【正文】 腫體積的影響 41 PZQ透皮給藥對肉芽腫的作用 42 肉芽腫消退機制的探討 444. 結(jié)論 46參考文獻 47致 謝 52附錄 53摘 要血吸蟲病危害嚴重，傳播范圍廣泛，對全球人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展帶來嚴重威脅。 Praziquantel。 血吸蟲的生活史分卵、毛蚴、母胞蚴、子胞蚴、尾蚴、童蟲、成蟲等7個階段。致敏的T細胞再次受到同種抗原刺激后產(chǎn)生各種淋巴細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞等聚集在蟲卵周圍，形成肉芽腫。不同患者對血吸蟲感染的反應(yīng)亦存在個體差異，比如，疫區(qū)長期反復(fù)小量感染的人群與易感染人群初次感染臨床征象差異迥然，前者因產(chǎn)生獲得性免疫故癥狀輕微，后者則呈現(xiàn)出急性感染癥狀。近5年內(nèi)全國釘螺面積呈持續(xù)上升（馬魏等，2006）。（2）抗血吸蟲藥物研究概況 自血吸蟲病第一個病原治療藥物酒石酸銻鉀于1918年用于治療埃及血吸蟲病以來，已經(jīng)經(jīng)歷了半個多世紀，但是酒石酸銻鉀療程長、毒性大、靜脈注射不方便而且口服吸收很不規(guī)律，具有明顯缺點。吡喹酮毒性很低，病人耐受性良好，加上療程短、口服方便等優(yōu)點，在全球已被廣泛應(yīng)用。自20世紀80年代以來，透皮給藥系統(tǒng)成為各國醫(yī)藥工作者研究的熱點，我國空軍南京醫(yī)院研制的可樂定貼片、東莨菪堿貼片先后被批上市 (周建平等，2008)。實際上，由于皮膚組織的非均質(zhì)性，皮膚中的淋巴管、毛細血管、藥物及載體對皮膚的影響，會使得藥物經(jīng)皮轉(zhuǎn)運過程更加復(fù)雜（周建平，2008）。 熔點低的藥物容易透過皮膚，這是由于藥物的穩(wěn)態(tài)經(jīng)皮透過量與膜兩側(cè)的濃度梯度成正比，而其濃度梯度與藥物的溶解度成正比，溶解度的對數(shù)值與熔點的倒數(shù)成正比，因此，熔點低的藥物易通過皮膚（周建平，2008）。(林寧等,2007)（3）制劑和劑型的影響藥物制劑的組成會影響藥物的釋放進而影響藥物的吸收。由于其高效、低毒、價廉等優(yōu)點，世界衛(wèi)生組織將吡喹酮作為抗血吸蟲藥物的首選藥物（WHO Expert Committee. 2002。感染動物較正常動物的LD50顯著降低，說明吡喹酮的毒性與患病動物的健康狀態(tài)有關(guān)。有時會發(fā)生再生障礙性貧血、糖尿病、血尿、過敏性紫癬、類赫氏反應(yīng)，但均少見。即吡喹酮對蟲卵肉芽腫的緩解是間接的。吡喹酮透皮給藥治療動物血吸蟲病的最低有效劑量、血濃測定及毒性觀察實驗，進一步證明吡喹酮透皮給藥的可能性及可靠性。同時，吡喹酮既然能透過結(jié)構(gòu)緊密的皮膚角質(zhì)層進入體循環(huán)，那么此時的吡喹酮也可能夠跨越肉芽腫遞送屏障，滲透到肉芽腫的內(nèi)部，阻斷肉芽腫的發(fā)展。mL1的PZQ標準溶液。將磨口三角瓶至于恒溫振蕩器中，37℃恒溫振蕩48h，靜置1h。解剖實驗兔并做組織切片，HE染色。C組為PZQ的乙二醇苯醚溶液透皮給藥組（PZQ溶液的濃度為300 mg/mL）。mL1，從圖中可知，當二甲亞砜為25%時，PZQ在這兩種混合溶媒中的溶解度都能達到320mg所以，當二甲亞砜為25%時，四氫呋喃和二甲亞砜的混合溶液可能更有研究的價值。 此外，從圖中可以發(fā)現(xiàn)，隨著二甲亞砜在其余四種溶液（四氫呋喃、油酸、乙二醇苯醚和二氧六環(huán)）中成分的增加，PZQ的溶解度表現(xiàn)出不同的變化趨勢：PZQ在四氫呋喃中的溶解度增加，當二甲亞砜濃度為25%時，混合溶解度達到最大值，然后溶解度緩慢下降；PZQ在乙二醇苯醚中的溶解度則大大降低，混合溶媒的溶解度均低于PZQ在純乙二醇苯醚或者純二甲亞砜中的溶解度；PZQ在四氫呋喃、油酸中的溶解度變化表現(xiàn)的很平緩，混合溶媒的溶解度逐漸降低或者逐漸增加。