【正文】 耗氧量。 注意事項：熟練掌握冠狀靜脈竇插管技術(shù)，保持導(dǎo)管在冠狀靜脈竇內(nèi)正確位，以保證血流通暢。 方法：大鼠或家兔隨機分組，給藥或?qū)φ找汉?，分別測定心肌耗氧量或結(jié)扎冠狀動脈形成心肌缺血。 (3)非特異性方法：小鼠常壓耐缺氧實驗法 方法：將 lo個 250ml或 500ml的磨口廣口瓶放入鈉石灰 10g，上墊濾紙。用紙板隔為小格，每格放入小鼠一只，干燥器內(nèi)放入一定量的鈉灰或氫氧化鈉氯化鈣等量，用以吸收水分和二氧化碳。 厥脫證藥 一、實驗設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 厥脫證是指邪毒內(nèi)陷或內(nèi)傷臟氣、氣陰耗竭或亡津失血所致的氣血逆亂，正氣耗脫的一類癥證。厥脫證分為寒厥證、熱厥證、陰脫證，陽脫證、氣血兩脫和陰陽俱脫證等。 厥脫證的臨床表現(xiàn)相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的各種休克和循環(huán)衰竭?？蛇x犬、貓進行試驗，大鼠及兔較差。 (4)創(chuàng)傷性休克模型：用止血帶造成動物肢體缺血引起創(chuàng)傷性休克；反復(fù)錘動物腿部肌肉；用木板及鉗持續(xù)擠壓動物腿；牽扯腸襻；損傷胸腔器官等均可引起創(chuàng)傷休克。 (6)腸系膜上動脈夾閉性休克模型：夾閉腸系膜上動脈，引起腸道缺血，當(dāng)一段時間后，恢復(fù)血液供應(yīng)，此時即引起休克。 (2)相關(guān)指標(biāo)：如與休克病理性情況改善相關(guān)的血流動力學(xué)和血液生化學(xué)等。陰脫證與感染休克脫水癥狀相似，可用腸道致病菌感染動物，造成嚴(yán)重泄瀉，脫水；亦可用內(nèi)毒素或膿毒病灶引發(fā)休克，燒 (燙 )傷性休克動物亦可作為陰脫型模型。②扶下相關(guān)的試驗，如抗應(yīng)激能力試驗、免疫功能試驗、物質(zhì)代謝試驗及內(nèi)分泌功能試驗等。 4．其他 還有重要臟器血流量如腦、腎及冠狀動脈血流量的測定、自由基測定及各種酶的測定、電鏡微觀結(jié)構(gòu)觀察等對闡明厥脫證藥物的機制是必需的。 2 操作方法 將麻醉貓股動脈插管并連接儲血瓶供放血和儲血用，用肝素鈉 10mg／ kg抗凝，開始放血每分鐘為 2ml，當(dāng)血壓低于 10kPa，改為分鐘O． 5ml，放血使血壓降至 5． 3kPa，此時為失血代償期。 3．造模成功指標(biāo)和藥物療效觀察 放血使血壓降至 5. 3kPa(40mmHg)，此時為失血代償期，此時給予治療厥脫證新藥，同時輸血液，血壓可回升，動物可存活。 2．操作方法 用大腸桿菌內(nèi)毒素或內(nèi)毒素靜脈注射造成感染性中毒性休克，可用小鼠、大鼠、兔、貓、犬等。 4．注意點 (1)實驗用大腸桿菌內(nèi)毒素可由干燥大腸艾希菌制備，經(jīng)毒力測定后封裝在安缽內(nèi)，保存?zhèn)溆谩Ｒ部捎眉訜釟⑺赖母叨玖﹃幮约?xì)菌苗懸液作粗制內(nèi)毒素。做氣管插管，接人工呼吸機。左頸總動脈插入壓力換能導(dǎo)管直至左心室測左室壓峰值；同時測左室壓力變化速率正負(fù)最大值左室舒張末期壓(NEDP)。待 MAP下降至 9． 3kPa或原血壓 (1013kPa)的 70％以下者視為休克。 (2)操作過程中盡量避免損傷血管，出血點應(yīng)結(jié)扎或燒灼止血。 (四 )創(chuàng)傷性休克模型 1．原理 以 — 定重力自一定高度自由落下，造成股骨粉碎性骨折，用止血帶造成動物體缺血再灌注損傷；反復(fù)錘擊動物肌肉等均引起創(chuàng)傷性休克。 3．造模成功的指標(biāo)和藥物療效觀察 創(chuàng)傷組動物實驗后 2h血壓降至6． 