【正文】 腫體積的影響 41 PZQ透皮給藥對(duì)肉芽腫的作用 42 肉芽腫消退機(jī)制的探討 444. 結(jié)論 46參考文獻(xiàn) 47致 謝 52附錄 53摘 要血吸蟲(chóng)病危害嚴(yán)重，傳播范圍廣泛，對(duì)全球人類(lèi)健康和畜牧業(yè)發(fā)展帶來(lái)嚴(yán)重威脅。 Praziquantel。 血吸蟲(chóng)的生活史分卵、毛蚴、母胞蚴、子胞蚴、尾蚴、童蟲(chóng)、成蟲(chóng)等7個(gè)階段。致敏的T細(xì)胞再次受到同種抗原刺激后產(chǎn)生各種淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等聚集在蟲(chóng)卵周?chē)纬扇庋磕[。不同患者對(duì)血吸蟲(chóng)感染的反應(yīng)亦存在個(gè)體差異，比如，疫區(qū)長(zhǎng)期反復(fù)小量感染的人群與易感染人群初次感染臨床征象差異迥然，前者因產(chǎn)生獲得性免疫故癥狀輕微，后者則呈現(xiàn)出急性感染癥狀。近5年內(nèi)全國(guó)釘螺面積呈持續(xù)上升（馬魏等，2006）。（2）抗血吸蟲(chóng)藥物研究概況 自血吸蟲(chóng)病第一個(gè)病原治療藥物酒石酸銻鉀于1918年用于治療埃及血吸蟲(chóng)病以來(lái)，已經(jīng)經(jīng)歷了半個(gè)多世紀(jì)，但是酒石酸銻鉀療程長(zhǎng)、毒性大、靜脈注射不方便而且口服吸收很不規(guī)律，具有明顯缺點(diǎn)。吡喹酮毒性很低，病人耐受性良好，加上療程短、口服方便等優(yōu)點(diǎn)，在全球已被廣泛應(yīng)用。自20世紀(jì)80年代以來(lái)，透皮給藥系統(tǒng)成為各國(guó)醫(yī)藥工作者研究的熱點(diǎn)，我國(guó)空軍南京醫(yī)院研制的可樂(lè)定貼片、東莨菪堿貼片先后被批上市 (周建平等，2008)。實(shí)際上，由于皮膚組織的非均質(zhì)性，皮膚中的淋巴管、毛細(xì)血管、藥物及載體對(duì)皮膚的影響，會(huì)使得藥物經(jīng)皮轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程更加復(fù)雜（周建平，2008）。 熔點(diǎn)低的藥物容易透過(guò)皮膚，這是由于藥物的穩(wěn)態(tài)經(jīng)皮透過(guò)量與膜兩側(cè)的濃度梯度成正比，而其濃度梯度與藥物的溶解度成正比，溶解度的對(duì)數(shù)值與熔點(diǎn)的倒數(shù)成正比，因此，熔點(diǎn)低的藥物易通過(guò)皮膚（周建平，2008）。(林寧等,2007)（3）制劑和劑型的影響藥物制劑的組成會(huì)影響藥物的釋放進(jìn)而影響藥物的吸收。由于其高效、低毒、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)，世界衛(wèi)生組織將吡喹酮作為抗血吸蟲(chóng)藥物的首選藥物（WHO Expert Committee. 2002。感染動(dòng)物較正常動(dòng)物的LD50顯著降低，說(shuō)明吡喹酮的毒性與患病動(dòng)物的健康狀態(tài)有關(guān)。有時(shí)會(huì)發(fā)生再生障礙性貧血、糖尿病、血尿、過(guò)敏性紫癬、類(lèi)赫氏反應(yīng)，但均少見(jiàn)。即吡喹酮對(duì)蟲(chóng)卵肉芽腫的緩解是間接的。吡喹酮透皮給藥治療動(dòng)物血吸蟲(chóng)病的最低有效劑量、血濃測(cè)定及毒性觀察實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證明吡喹酮透皮給藥的可能性及可靠性。同時(shí)，吡喹酮既然能透過(guò)結(jié)構(gòu)緊密的皮膚角質(zhì)層進(jìn)入體循環(huán)，那么此時(shí)的吡喹酮也可能夠跨越肉芽腫遞送屏障，滲透到肉芽腫的內(nèi)部，阻斷肉芽腫的發(fā)展。