【正文】 與皮膚之間的比例分配。此外，制劑中的成分如表面活性劑、藥物濃度、系統(tǒng)的給藥面積都是影響藥物透皮吸收的因素?，F(xiàn)在除了小部分所需藥量少或者具有較高溶解度的小分子藥物，大部分藥物的透皮給藥速率都達不到理想效果，所以藥物透皮速率的提高是研究的重點。吡喹酮分子式為C19H24N2O2，乃白色微苦的結晶性粉末，易吸潮，難溶于水，易溶于氯仿等有機溶媒。 Rashad et al., 2009。動物口服14C標記吡喹酮后，絕大部分吡喹酮在小腸內迅速吸收，藥物進入肝臟內被迅速代謝形成羥基代謝物，肝門靜脈血中血藥濃度可較周圍靜脈血藥濃度高10倍以上。吡喹酮口服存在強烈的肝臟“首過效應”（first pass effect），代謝快且生物利用度低（Robert et al., 2011），即藥物經由肝門靜脈進入肝臟后大部分被非常迅速地代謝，主要為吡喹酮的4羥基環(huán)己酰類似物，殺蟲效果為原藥的1/500，僅少量未代謝的吡喹酮原藥進入體循環(huán)（Andrews P et al., 1983）。 吡喹酮的毒性與副作用（1）吡喹酮的毒性 吡喹酮的毒性明顯低于吐酒石酸，30多年里已經成功治療了數百萬的血吸蟲病患者（Cioli et al., 2003。消旋吡喹酮、左旋吡喹酮、右旋吡喹酮一次灌服后對小鼠的急性半數致死量分別是2553，2463和1344 mg/kg，小鼠給藥后24h死亡率90%以上，表明左旋吡喹酮與消旋吡喹酮對小鼠的半數致死量相近明顯小于右旋吡喹酮的，左旋與消旋吡喹酮LD50無明顯差異，右旋吡喹酮的毒性更大（黃婉蕓等，1988）。治療劑量吡喹酮對肝實質細胞超微結構有較廣泛的損害：線粒體腫脹，內質網擴張和減少，內質網膜上核蛋白體的減少等。成人副反應高于兒童，女性副反應高于男性，大劑量治療比低劑量治療副反應發(fā)生率高，相同劑量時，單次給藥高于分批給藥。實驗證明：高濃度吡喹酮對神經肌肉接頭有抑制作用，氯化鉀對吡喹酮所致的抑制作用具有拮抗功效。 有臨床數據表明，維生素B6可以一定程度降低吡喹酮化療血吸蟲病副反應的發(fā)生，這一作用主要表現(xiàn)在神經、消化系統(tǒng)方面（李以義等，2001）。血吸蟲的攣縮與Ca2+有關，吡喹酮可增加蟲體Ca2+通透性，使得細胞內鈣離子的丟失。日本血吸蟲成蟲經過吡喹酮處理后，其ATP酶活力明顯受到抑制 (熊希凱等，1980) 。這兩方面缺一不可，只有在蟲體經過吡喹酮作用受損后，宿主的免疫機制才能發(fā)揮作用。最近有研究表明，大劑量灌胃吡喹酮或長時間反復灌服吡喹酮，可以直接抑制肺部的蟲卵肉芽腫（許永良，2007）。吡喹酮在水中不溶，主要通過口服，口服給藥存在強烈的肝臟“首過效應”，進入體循環(huán)的有效藥量大大減少。 Mahmoud , 1987）。近幾年來，隨著現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)的迅速發(fā)展，透皮給藥成為國內外醫(yī)藥工作者研究的重點。 結果表明：吡喹酮透皮給藥對肝臟的毒性小于相同劑量的口服給藥組，致死率低。2條，1‰ 濃度的吡喹酮乙醇液，PEG液和霜劑均有很好的預防效果，防護率為100％（望西玉等，1996）。家兔的亞急性毒性試驗中，未見涂藥部位皮膚毛囊有損害，心電圖、肝、腎功能以及外周血象檢測，未見異常（王在華等，1994）。