82kPa，明顯低于防治組 (11． 76kPa)和對照組 (13． 5kPa)，血漿乳酸脫氫酶和組織蛋白酶活性以及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛 (MDA)含量均顯著高干防治組和對照組，同時心、肺、腎及胃黏膜等組織 MDA含量和鈣含量較防治組和對照組明顯增高。 (五 )腸系膜上動脈夾閉性 (sMAO)休克模型 1 原理 休克的發(fā)生可能與腸道缺血再灌注時自由基及其他多種毒物質(zhì)的產(chǎn)生有關(guān)。右頸外靜脈插管供給藥用。至松夾 2h，取動物心、肝、腎準(zhǔn)確稱量 1g，測定 GSH活力，按 DTMB直接法測定。 3．造模成功的指標(biāo)和療效觀察 造模成功的動物在松夾即刻，松1h、 2h MAP、脈壓均下降。用無創(chuàng)傷動脈夾閉要完全。 心律失常藥 一、實驗設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 心律失常是指心臟活動節(jié)律不正常。心臟的功能、血供、神經(jīng)調(diào)節(jié)等任 — 項異常均部分或完全引起心律失常，如各種器質(zhì)性心臟病、全身性疾病 (感染、缺氧、中毒、電解質(zhì)紊亂、藥物作用 )、某些系統(tǒng)疾病 (甲亢、顱內(nèi)出血等 )、麻醉、胸腔手術(shù)、自主神經(jīng)功能失調(diào)等。 Ⅱ 類為腎上腺素能受體阻滯劑，如 Nadolol、 Pindolol、 Sotolol、Timolol等。受試中藥的其他相關(guān)藥效作用如補益、理氣等，可根據(jù)受試物的情況而增加。 (2)外科手術(shù)或機械損傷形成的心律失常：由傳導(dǎo)延緩和折返激動以及舒張自動除極和異常自律性所致?？赡芘c自主神經(jīng)及具遞質(zhì)釋放、或腎上腺髓質(zhì)分泌腎上腺索，以及對心臟的直接作用有關(guān)。直接抑制Na— Katp酶，使心肌細(xì)胞內(nèi) Na多 K少，使心室自律性增高。鈣增加能降低蒲氏纖維的興奮性顯著增加普通心肌的去極化，導(dǎo)致局部傳導(dǎo)阻滯，并增加沖動擴散的不齊。 (2)麻酐劑誘發(fā)的心動過緩模型：尿酯能阻斷中樞神經(jīng)突觸傳遞，對心臟也有抑制作用，麻醉后出現(xiàn)一過性心率減慢，多在 10min內(nèi)恢復(fù)正常。③ Ⅱ 、 Ⅲ 度房室傳導(dǎo)阻滯。 (2)整體動物形成的心律失常在麻醉或清醒狀態(tài)下實驗，不僅能觀察受試物的作用，后者還能觀察受試物的毒性。 (5)當(dāng)心律失常持續(xù)叫間較短，無法進行實驗治療時，采取先行給藥物，再造成心 律失常，在同樣條件下，比較對照組與給藥組形成心律失常的時間、程度、持續(xù)時間或誘發(fā)心律失常所用化學(xué)物質(zhì)的劑量等，這可視為預(yù)防給藥的保護作用?；竟?jié)律刺激的參數(shù)為波寬 1ms，頻率 1Hz，強度為閾強度的 2倍，對同一細(xì)胞分別紀(jì)錄和測試給藥前、后和沖洗的動作電位變化 ERP的變化，將細(xì)胞分組給予奎尼丁 50ug和待測藥物。如果受試藥為中藥提純物，水溶的可用靜注或具他注射方法，如系中藥粗制劑，一定要灌胃或注入十二指腸內(nèi)，口服或灌胃通常在形成心律失常前 1h或更長時間給藥，腹腔注射或十二指腸注入應(yīng)在 10～ 15min前，皮下、肌內(nèi)注射通常在 2030min前給藥。也可固定電流漸加快頻率，以測定閾值。再灌注期間尤其是再灌注即刻至 3min內(nèi)出現(xiàn)病理性 Q波，室性早搏和心動過速。 (三 )氯仿誘發(fā)小鼠的心室纖顫 1 原理 氯仿誘發(fā)小鼠纖顫可能與自主神經(jīng)及其釋放的遞質(zhì)有關(guān)，因為這種心律失常能被阿托品等 M— 膽堿受體阻斷劑或腎上腺素受體阻斷劑普萘洛爾所對抗。經(jīng) 2— 30min后小鼠麻醉躺下，呼吸漸抑制。 2，方法 大鼠麻醉分組，紀(jì)錄正常 ECG后．靜脈注射烏頭堿 25ug／ kg快速注射， 5s注射完 0． 01％， 0． 25m1／ 100g(體重 )，出現(xiàn)心律失常穩(wěn)定 10min后靜脈注射待測藥物、陽性對照藥和等容量生理鹽水。毒毛旋花苷 G對心臟的毒性表現(xiàn)為室性早搏 (VP)、室性心動過速 (VT)、心室顫動 (VF)、心肌停搏 (CA)。 (六 )氯化鋇誘發(fā)的心律失常 1．原理 氯化鋇能通過增加慢通道內(nèi)流，增加心率而誘發(fā)心律失常，水合氯醛與氯化鋇產(chǎn)生協(xié)同作用，誘發(fā)大鼠出現(xiàn)雙向性心律失常。分別靜脈注陽性藥 (奎尼丁 5mg／ kg)和受試藥 5min后立即快速 (3s注完 )靜脈注射氯化鋇 lmg/kg．并紀(jì)錄 ECG。 2．方法 大鼠雌雄各半，分組。做肌靜脈插管，一側(cè)與恒速輸液泵相連，準(zhǔn)備恒速注射毒毛旋花苷 G每分鐘1ug／ 100g(體重 )，另側(cè)給治療藥物或等容量的生理鹽水，靜脈注射 3min后，開恒速泵，每分鐘或必要時 (心電圖變化明顯或心臟將要停跳前 )記錄心電圖至心跳停止。靜脈注射烏頭堿 25ug／ kg，穩(wěn)定后大都出現(xiàn)短陣發(fā)性室性過速，或室性過速。 (四 )烏頭堿誘發(fā)的心律失常 1．原理 烏頭堿引起心律失常的作用機制復(fù)雜，它直接興奮心肌使心率加快；中毒量的烏頭堿可使支配心臟的自主神經(jīng)功能紊亂。當(dāng)小鼠吸入一定量的氯仿后會誘發(fā)心室顫動，小鼠的心室顫動只數(shù)可以反映氯仿致小鼠心律失常的發(fā)生率。 2．方法 大鼠戊巴比妥鈉 50mg／ kg皮下注射麻醉，用動物人工呼吸機作人工呼吸，通氣量為 250ml／ min，于左前胸 4— 5肋間開胸，輕壓胸廓擠出心臟，于肺動脈圓錐左緣，左心耳下沿用無損傷縫合針 2或 0號滌綸線縫于冠脈左前降支下，把心臟放回胸腔，靜脈注射生理鹽水或受試藥物后 5min，將自徑為 3mm長 5mm的橡膠管與冠狀動脈左前降支結(jié)扎，造成心肌缺血。②家兔2kg左右，烏拉坦 1． 2g／ kg，皮下注射麻醉仰位固定，胸正中開胸，避免損傷胸膜，保留自發(fā)呼吸，剪開心包，以正負(fù)電極分別夾住左室心尖和上方，連接電子刺激器，頻率 64Hz，波寬 l0ms，從 4V開奸，每次刺激 30s，每隔 2min刺激一次，每次遞增 2V，觀察產(chǎn)生心室纖顫的電壓，作為對照， 15min后靜脈注射藥物，給藥后 5min、 15min、 30min按上法測試心室纖顫的電壓，進行統(tǒng)計處理。心動過速、撲動或纖顫可連續(xù)實驗 2— 4h。 (三 )陽性對照藥 與已知公認(rèn)臨床療效較好的類似藥進行對照，最好選用作用類別相似的中藥成藥，也可酌情用療效明確的西藥及新藥。 (二 )其他試驗 1 離體豚鼠右心室乳頭肌實驗 離體豚鼠右室乳頭肌標(biāo)本固定在改良臺氏液灌流槽中，給與基本節(jié)律電刺激，穩(wěn)定 12h后，對竇房組織進行微電極探查，找出竇房結(jié)搏起細(xì)胞，并使動作電位穩(wěn)定，開始實驗測定及記錄。 (3)心律失常的恢復(fù)通常以恢復(fù)竇性心律，連續(xù) 30min下再復(fù)發(fā)為恢復(fù)；心律失常持續(xù)時間以自心律失常一直到恢復(fù)竇性心律為止，減去中間間斷的恢復(fù)時間。豚鼠心臟地對心血管藥物的感受與人相似，兔耳靜注給藥方便，適宜在不麻酢條件實驗，貓對作用于心臟的藥物感受性較好，體格健壯，適宜作開胸手術(shù)，固定電極等試驗，大鼠易得．