家兔于感染尾蚴后第42d隨機分作三組，每組7只，進行透皮治療實驗。第二組（灌胃組 I ）：200mg/kg，PZQ灌胃給藥，給藥4d，停2d，再給藥4d，2d后解剖取肝組織。將磨口三角瓶至于恒溫振蕩器，37℃條件下恒溫振蕩2h，靜置1h。計算1ml溶液中PZQ的質(zhì)量。因此，血吸蟲蟲卵肉芽腫是血吸蟲病治療的核心問題之一，也是長期阻礙血吸蟲病治療的重大技術(shù)難題。此外，吡喹酮的給藥量依據(jù)動物體重來確定，如牛、馬等大型家畜，每次需口服大量的吡喹酮，給藥過程很不方便。吡喹酮的殺蟲過程有2個方面：藥物對蟲體的直接作用和宿主的免疫效應(yīng)。神經(jīng)肌肉系統(tǒng)反應(yīng)，以頭暈、頭痛、乏力、四肢酸痛等多見，其次為失眠、嗜睡、多汗、肌顫動等，少數(shù)患者甚至會出現(xiàn)精神失常、癔癥、癲癇發(fā)作。吡喹酮原藥的清除半衰期，其代謝物為45h（周述龍等，2001）。 吡喹酮治療血吸蟲病概述 吡喹酮概述吡喹酮又名環(huán)吡異喹酮（Praziquantel，PZQ，EMBAY 8440），系雜環(huán)喹啉嗪衍生物，我國工業(yè)生產(chǎn)采用以異喹啉為起始原料，經(jīng)Reissert反應(yīng)、催化氫化、?；?、環(huán)合、水解以及酰化制得（Seubert et al., 1977）。皮膚的角質(zhì)層細胞吸水膨脹后，原先緊密的“泥磚”結(jié)構(gòu)變得疏松，藥物的通透性增強。一般用藥物在辛醇—水兩相間的分配系數(shù)（P）來表征藥物在油/水兩相中的分配能力（Kim, 2000）。皮膚表面藥物從給藥系統(tǒng)釋放通過表皮通過附屬器角質(zhì)層通過細胞間穿過角質(zhì)層細胞真皮汗腺毛囊、皮脂腺毛細血管吸收體循環(huán) 圖12 經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的吸收途徑 Absorption approach of TTDS 皮膚附屬器吸收藥物的速率遠高于表皮吸收藥物的速率， %，故該途徑只是一個次要的吸收方式。經(jīng)皮給藥在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中有著悠久的歷史。 敵百蟲是一種有機磷化合物，便宜且毒性低，用于治療人體寄生蟲病有30多年歷史，對埃及血吸蟲病療效較好，曾被廣泛用于治療埃及血吸蟲病。20世紀初，科學(xué)家就想通過研制血吸蟲疫苗來預(yù)防血吸蟲病的感染與傳播。但由于近年來全球整體氣候的改變以及經(jīng)濟發(fā)展速度的加快等客觀因素，中國血吸蟲病的防治工作面臨更加巨大挑戰(zhàn)，近幾年血吸蟲病疫情下降速率減慢，血吸蟲病疫情小規(guī)模爆發(fā)的威脅仍然存在。最后，慢性蟲卵結(jié)節(jié)外周慢性炎性病變逐漸減弱，假結(jié)核結(jié)節(jié)中的類上皮細胞為纖維母細胞代替，層層包繞使結(jié)節(jié)纖維化，蟲卵肉芽腫反應(yīng)雖然可將蟲卵破壞，但宿主的免疫病理的強烈反應(yīng)造成的病理損害，可導(dǎo)致干線性肝纖維化。童蟲移行經(jīng)過肺肝時，可引起肺部組織點狀出血及白細胞浸潤，病灶的規(guī)模與感染的程度成正比，這種血管炎性病變又稱為童蟲性肺炎。渦蟲綱為自主生活而吸蟲綱和絳蟲綱為寄生生活。研究結(jié)果不僅對當前血吸蟲病的治療具有重要的臨床意義，而且為利用透皮給藥系統(tǒng)治療其他類似疾病提供重要的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。