血吸蟲病本質上是一種抗原抗體復合物病，肉芽腫周圍層狀包裹結構的形成，本質上是為了阻止蟲卵內異物的擴散，但同時也阻止了藥物滲透進入肉芽腫內部作用于主要致病因子——蟲卵可溶性抗原。因此，探討吡喹酮透皮給藥對血吸蟲卵肉芽腫的影響具有一定的理論基礎和可行性。當透皮組方一定時，給藥劑量決定著血藥濃度的大小，既要求達到蟲卵肉芽腫的治療要求，又不會對動物器官造成損害。吡喹酮是一種廣譜的抗血吸蟲藥物，如果設計的新型給藥策略能夠開辟治療肉芽腫的新途徑，無疑將給數以萬計的血吸蟲病患者帶來福音。（2）混合溶劑的配比 5種常見溶劑乙二醇苯醚、二氧六環(huán)、油酸、二甲亞砜、四氫呋喃溶劑兩兩混合，都可以良好互溶。取PZQ正辛醇標準溶液于紫外可見分光光度計中掃描出其最大吸收波長為 λmax=319 nm。mL1 10 14 18 22 26 30 A ： : PZQ溶液標準工作曲線 Fig. The standard curve of PZQ solutions 線形回歸后得到PZQ標準溶液的回歸方程為： A=－ R2=其中，A為吸光度，C為PZQ溶液的濃度。 mL NaH2PO4溶液至100 mL容量瓶， mL Na2HPO4溶液加入該容量瓶中，振蕩，靜置。倒入分液漏斗，搖晃，靜置分層，分離，即得到被磷酸鹽緩沖液飽和的正辛醇和被正辛醇飽和的磷酸鹽緩沖液（吳銀寶等，2005）。取正辛醇相清液于紫外可見分光光度儀上測其吸光度，于回歸方程上求得其在正辛醇相中的濃度，根據式（1）計算PZQ的在正辛醇—水兩相中的分配系數P。 PZQ透皮劑對肝臟的毒性試驗 PZQ藥劑的配制及給藥過程 灌服藥物制劑的制備：稱量所需質量PZQ粉末，溶于10ml純凈水中，恒溫振蕩器中震蕩1h，制成懸濁液。 肝臟毒性試驗動物模型的建立20只家兔，每只體重23kg，在整個實驗過程中，家兔被提供清潔水源與動物飼料并能夠在籠中自由活動。第三組（灌胃組 II ）：400mg/kg，PZQ灌胃給藥，其余步驟同第二組處理。觀察不同濃度以及不同給藥方式，PZQ對家兔肝臟的影響。 日本血吸蟲卵肉芽腫的治療實驗將陽性釘螺每10只分裝在1個小燒杯（50ml）中，加去氯水至杯口，置一小塊網眼窗紗壓入水面下4mm處，防治釘螺外爬，置于光源下，溫度2028℃，2h后觀察杯口水面的尾蚴。將家兔仰臥固定于木板上，腹部用剪毛刀剪出22 cm2無毛區(qū)域。其中A組為空白對照組，未進行給藥治療。連續(xù)給藥4天，間隔2天之后，再給藥4天，2天后解剖。公式如下：直徑R=（A+B）/2，面積S=（AB），體積V=(πAB2) /6（傅行禮等，2007）。乙二醇苯醚中的羥基可以和PZQ中的酰胺健形成分子間氫鍵，有利于乙二醇苯醚對PZQ的溶劑化作用，同時，由于酰胺鍵含有一個三中心四電子π鍵，極性較弱，和醚鍵類似，所以PZQ在乙二醇苯醚中的溶解性能較好。 藥物在混合溶劑中的溶解度一般是各單一溶劑溶解度的相加平均值，PZQ在二甲亞砜四氫呋喃、二甲亞砜二氧六環(huán)的混合溶劑中即是這種情況。mL1。那么對于1個50kg的病人，初始兩天每次用藥500750mg，如果用300mg/ml的溶解度配置的PZQ透皮劑。蒸發(fā)透皮給藥系統(tǒng)是由透皮的藥物、揮發(fā)性溶劑和非揮發(fā)溶劑組成（Morgan T M et al., 1998）。 