?為加快分離目的基因的過(guò)程，已建立起多種在基因發(fā)現(xiàn)上具有“高通量”性能的篩選方法。 酶活力檢測(cè) ? 反應(yīng)產(chǎn)物： 顯色 pH指示劑顯色 pH指示劑顯色，分光光度計(jì)和熒光酶標(biāo)儀 ? 通過(guò)檢測(cè)底物消耗或產(chǎn)物生成進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)： GC/HPLC，使用較短的柱子以縮短分析時(shí)間 ? 同位素標(biāo)記底物 ：質(zhì)譜 ? 熱力學(xué)紅外檢測(cè) 噬菌體顯示篩選模式 pH指示劑顯色高通量篩選 產(chǎn)物顯色篩選 熒光產(chǎn)物篩選 基于比色法和熒光檢測(cè) 的高通量篩選 蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用實(shí)例 ? 胰蛋白酶 ? 金屬硫蛋白 ? 人白細(xì)胞介素 2 ? 組織纖溶酶原激活因子 ? 枯草桿菌蛋白酶 組織纖維蛋白溶酶原激活因子 ? 組織纖維蛋白溶酶原激活因子 (tPA)是一種血漿糖蛋白，其功能是將單鑰活性形式的血淺纖溶酶原（ plg)激活，轉(zhuǎn)變成纖溶酶。朱榴琴等人采用定點(diǎn)突變和隨機(jī)突變的方法，對(duì)枯草桿菌堿性蛋白酶 E基因進(jìn)行改造，突變后的基因插入大腸桿菌 — 枯草桿菌穿梭質(zhì)粒中，在堿性和中性蛋白酶缺陷型的枯草桿菌 DBl04 中進(jìn)行表達(dá)，得到突變的堿性蛋白酶，各種突變酶具有抗氧化和增加穩(wěn)定性的特點(diǎn)，具備了工業(yè)用酶的
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