mL1的PZQ標(biāo)準(zhǔn)溶液。將磨口三角瓶至于恒溫振蕩器中，37℃恒溫振蕩48h，靜置1h。解剖實(shí)驗(yàn)兔并做組織切片，HE染色。C組為PZQ的乙二醇苯醚溶液透皮給藥組（PZQ溶液的濃度為300 mg/mL）。mL1，從圖中可知，當(dāng)二甲亞砜為25%時(shí)，PZQ在這兩種混合溶媒中的溶解度都能達(dá)到320mg所以，當(dāng)二甲亞砜為25%時(shí)，四氫呋喃和二甲亞砜的混合溶液可能更有研究的價(jià)值。 此外，從圖中可以發(fā)現(xiàn)，隨著二甲亞砜在其余四種溶液（四氫呋喃、油酸、乙二醇苯醚和二氧六環(huán)）中成分的增加，PZQ的溶解度表現(xiàn)出不同的變化趨勢(shì)：PZQ在四氫呋喃中的溶解度增加，當(dāng)二甲亞砜濃度為25%時(shí)，混合溶解度達(dá)到最大值，然后溶解度緩慢下降；PZQ在乙二醇苯醚中的溶解度則大大降低，混合溶媒的溶解度均低于PZQ在純乙二醇苯醚或者純二甲亞砜中的溶解度；PZQ在四氫呋喃、油酸中的溶解度變化表現(xiàn)的很平緩，混合溶媒的溶解度逐漸降低或者逐漸增加。家兔于感染尾蚴后第42d隨機(jī)分作三組，每組7只，進(jìn)行透皮治療實(shí)驗(yàn)。第二組（灌胃組 I ）：200mg/kg，PZQ灌胃給藥，給藥4d，停2d，再給藥4d，2d后解剖取肝組織。將磨口三角瓶至于恒溫振蕩器，37℃條件下恒溫振蕩2h，靜置1h。計(jì)算1ml溶液中PZQ的質(zhì)量。因此，血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵肉芽腫是血吸蟲(chóng)病治療的核心問(wèn)題之一，也是長(zhǎng)期阻礙血吸蟲(chóng)病治療的重大技術(shù)難題。此外，吡喹酮的給藥量依據(jù)動(dòng)物體重來(lái)確定，如牛、馬等大型家畜，每次需口服大量的吡喹酮，給藥過(guò)程很不方便。吡喹酮的殺蟲(chóng)過(guò)程有2個(gè)方面：藥物對(duì)蟲(chóng)體的直接作用和宿主的免疫效應(yīng)。神經(jīng)肌肉系統(tǒng)反應(yīng)，以頭暈、頭痛、乏力、四肢酸痛等多見(jiàn)，其次為失眠、嗜睡、多汗、肌顫動(dòng)等，少數(shù)患者甚至?xí)霈F(xiàn)精神失常、癔癥、癲癇發(fā)作。吡喹酮原藥的清除半衰期，其代謝物為45h（周述龍等，2001）。 吡喹酮治療血吸蟲(chóng)病概述 吡喹酮概述吡喹酮又名環(huán)吡異喹酮（Praziquantel，PZQ，EMBAY 8440），系雜環(huán)喹啉嗪衍生物，我國(guó)工業(yè)生產(chǎn)采用以異喹啉為起始原料，經(jīng)Reissert反應(yīng)、催化氫化、?；?、環(huán)合、水解以及?；频茫⊿eubert et al., 1977）。皮膚的角質(zhì)層細(xì)胞吸水膨脹后，原先緊密的“泥磚”結(jié)構(gòu)變得疏松，藥物的通透性增強(qiáng)。一般用藥物在辛醇—水兩相間的分配系數(shù)（P）來(lái)表征藥物在油/水兩相中的分配能力（Kim, 2000）。皮膚表面藥物從給藥系統(tǒng)釋放通過(guò)表皮通過(guò)附屬器角質(zhì)層通過(guò)細(xì)胞間穿過(guò)角質(zhì)層細(xì)胞真皮汗腺毛囊、皮脂腺毛細(xì)血管吸收體循環(huán) 圖12 經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的吸收途徑 Absorption approach of TTDS 皮膚附屬器吸收藥物的速率遠(yuǎn)高于表皮吸收藥物的速率， %，故該途徑只是一個(gè)次要的吸收方式。經(jīng)皮給藥在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中有著悠久的歷史。 