但對強心甘不敏感。 2．觀察指標(biāo) 紀(jì)錄 ECG，也可用心電示波器進行監(jiān)測．觀察項目有①心律失常 (室性早搏 VP、室性心動過速 VT)出現(xiàn)的時間，心律失常程度，藥物作用的維持時間，恢復(fù)竇性心律動物數(shù)／動物總數(shù)?？s短動作電位及不應(yīng)期，使心肌不同部位興奮的擴散不一致，導(dǎo)致折返形成。增加蒲氏纖維 Na內(nèi)流，提高舒張期去極化的頻串。能使鈣通道開放，促進細(xì)胞去極化，加速起搏點的自柞性，形成多源性異位節(jié)律，縮短不應(yīng)期。 (3)化學(xué)藥物誘發(fā)的心律失常：常用的有①腎上腺素誘發(fā)的心律失常。 過速型心律失常模型。 Ⅳ 類為鈣通道調(diào)節(jié)劑，阻斷鈣通道 Ca內(nèi)流，使心肌細(xì)胞去極化減慢。 心律失常的治療首先是確定病因，明確心律失常的發(fā)病因素及其相互關(guān)系，在治療病因的同時根據(jù)需要治療心律失常。凡偏離這種正常心律的心臟搏動都屬心律失常，它由心臟中節(jié)律性或激動傳導(dǎo)障礙或二者同時失常引起。③必需注意各試劑的配制和保存方法，以免影響結(jié)果。受試藥物應(yīng)能使 MAP升高，全血及心、肝、腎組織 GSHPx活力明顯升高。對照組用等容量生理鹽水。給藥組可在松夾前 20min右側(cè)頸外靜脈注入試驗藥物。 2．操作方法 取純系大鼠，體重 250g左右，用 13． 3％烏拉坦與 l％氯醛糖混液 0 6ml／ 100g(體重 )腹腔注射麻醉，氣管插管，自主呼吸。 4. 注意點 (1)每次造成創(chuàng)傷的物體重量、高度、創(chuàng)傷部位，嚴(yán)重程度要一致。創(chuàng)傷組以一定重力自一定高度自由落下，造成兔右側(cè)股骨中段粉碎性骨折；防治組創(chuàng)傷方法同上，創(chuàng)傷前 l0min和創(chuàng)傷后即刻靜脈注入被試藥物；對照組插管手術(shù)同上，但不造成創(chuàng)傷。 (4)結(jié)扎冠狀動脈部位的次序不能錯．先結(jié)扎根部易引起動物死亡。 藥效可根據(jù)紿藥后能否使休克動物 MAP增加，使 LYEDP與冠狀血管阻力 (CVR)和 CVP下降，同時可用陽性藥多巴胺作對照。同時測心電圖 (ECG)和心率 (HR)和冠狀竇血流量 (SCBF)，各項指標(biāo)均記錄于多道生理記錄儀。股靜脈導(dǎo)管上連流量計探頭，將冠狀竇插管與導(dǎo)管另一端相連；從心耳剪 — 小口迅速插入冠狀竇插管，用粗線將心耳與插管扎上；從心底部沿房室溝將插管插入冠狀竇；輕輕扎住插管防止滑，保持回流導(dǎo)管暢通。 (三 )心源性休克模型 1．原理 用犬冠狀動脈前降支分段結(jié)扎，結(jié)合冠狀插管阻流，使心肌缺血缺氧，心肌細(xì)胞受損，心肌收縮性能及心臟泵血功能明顯下降，全身血壓下降，使重要器官血液灌注不足而處于休克狀態(tài)。實驗前必須測定所選內(nèi)毒素對所用品系動物的毒力。 3．造模成功的指標(biāo)和藥物療效觀察 內(nèi)毒素注射初期， DAP， MAP，指標(biāo)下降迅速。 (2)如動物進入失代償期晚期，此時將全部放出的血液輸回機體，仍有 95％ 98％動物死亡。陽性藥組以多巴胺進行比較。也可用多巴胺等作對照。 (3)治療與氣脫類似的過敏性休克藥物：或增加過敏試驗等內(nèi)容。 2. 血流動力學(xué)、心功能及重要內(nèi)臟血流量 藥物對整體動物血流動力學(xué)和心功能以及對心、腦、腎等重要內(nèi)臟血流量的影響，關(guān)系到藥效作用，應(yīng)進行這方面試驗。陽脫證臨床上以神志淡漠、面色蒼白，四肢厥冷，冷汗淋