PZQ的油水分配系數及其透皮性能預測 PZQ在油/水兩相溶液間分配系數的測定通過混合溶液溶解度的測定，確定了PZQ的1,4二氧六環(huán)二甲亞砜和四氫呋喃二甲亞砜體系具有研究價值，故測量了這兩組體系在pH 、溫度37℃時，不同二甲亞砜含量下正辛醇水體系中的分配系數并作圖，如圖32所示：圖32 37℃下兩種混合溶媒中PZQ在正辛醇水體系中的分配系數及其對數值B:二甲亞砜與四氫呋喃為溶劑的混合溶媒 C:二甲亞砜與1，4二氧六環(huán)為溶劑的混合溶媒 The partition coefficients and their logarithm of PZQ of two mixed solutions in octanolwater system at 37℃ B: DMSOTHF solvent C: DMSO1,4dioxane solvent PZQ在純的四氫呋喃、1, 、可見PZQ在不同溶媒中形成的溶液在正辛醇水兩相中的分配具有差異，這說明PZQ在兩相之間的分布不是以純PZQ分子的形式，而是以PZQ與溶媒形成的溶劑化物進行的。PZQ是透皮的藥物，在二甲亞砜和四氫呋喃的混合溶媒中溶解度較高（200~ 300mg/ml）,隨著四氫呋喃的揮發(fā)，不會出現(xiàn)藥物結晶析出的現(xiàn)象。 此外，四氫呋喃沸點較低，且屬于易揮發(fā)的溶劑，因此在給藥時是一種蒸發(fā)透皮給藥系統(tǒng)。mL1，PZQ在溶媒中有較高的溶解度，不僅可以提高PZQ滲透進入皮膚的熱力學活性，而且也是PZQ透皮劑應用于臨床的一個必要條件。 PZQ在1,4二氧六環(huán)二甲亞砜和四氫呋喃二甲亞砜體系的混合溶媒中溶解度較大，濃度維持在200~300mg油酸分子中雖然存在一個羧基，但是分子結構成鏈狀，極性非常小，與PZQ的分子結構相差較大，所以PZQ在油酸中的溶解度非常低。 PZQ在混合溶媒中的溶解度 為了便于分析PZQ在不同溶媒中的溶解度的差異，首先將5種溶媒的理化性質、化學結構列于表32：表32 五種溶媒的理化性質和分子結構Table 32 The molecular structures, physical andchemical properties of five solutions溶媒 分子量 沸點（℃） 溶媒性質二甲亞砜 94 189 溶于水、乙醚、苯等四氫呋喃 72 66 溶于水和多種有機溶劑油酸 172 286 不溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿乙二醇苯醚 138 240 可溶于醇，醚及堿性水溶液1,4二氧六環(huán) 88 101 與水混溶，可混溶于多數有機溶劑 35℃時，PZQ在二甲亞砜與其他溶劑的混合溶液中的溶解度隨二甲亞砜在其中的比例的變化關系如圖31所示。 肉芽腫密集程度測量方法：先在適當大小的紙板上裁剪11cm2大小的正方形空洞，將紙板置于肝臟表面，計數肝臟表面每平方厘米內肉芽腫的數目，取至少30組數據，取平均值。B組為灌胃給藥組。 所述進行PZQ藥劑的配制，備用。10）條。用組織切片機將組織塊切成厚度為4 μm的連續(xù)切片，漂片后貼于載玻片上，60℃熔蠟。第五組（透皮組 II ）400mg/kgPZQ透皮給藥，其余步驟同第二組處理。第一組（正常對照組）：不給藥，正常條件飼養(yǎng)。