敵百蟲(chóng)是一種有機(jī)磷化合物，便宜且毒性低，用于治療人體寄生蟲(chóng)病有30多年歷史，對(duì)埃及血吸蟲(chóng)病療效較好，曾被廣泛用于治療埃及血吸蟲(chóng)病。20世紀(jì)初，科學(xué)家就想通過(guò)研制血吸蟲(chóng)疫苗來(lái)預(yù)防血吸蟲(chóng)病的感染與傳播。但由于近年來(lái)全球整體氣候的改變以及經(jīng)濟(jì)發(fā)展速度的加快等客觀因素，中國(guó)血吸蟲(chóng)病的防治工作面臨更加巨大挑戰(zhàn)，近幾年血吸蟲(chóng)病疫情下降速率減慢，血吸蟲(chóng)病疫情小規(guī)模爆發(fā)的威脅仍然存在。最后，慢性蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)外周慢性炎性病變逐漸減弱，假結(jié)核結(jié)節(jié)中的類(lèi)上皮細(xì)胞為纖維母細(xì)胞代替，層層包繞使結(jié)節(jié)纖維化，蟲(chóng)卵肉芽腫反應(yīng)雖然可將蟲(chóng)卵破壞，但宿主的免疫病理的強(qiáng)烈反應(yīng)造成的病理?yè)p害，可導(dǎo)致干線性肝纖維化。童蟲(chóng)移行經(jīng)過(guò)肺肝時(shí)，可引起肺部組織點(diǎn)狀出血及白細(xì)胞浸潤(rùn)，病灶的規(guī)模與感染的程度成正比，這種血管炎性病變又稱(chēng)為童蟲(chóng)性肺炎。渦蟲(chóng)綱為自主生活而吸蟲(chóng)綱和絳蟲(chóng)綱為寄生生活。研究結(jié)果不僅對(duì)當(dāng)前血吸蟲(chóng)病的治療具有重要的臨床意義，而且為利用透皮給藥系統(tǒng)治療其他類(lèi)似疾病提供重要的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。在制備了濃度為300mg/ml的吡喹酮透皮劑，確定它在體內(nèi)能夠維持較高的血藥濃度并持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間的基礎(chǔ)上，首先通過(guò)藥物的毒性試驗(yàn)以確定合適的經(jīng)皮給藥劑量，然后對(duì)血吸蟲(chóng)病動(dòng)物模型實(shí)施透皮給藥治療并探討吡喹酮經(jīng)皮給藥對(duì)肉芽腫的作用。我國(guó)目前仍有30多萬(wàn)血吸蟲(chóng)病患者，近萬(wàn)頭耕牛受到感染血吸蟲(chóng)（雷正龍等，2010）。成熟的尾蚴鉆出釘螺體外，浮游于水體表面，脫去尾巴鉆入皮膚轉(zhuǎn)變成童蟲(chóng)，童蟲(chóng)進(jìn)入血管移至門(mén)靜脈系統(tǒng)處寄生，22天后發(fā)育為成蟲(chóng)，周而復(fù)始，這就是血吸蟲(chóng)的生活史，如圖11所示。雌蟲(chóng)剛產(chǎn)出的未成熟蟲(chóng)卵沉積在組織內(nèi)不形成典型的蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)，其周?chē)乃拗鹘M織無(wú)反應(yīng)或輕微的反應(yīng)，僅引起局部結(jié)締組織輕度增生。晚期血吸蟲(chóng)病是由于患者反復(fù)重度感染，經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的發(fā)展而形成。為解決中國(guó)能源匱乏和水資源分布不均，這幾年在血吸蟲(chóng)病疫區(qū)大力興建大壩、溝渠及南水北調(diào)工程，很大程度地改變了這些地區(qū)的江水湖泊流域，這些都可能導(dǎo)致血吸蟲(chóng)傳染源的擴(kuò)散和遷移。 