chapter 2 核酸的結(jié)構(gòu)與功能(文件)
【正文】 該區(qū)含有二氫尿嘧啶 , 環(huán)由 812個(gè) 核苷酸組成，臂由 34對(duì)堿基組成 。 86 3. tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu) —— 倒 L形 * tRNA的功能 : 活化 、 搬運(yùn)氨基酸到核糖體 ， 參與蛋白質(zhì)的翻譯 。該序列與mRNA對(duì)核糖體的識(shí)別 有關(guān)，有助于蛋白質(zhì)合成時(shí)的正確起始 。 2. 大多數(shù)真核 mRNA的 3180。 93 核酸的理化性質(zhì) 核酸的一般性質(zhì) 核酸的紫外吸收特性 DNA的變性復(fù)性與分子雜交 核酸的顏色反應(yīng) 94 ? DNA為 白色纖維狀 固體， RNA為 白色粉末狀固體，都微溶于水，其鈉鹽在水中的溶解度較大 ,但 不溶于乙醇 、乙醚和氯仿等一般有機(jī)溶劑 。 ? 核酸受到強(qiáng)大離心力的作用時(shí)，可從溶液中 沉降 下來(lái)，其沉降速度與核酸的大小和密度有關(guān)。 1. DNA或 RNA的定量 OD260= 50μg/ml 雙鏈 DNA 37μg/ml 單鏈 DNA 40μg/ml RNA DNA純品 : OD260/OD280 = RNA純品 : OD260/OD280 = 97 DNA的紫外吸收光譜 1. 天然 DNA 2. 變性 DNA 3. 核苷酸總吸收值 220 240 260 280 波長(zhǎng)（ nm） 光吸收 1 2 3 ? 核酸的紫外光吸收值常比其各核苷酸成分的 光吸收值之和少 20－ 60%，這是在有規(guī)律的雙螺旋結(jié)構(gòu)中堿基緊密地堆積在一起造成的 。 102 ? 當(dāng) DNA的稀鹽溶液加熱到80~100℃ 時(shí)，雙螺旋結(jié)構(gòu)即發(fā)生解體，兩條鏈彼此分開(kāi)，形成無(wú)規(guī)線團(tuán)。 減色效應(yīng) DNA復(fù)性時(shí)，其溶液 OD260降低。 107 （三）核酸分子雜交 (hybridization) 在 DNA變性后的復(fù)性過(guò)程中 ， 如果將不同種類(lèi)的 DNA單鏈分子或 RNA分子放在同一溶液中 ，只要兩種單鏈分子之間存在著一定程度的堿基配對(duì)關(guān)系 ， 在適宜的條件 （ 溫度及離子強(qiáng)度 ） 下 ， 就可以在不同的分子間形成 雜化雙鏈 (heteroduplex)。 3. 簡(jiǎn)述 DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的因素。 7. DNA變性后哪些性質(zhì)發(fā)生改變？ 8. 簡(jiǎn)述影響 Tm值的因素。 5. 簡(jiǎn)述真核生物 mRNA 3′端 polyA尾巴的作用。 這種現(xiàn)象稱(chēng)為 核酸分子雜交 。 106 核酸 的變性 和 復(fù)性 變性 （加熱） 復(fù)性 （緩慢冷卻） 變性 ： 在物理 、 化學(xué)因素影響下 ， DNA堿基對(duì)間的氫鍵斷裂 ， 雙螺旋解開(kāi) ，這是一個(gè)是躍變過(guò)程 ， 伴有 OD260增加 （ 增色效應(yīng) ）,DNA的功能喪失 。 實(shí)驗(yàn)室常用的方法 —— 熱變性 80 90 100 100% 50% OD260 Tm 變性溫度范圍 ① ② ③ ℃ 103 影響 Tm值的因素 (2)DNA的性質(zhì)和組成 (1)溶液的離子強(qiáng)度 大腸桿菌 DNA在不同濃度 KCl溶液下的熔融溫度曲線 離子強(qiáng)度越高， Tm值越高 G≡C， 3個(gè)氫鍵，打開(kāi)所需能量較 A=T大， GC%越高， Tm越高 104 核酸的均一性愈高的樣品，變性過(guò)程的溫度范圍愈小。 變性因素：熱力、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、變性劑、射線、機(jī)械力等。由于核酸分子在一定酸度的緩沖液中帶有電荷，因此可利用電泳進(jìn)行分離和研究其特性 ,最常用的是 凝膠電泳 。 DNA核蛋白 RNA核蛋白 12mol/L NaCl 溶 不溶 核酸的一般性質(zhì) 95 ? DNA溶液的 黏度很大 ，而 RNA溶液的黏度小得多 。 92 ? polyA作用： ? 保護(hù) 作用，抵抗核酸外切酶的降解； ? 與 mRNA從細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)的 移動(dòng) 有關(guān)； ? 與 mRNA壽命 有關(guān)。 91 真核生物 mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 1. 大多數(shù)真核 mRNA的 5180。 87 (二 ) 核糖體 RNA的結(jié)構(gòu)與功能 * rRNA的功能 : 占細(xì)胞 總 RNA的 75～ 85%，參與組成核蛋白體 ，作為 蛋白質(zhì)生物合成的場(chǎng)所 。除個(gè)別例外，幾乎所有 tRNA在此環(huán)中都含有 T?C 。 82 (2) 反密碼區(qū) 與氨基酸接受區(qū)相對(duì)，一般環(huán)中含有 7個(gè) 核苷酸殘基，臂中含有 5對(duì)堿基。末端為 — CCAOH ? 5180。磷酸二酯鍵連成的線形分子，其表示方法與 DNA相同。 ? 不同類(lèi)型的 RNA, 其二級(jí)結(jié)構(gòu)有明顯的差異 。目前尚未發(fā)現(xiàn)既含有 DNA又含有 RNA的病毒。 人類(lèi)基因組含 109 bp DNA，理論上可編碼200萬(wàn)以上的基因，但是資料表明編碼蛋白質(zhì)的這部分序列只占基因組的 3％到 5％， 也就是說(shuō)，人類(lèi)基因組中多達(dá) 95％到 97％是非編碼區(qū)。 染色體 核小體的組成 DNA： 約 200 bp 組蛋白： H1 H2A， H2B H3 H4 組蛋白 核心 八聚體 2 = 60 真核核小體的結(jié)構(gòu) 61 串珠狀核小體結(jié)構(gòu) 62 63 64 真核生物染色體 DNA組裝不同層次的結(jié)構(gòu) DNA （ 2 nm） 核小體鏈（ 11 nm，每個(gè)核小體 200bp） 纖絲（ 30 nm，每圈 6個(gè)核小體） 突環(huán)（ 150 nm，每個(gè)突環(huán)大約 75000 bp） 玫瑰花結(jié)（ 300 nm ， 6個(gè)突環(huán)） 螺旋圈（ 700 nm，每圈 30個(gè)玫瑰花結(jié)） 染色體（ 1400 nm，每個(gè)染色體含 10個(gè)螺旋圈） 65 DNA的生物學(xué)功能 DNA的基本功能是以 基因 的形式荷載遺傳信息 ， 并作為基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的模板 。此序列各單股中沒(méi)有互補(bǔ)序列，不能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。 DNA三股螺旋 53 DNA三螺旋的堿基配對(duì) 54 回文結(jié)構(gòu) — 雙鏈 DNA中含有的兩個(gè) 結(jié)構(gòu)相同、方向相反 的序列稱(chēng)為反向重復(fù)序列，也稱(chēng)為 回
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