透皮制劑的制備：稱量所需質量PZQ粉末，溶于所需體積的乙二醇苯醚中，配制為300mg/ml的溶液，恒溫振蕩器中震蕩1h，制成清亮透明溶液待用。mL1PZQ，為PZQ混合溶媒溶液的體積，為PZQ在正辛醇相中的濃度，Ｖ為正辛醇相的體積。mL1的PZQ的混合溶媒溶液2 mL，置于50 mL磨口三角瓶中，加入15 mL正辛醇（由磷酸鹽溶液飽和）和15 mL磷酸鹽溶液（由正辛醇飽和）。（3）正辛醇磷酸鹽兩相飽和溶液的制備移取100 mL正辛醇至250mL磨口三角瓶，移取100 mL磷酸鹽緩沖液加至瓶中。2H2O ，置于燒杯中，加蒸餾水攪拌溶解，移至50 mL容量瓶，加蒸餾水至刻度，定容。不同濃度對應的PZQ吸光度值見表1。 PZQ在水油兩相溶液間分配系數的測定（1）工作曲線的繪制準確稱取PZQ適量，加正辛醇溶解后，定量移至50mL容量瓶中，定容，制得112230mg靜止1h， 微孔濾膜過濾，取得透明澄清液體，放入已知質量的瓶中減壓加熱揮發(fā)，最后稱重。 多組分的透皮劑對藥物的滲透能夠達到協(xié)同促進的作用，目前研制的透皮促進劑大部分采用多組分體系（司紅彬，2007）。課題的目的是探討吡喹酮透皮給藥方式對肉芽腫的作用。透皮給藥與傳統(tǒng)的口服給藥相比，有著更高的血藥濃度并可持續(xù)相對長的時間，更有利于吡喹酮對肉芽腫的直接作用和調動宿主的免疫功能，消退蟲卵肉芽腫。血吸蟲病危害如此之大，是由于血吸蟲卵在人體組織內尤其是肝、腸等部位大量沉積，形成肉芽腫，破壞組織正常功能，最終形成器官纖維化、硬化，最終導致人畜死亡。王在華應用吡喹酮透皮劑對動物日本血吸蟲病進行系列治療研究，篩選出代號8604213的4% 吡喹酮透皮劑減蟲率（%）最佳。有文章報道了選用75%乙醇，PEG400和基質霜為溶劑，將吡喹酮原藥配制成1‰濃度的吡喹酮乙醇液，PEG液和霜劑。因此研究吡喹酮透皮劑具有重要的實際意義（李小紅，2012）。 吡喹酮透皮給藥的研究進展吡喹酮的口服給藥的吸收代謝屬一級動力學過程，藥時曲線會出現(xiàn)“峰谷”，這不利于藥物療效的完美發(fā)揮。如果要完全或局部除去這些寄生蟲則需要將其暴露在更高濃度的藥物中更長一段時間（Andrews et al, 1983。這些實驗均提示若能長時間保持吡喹酮在血液中的有效濃度，有可能對蟲卵肉芽腫的消退有更加積極的作用。一般認為吡喹酮殺死宿主內的血吸成蟲，阻斷了新蟲卵的排放，停止免疫反應作用, 最終早期蟲卵肉芽腫逐漸消退，機體恢復正常的免疫功能的。（3）吡喹酮對皮層的損害及宿主的免疫應答 吡喹酮對血吸蟲的皮層的超微結構具有迅速而明顯的損害，血吸蟲皮層被破壞后失去其重要的生理、防御功能，蟲體被破壞后直接影響到蟲體的吸收、代謝、排泄功能，更重要的是蟲體體表抗原暴露后，失去了免疫偽裝，為宿主抗血吸蟲特異性抗體的免疫攻擊提供了靶點，使得血吸蟲易受到宿主的免疫攻擊而死亡。(肖樹華等，1981a)。此外，對于各類精神疾病和癲癇患者，用此藥應給予充分觀察。一般經抗過敏處理，212天消失。心血管系統(tǒng)反應有自覺癥狀者不多，少數患者表現(xiàn)出心悸、胸悶、早搏，少數可出現(xiàn)頻繁室性早搏（824次/分鐘）、嚴重心律紊亂和阿斯二氏綜合征。但是二者病變性質相同都為可逆性改變（褚連仲等，1983）。國內外報道未見吡喹酮有致突變、致畸、致癌作用，僅Bueding稱觀察到服