呋喃丙胺（F30066）于1960年由上海醫(yī)藥工業(yè)研究所開(kāi)發(fā)研制，是我國(guó)首次開(kāi)發(fā)的非銻劑類(lèi)抗血吸蟲(chóng)藥物。 透皮給藥概述 透皮給藥發(fā)展概況透皮給藥系統(tǒng)（transdermal drug delivery system, TDDS）顧名思義，即藥物通過(guò)皮膚吸收產(chǎn)生作用的給藥方式：藥物透過(guò)皮膚，由毛細(xì)血管吸收進(jìn)入全身血液循環(huán)并在病灶部位產(chǎn)生療效的給藥方式。（3）一次給藥能夠使得藥物以恒定的速度進(jìn)入人體，藥物作用時(shí)間長(zhǎng)，減少用藥次數(shù)。但對(duì)于高脂溶性的藥物，活性表皮則對(duì)其透皮吸收有很大的阻礙。老年人皮膚干燥，萎縮，皮膚附屬器功能減弱，所以藥物吸收能力較差。此外，制劑中的成分如表面活性劑、藥物濃度、系統(tǒng)的給藥面積都是影響藥物透皮吸收的因素。動(dòng)物口服14C標(biāo)記吡喹酮后，絕大部分吡喹酮在小腸內(nèi)迅速吸收，藥物進(jìn)入肝臟內(nèi)被迅速代謝形成羥基代謝物，肝門(mén)靜脈血中血藥濃度可較周?chē)o脈血藥濃度高10倍以上。治療劑量吡喹酮對(duì)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)有較廣泛的損害：線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張和減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上核蛋白體的減少等。血吸蟲(chóng)的攣縮與Ca2+有關(guān)，吡喹酮可增加蟲(chóng)體Ca2+通透性，使得細(xì)胞內(nèi)鈣離子的丟失。吡喹酮在水中不溶，主要通過(guò)口服，口服給藥存在強(qiáng)烈的肝臟“首過(guò)效應(yīng)”，進(jìn)入體循環(huán)的有效藥量大大減少。2條，1‰ 濃度的吡喹酮乙醇液，PEG液和霜?jiǎng)┚泻芎玫念A(yù)防效果，防護(hù)率為100％（望西玉等，1996）。當(dāng)透皮組方一定時(shí)，給藥劑量決定著血藥濃度的大小，既要求達(dá)到蟲(chóng)卵肉芽腫的治療要求，又不會(huì)對(duì)動(dòng)物器官造成損害。mL1 10 14 18 22 26 30 A ： : PZQ溶液標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 Fig. The standard curve of PZQ solutions 線形回歸后得到PZQ標(biāo)準(zhǔn)溶液的回歸方程為： A=－ R2=其中，A為吸光度，C為PZQ溶液的濃度。 PZQ透皮劑對(duì)肝臟的毒性試驗(yàn) PZQ藥劑的配制及給藥過(guò)程 灌服藥物制劑的制備：稱(chēng)量所需質(zhì)量PZQ粉末，溶于10ml純凈水中，恒溫振蕩器中震蕩1h，制成懸濁液。 日本血吸蟲(chóng)卵肉芽腫的治療實(shí)驗(yàn)將陽(yáng)性釘螺每10只分裝在1個(gè)小燒杯（50ml）中，加去氯水至杯口，置一小塊網(wǎng)眼窗紗壓入水面下4mm處，防治釘螺外爬，置于光源下，溫度2028℃，2h后觀察杯口水面的尾蚴。公式如下：直徑R=（A+B）/2，面積S=（AB），體積V=(πAB2) /6（傅行禮等，2007）。那么對(duì)于1個(gè)50kg的病人，初始兩天每次用藥500750mg，如果用300mg/ml的溶解度配置的PZQ透皮劑。 此外，四氫呋喃沸點(diǎn)較低，且屬于易揮發(fā)的溶劑，因此在給藥時(shí)是一種蒸發(fā)透皮給藥系統(tǒng)。 