在制備了濃度為300mg/ml的吡喹酮透皮劑，確定它在體內(nèi)能夠維持較高的血藥濃度并持續(xù)較長時間的基礎(chǔ)上，首先通過藥物的毒性試驗以確定合適的經(jīng)皮給藥劑量，然后對血吸蟲病動物模型實施透皮給藥治療并探討吡喹酮經(jīng)皮給藥對肉芽腫的作用。我國目前仍有30多萬血吸蟲病患者，近萬頭耕牛受到感染血吸蟲（雷正龍等，2010）。成熟的尾蚴鉆出釘螺體外，浮游于水體表面，脫去尾巴鉆入皮膚轉(zhuǎn)變成童蟲，童蟲進入血管移至門靜脈系統(tǒng)處寄生，22天后發(fā)育為成蟲，周而復(fù)始，這就是血吸蟲的生活史，如圖11所示。雌蟲剛產(chǎn)出的未成熟蟲卵沉積在組織內(nèi)不形成典型的蟲卵結(jié)節(jié)，其周圍的宿主組織無反應(yīng)或輕微的反應(yīng)，僅引起局部結(jié)締組織輕度增生。晚期血吸蟲病是由于患者反復(fù)重度感染，經(jīng)過較長時間的發(fā)展而形成。為解決中國能源匱乏和水資源分布不均，這幾年在血吸蟲病疫區(qū)大力興建大壩、溝渠及南水北調(diào)工程，很大程度地改變了這些地區(qū)的江水湖泊流域，這些都可能導(dǎo)致血吸蟲傳染源的擴散和遷移。 呋喃丙胺（F30066）于1960年由上海醫(yī)藥工業(yè)研究所開發(fā)研制，是我國首次開發(fā)的非銻劑類抗血吸蟲藥物。 透皮給藥概述 透皮給藥發(fā)展概況透皮給藥系統(tǒng)（transdermal drug delivery system, TDDS）顧名思義，即藥物通過皮膚吸收產(chǎn)生作用的給藥方式：藥物透過皮膚，由毛細血管吸收進入全身血液循環(huán)并在病灶部位產(chǎn)生療效的給藥方式。（3）一次給藥能夠使得藥物以恒定的速度進入人體，藥物作用時間長，減少用藥次數(shù)。但對于高脂溶性的藥物，活性表皮則對其透皮吸收有很大的阻礙。老年人皮膚干燥，萎縮，皮膚附屬器功能減弱，所以藥物吸收能力較差。此外，制劑中的成分如表面活性劑、藥物濃度、系統(tǒng)的給藥面積都是影響藥物透皮吸收的因素。動物口服14C標記吡喹酮后，絕大部分吡喹酮在小腸內(nèi)迅速吸收，藥物進入肝臟內(nèi)被迅速代謝形成羥基代謝物，肝門靜脈血中血藥濃度可較周圍靜脈血藥濃度高10倍以上。治療劑量吡喹酮對肝實質(zhì)細胞超微結(jié)構(gòu)有較廣泛的損害：線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張和減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上核蛋白體的減少等。血吸蟲的攣縮與Ca2+有關(guān)，吡喹酮可增加蟲體Ca2+通透性，使得細胞內(nèi)鈣離子的丟失。吡喹酮在水中不溶，主要通過口服，口服給藥存在強烈的肝臟“首過效應(yīng)”，進入體循環(huán)的有效藥量大大減少。2條，1‰ 濃度的吡喹酮乙醇液，PEG液和霜劑均有很好的預(yù)防效果，防護率為100％（望西玉等，1996）。當透皮組方一定時，給藥劑量決定著血藥濃度的大小，既要求達到蟲卵肉芽腫的治療要求，又不會對動物器官造成損害。mL1 10 14 18 22 26 30 A ： : PZQ溶液標準工作曲線 Fig. The standard curve of PZQ solutions 線形回歸后得到PZQ標準溶液的回歸方程為： A=－ R2=其中，A為吸光度，C為PZQ溶液的濃度。 PZQ透皮劑對肝臟的毒性試驗 PZQ藥劑的配制及給藥過程 灌服藥物制劑的制備：稱量所需質(zhì)量PZQ粉末，溶于10ml純凈水中，恒溫振蕩器中震蕩1h，制成懸濁液。 日本血吸蟲卵肉芽腫的治療實驗將陽性釘螺每10只分裝在1個小燒杯（50ml）中，加去氯水至杯口，置一小塊網(wǎng)眼窗紗壓入水面下4mm處，防治釘螺外爬，置于光源下，溫度2028℃，2h后觀察杯口水面的尾蚴。