（0805）《園藝植物生物技術(shù)》復(fù)習(xí)大綱、樣題及答案(2009)(文件)
【正文】 。（分子標記）1基因文庫主要包括基因組文庫和 兩種。（T DNA）我國頒布的第一部與轉(zhuǎn)基因植物有關(guān)的條例是 。（√）植物組織培養(yǎng)中的培養(yǎng)基可用清潔的自來水配制。（√）RFLP分子標記多態(tài)性出現(xiàn)只能由限制性酶切位點的改變所導(dǎo)致。（√）四、簡答題（共4題，每題4分，共16分）植物組織培養(yǎng)類型包括哪些？答：（1）根據(jù)所培養(yǎng)的植物外植體類型不同劃分：包括胚胎培養(yǎng)以及以胚胎為基礎(chǔ)的培養(yǎng)；器官及器官原基培養(yǎng)；組織培養(yǎng)；細胞培養(yǎng)。分離原生質(zhì)體所用外植體的生理狀態(tài)與原生質(zhì)體的質(zhì)量對其后的分裂頻率之間有著密切的關(guān)系。來源于同一種基因型的原生質(zhì)體，在不同培養(yǎng)基中的再生能力也不一樣。主要是培養(yǎng)環(huán)境的光質(zhì)會影響到原生質(zhì)體細胞壁再生。答：熱處理脫毒的原理是利用病毒類病原與植物的耐熱性不同，將植物材料在高于正常溫度的環(huán)境條件下處理一定的時間，使植物體內(nèi)的病原失去活性或鈍化病毒，使病毒在植物體內(nèi)的增殖和擴散速度減緩，而植物的生長受到較小的影響或在高溫下生長加快，這樣植物的新生部分不帶病毒，取該無病毒組織培育即可獲得無病毒植株。一般將待處理品種嫁接在較耐高溫的砧木上，在37℃左右條件下進行一定時間的處理。答：（1）AFLP標記優(yōu)點：A、具有RFLP技術(shù)的可靠性與PCR技術(shù)的高效性。C、大多數(shù)為顯性標記，難于鑒別等位基因。（2）圖位克隆法。主要包括差異顯示、差減雜交以及抑制性差減雜交等具體的分離方法。利用轉(zhuǎn)座子可使插入位點基因失活產(chǎn)生突變體的原理來進行基因定位與克隆的方法。（7）基因芯片。常見有Southern斑點雜交和Southern印跡雜交兩種。外源基因編碼蛋白在轉(zhuǎn)基因植物中能夠正常表達并表現(xiàn)出應(yīng)有的功能乃是植物基因轉(zhuǎn)化的最終目的。8。ELISA檢測程序包括抗體制備、抗體或抗原的包被、免疫反應(yīng)及檢出三個階段。包括兩種方式：一是Northern雜交, 通過總RNA或mRNA與探針的雜交來分析；二是RTPCR，以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉(zhuǎn)錄，然后經(jīng)PCR擴增目的基因特異條帶。如何對轉(zhuǎn)入植物基因組中的外源目的基因進行檢測？答：（1）對轉(zhuǎn)入的目的基因序列片段進行檢測。（6）TDNA標簽法。利用植物的種、屬之間，基因編碼序列的同源性大大高于非編碼區(qū)的原理，根據(jù)已知基因的序列可從另一種植物中分離類似功能基因。包括目的基因的初步定位、基因組文庫構(gòu)建和篩選、目的基因區(qū)域跨疊克隆群的建立、目的基因精細定位及外顯子的分離、鑒定等步驟。五、問答題（共2小題，每題7分，共14分）基因分離的常見途徑有哪些？答：（1）功能克隆法。（2）AFLP主要的缺點：A、對基因組DNA和限制酶的質(zhì)量要求高，酶切不完全可能會出現(xiàn)假陽性。因此，處理后應(yīng)立即取新梢嫁接才可獲得脫病毒植株。溫湯浸漬處理(或熱水處理)是將帶病毒的植物材料置于一定溫度的熱水
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