PZQ在混合溶媒中的溶解度 為了便于分析PZQ在不同溶媒中的溶解度的差異，首先將5種溶媒的理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)列于表32：表32 五種溶媒的理化性質(zhì)和分子結(jié)構(gòu)Table 32 The molecular structures, physical andchemical properties of five solutions溶媒 分子量 沸點(diǎn)（℃） 溶媒性質(zhì)二甲亞砜 94 189 溶于水、乙醚、苯等四氫呋喃 72 66 溶于水和多種有機(jī)溶劑油酸 172 286 不溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿乙二醇苯醚 138 240 可溶于醇，醚及堿性水溶液1,4二氧六環(huán) 88 101 與水混溶，可混溶于多數(shù)有機(jī)溶劑 35℃時(shí)，PZQ在二甲亞砜與其他溶劑的混合溶液中的溶解度隨二甲亞砜在其中的比例的變化關(guān)系如圖31所示。10）條。透皮制劑的制備：稱(chēng)量所需質(zhì)量PZQ粉末，溶于所需體積的乙二醇苯醚中，配制為300mg/ml的溶液，恒溫振蕩器中震蕩1h，制成清亮透明溶液待用。2H2O ，置于燒杯中，加蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，移?0 mL容量瓶，加蒸餾水至刻度，定容。 多組分的透皮劑對(duì)藥物的滲透能夠達(dá)到協(xié)同促進(jìn)的作用，目前研制的透皮促進(jìn)劑大部分采用多組分體系（司紅彬，2007）。王在華應(yīng)用吡喹酮透皮劑對(duì)動(dòng)物日本血吸蟲(chóng)病進(jìn)行系列治療研究，篩選出代號(hào)8604213的4% 吡喹酮透皮劑減蟲(chóng)率（%）最佳。如果要完全或局部除去這些寄生蟲(chóng)則需要將其暴露在更高濃度的藥物中更長(zhǎng)一段時(shí)間（Andrews et al, 1983。(肖樹(shù)華等，1981a)。但是二者病變性質(zhì)相同都為可逆性改變（褚連仲等，1983）。吡喹酮無(wú)器官特異性蓄積現(xiàn)象，多次給藥，只有肝、腎中含量有所增加。比如：凝膠劑、乳膠劑軟膏中藥物吸收速度快于骨架型貼片中藥物吸收速度。女性皮膚較之男性薄，理論上透皮給藥吸收更好。透皮給藥系統(tǒng)中的藥物由給藥系統(tǒng)進(jìn)入皮膚的過(guò)程如圖13（周建平，2008），首先，藥物從系統(tǒng)中擴(kuò)散至角質(zhì)層，后繼續(xù)擴(kuò)散，部分藥物會(huì)和角質(zhì)層結(jié)合形成藥物儲(chǔ)庫(kù)；其余藥物繼續(xù)擴(kuò)散到活性表皮，藥物可結(jié)合于該層皮膚的受體，表皮內(nèi)的酶也可能對(duì)藥物有代謝作用；藥物繼續(xù)深入真皮層并被毛細(xì)血管吸收進(jìn)入體循環(huán)，在真皮內(nèi)也可能形成藥物儲(chǔ)庫(kù)或者被酶代謝。 透皮給藥的過(guò)程（1）藥物經(jīng)皮轉(zhuǎn)運(yùn)的途徑 皮膚是一道天然的保護(hù)屏障，用于抵御外來(lái)的有害物質(zhì)入侵機(jī)體和體液的過(guò)度蒸發(fā)，同樣的，皮膚的屏障作用也使得普通的藥物不能順利地透過(guò)皮膚進(jìn)入生物體內(nèi)。 傳統(tǒng)的皮膚用藥僅用來(lái)治療局部皮膚疾病，過(guò)去認(rèn)為藥物難以透過(guò)皮膚角質(zhì)層以達(dá)到全身治療的目的。呋喃丙胺副作用較多且發(fā)病率個(gè)體差異較大，男性多于女性，成人多于兒童，藥物副反應(yīng)的頻率和強(qiáng)度與給藥劑量也有關(guān)系。由于血吸蟲(chóng)防治的歷史遺留問(wèn)題，我國(guó)缺乏高效有序的血防機(jī)構(gòu)進(jìn)行組織管理。 我國(guó)血吸蟲(chóng)病疫情現(xiàn)狀 血吸蟲(chóng)病流行于長(zhǎng)江流域以南的江浙滬、兩湖兩廣等共12個(gè)省、市、自治區(qū)。