公式如下：直徑R=（A+B）/2，面積S=（AB），體積V=(πAB2) /6（傅行禮等，2007）。那么對于1個50kg的病人，初始兩天每次用藥500750mg，如果用300mg/ml的溶解度配置的PZQ透皮劑。 此外，四氫呋喃沸點較低，且屬于易揮發(fā)的溶劑，因此在給藥時是一種蒸發(fā)透皮給藥系統(tǒng)。 PZQ在混合溶媒中的溶解度 為了便于分析PZQ在不同溶媒中的溶解度的差異，首先將5種溶媒的理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)列于表32：表32 五種溶媒的理化性質(zhì)和分子結(jié)構(gòu)Table 32 The molecular structures, physical andchemical properties of five solutions溶媒 分子量 沸點（℃） 溶媒性質(zhì)二甲亞砜 94 189 溶于水、乙醚、苯等四氫呋喃 72 66 溶于水和多種有機溶劑油酸 172 286 不溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿乙二醇苯醚 138 240 可溶于醇，醚及堿性水溶液1,4二氧六環(huán) 88 101 與水混溶，可混溶于多數(shù)有機溶劑 35℃時，PZQ在二甲亞砜與其他溶劑的混合溶液中的溶解度隨二甲亞砜在其中的比例的變化關(guān)系如圖31所示。10）條。透皮制劑的制備：稱量所需質(zhì)量PZQ粉末，溶于所需體積的乙二醇苯醚中，配制為300mg/ml的溶液，恒溫振蕩器中震蕩1h，制成清亮透明溶液待用。2H2O ，置于燒杯中，加蒸餾水攪拌溶解，移至50 mL容量瓶，加蒸餾水至刻度，定容。 多組分的透皮劑對藥物的滲透能夠達到協(xié)同促進的作用，目前研制的透皮促進劑大部分采用多組分體系（司紅彬，2007）。王在華應(yīng)用吡喹酮透皮劑對動物日本血吸蟲病進行系列治療研究，篩選出代號8604213的4% 吡喹酮透皮劑減蟲率（%）最佳。如果要完全或局部除去這些寄生蟲則需要將其暴露在更高濃度的藥物中更長一段時間（Andrews et al, 1983。(肖樹華等，1981a)。但是二者病變性質(zhì)相同都為可逆性改變（褚連仲等，1983）。吡喹酮無器官特異性蓄積現(xiàn)象，多次給藥，只有肝、腎中含量有所增加。比如：凝膠劑、乳膠劑軟膏中藥物吸收速度快于骨架型貼片中藥物吸收速度。女性皮膚較之男性薄，理論上透皮給藥吸收更好。透皮給藥系統(tǒng)中的藥物由給藥系統(tǒng)進入皮膚的過程如圖13（周建平，2008），首先，藥物從系統(tǒng)中擴散至角質(zhì)層，后繼續(xù)擴散，部分藥物會和角質(zhì)層結(jié)合形成藥物儲庫；其余藥物繼續(xù)擴散到活性表皮，藥物可結(jié)合于該層皮膚的受體，表皮內(nèi)的酶也可能對藥物有代謝作用；藥物繼續(xù)深入真皮層并被毛細血管吸收進入體循環(huán)，在真皮內(nèi)也可能形成藥物儲庫或者被酶代謝。 透皮給藥的過程（1）藥物經(jīng)皮轉(zhuǎn)運的途徑 皮膚是一道天然的保護屏障，用于抵御外來的有害物質(zhì)入侵機體和體液的過度蒸發(fā)，同樣的，皮膚的屏障作用也使得普通的藥物不能順利地透過皮膚進入生物體內(nèi)。 傳統(tǒng)的皮膚用藥僅用來治療局部皮膚疾病，過去認為藥物難以透過皮膚角質(zhì)層以達到全身治療的目的。呋喃丙胺副作用較多且發(fā)病率個體差異較大，男性多于女性，成人多于兒童，藥物副反應(yīng)的頻率和強度與給藥劑量也有關(guān)系。由于血吸蟲防治的歷史遺留問題，我國缺乏高效有序的血防機構(gòu)進行組織管理。 我國血吸蟲病疫情現(xiàn)狀 血吸蟲病流行于長江流域以南的江浙滬、兩湖兩廣等共12個省、市、自治區(qū)。