【正文】 IgG還是唯一能通過胎盤的 Ig，是新生兒抗感染的重要因素。 (2) 它不能透過血管壁，主要分布于血液中，占血清 Ig總量的 10%左右； (3) 為個體發(fā)育中合成最早的 Ig，在胎兒晚期已能合成，但它不能通過胎盤； (4) 是人體免疫后最早出現(xiàn)的抗體； (5) IgM是目前魚類中唯一確認的抗體類型。 (2) 人體含量僅次于 IgG (占 10 15%)，分子量為 1820萬 Da。 (3) 血清中的 IgD功能尚不清楚，但 B細胞表面的 IgD(SIgD)是成熟 B細胞的重要標志，它是 B細胞的抗原識別受體 ，在接受抗原刺激后對B細胞活化、增生和分化其調(diào)節(jié)作用； 5) IgE： (1) 以單體形式存在于血清中，是系統(tǒng)進化最晚出現(xiàn)的 Ig，也是含量最低的 Ig，僅占血清 Ig總量的 %. (2) 在過敏性疾病和某些寄生蟲感染病人血清中其含量顯著增高； (3) 產(chǎn)生部位與 SIgA相似，主要由呼吸道（如鼻咽、扁桃體、支氣管 )和胃腸道粘膜固有層的漿細胞產(chǎn)生。 二、血清學反應的特點 1. 特異性與交叉性： a. 特異性： 一種抗原一般只能與其相應的抗體結(jié)合； b. 交叉性： 當不同抗原具有相同抗原決定簇時，其結(jié)合又具有交叉性 ： a. 表面性： 抗原與抗體分子結(jié)合是分子表面的結(jié)合； b. 可逆性： 抗原抗體結(jié)合后，在一定條件下仍可分開，且其性質(zhì)不變。如： 血清中和試驗可用于檢測含量低至 103 ?g / ml的魚類病毒； ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗 )可檢測含量為 103 ?g / ml的細菌性病原 6. 條件依賴性： 抗原抗體間出現(xiàn)可見反應要提供最適的條件，如： pH值 (一般為 68)；溫度 (3745℃ )；適當?shù)碾娊赓|(zhì) (如生理鹽水 )； 震蕩 (增加抗原抗體相互接觸的機會 )等。在該試驗 中，將出現(xiàn)明顯凝集反應的血清最高稀釋度稱為該抗體的效價或滴度。 用于沉淀反應的抗原稱為 沉淀原 ； 用于沉淀反應的抗體稱 沉淀素 沉淀反應包括環(huán)狀沉淀反應、絮狀沉淀反應以及由此派生出來的 瓊脂擴散免疫試驗 等。 結(jié)果： 陽性 — 白色沉淀環(huán)； 陰性 — 無 b. 雙向免疫擴散 (double immunodiffusion)： 預先制備瓊脂板，根據(jù)需要在瓊脂板上打孔，再將抗原、抗體分別加入不同孔內(nèi)，使兩者相互擴散，若抗原抗體相對應，則二者在合適比例處形成白色沉淀線。 免疫應用： 免疫學方法 c. 對流免疫電泳 (Counter immunoelectrophoresis, CIE)： 將抗原和抗體分別加入半固體瓊脂孔內(nèi)，在堿性緩沖液中（如 PH＝ ）進行電泳時，蛋白質(zhì)抗原帶負電荷，在電場中由陰極向陽極移動。缺點是多組抗原抗體存在時沉淀線易重疊在一起，缺乏分辨力。臨床可用抗毒素治療由細菌外毒素所致的疾病。 2. 熒光物種類： 異硫氰酸熒光素、羅丹明熒光素、二氯三嗪基氨基熒光素等 3. 種類： 包括直接法、間接法和補體法 免疫應用： 免疫學方法 例： 直接法： 將待測標本（抗原）固定于玻片表面，滴加已知熒光抗體后再以緩沖液沖洗，干燥后于熒光顯微鏡下觀察。 2. 顯示方法： 用酶的特殊底物來處理反應后的標本，通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在 。 5. 特點： 敏感性高、特異性強，既可定性又可定量。 （待測樣品中的總抗體）時： 以不同稀釋度的待測樣品 (Ab)包被酶標板反應板，孵育后洗滌 ?封閉酶標板，孵育后洗滌 ?加入酶標抗抗體，孵育后洗滌 ?加入底物，測定酶促反應強度。 2. 原理與方法： 其基本原理為：待測抗原和標記抗原對有限量抗體存在 競爭性結(jié)合 ： Ag* + Ab ? Ag*Ab； Ag + Ab ? AgAb (1) 抗原用同位素 (如 131I、 3H等 ) 標記后仍能與相應抗體特異性結(jié)合； (2) 將兩類抗原與抗體混合后，兩類抗原均能與抗體結(jié)合，當 Ag*和 Ab數(shù)量恒定，且 Ag*與 Ag之和大于 Ab上結(jié)合點數(shù)目時， Ag*與 Ag 存在競爭抑制： Ag數(shù)量增加， AbAb生成量增加， Ag*Ab數(shù)量就減少，游離的 Ag*就增多。 (5) 試驗時，在同樣條件下，根據(jù)待測 Ag的放射性結(jié)合率，依標準曲線查出 Ag量。 免疫應用： 免疫學方法 該技術(shù)是將發(fā)光分析（ 化學發(fā)光 和生物發(fā)光 ）和免疫反應相結(jié)合而建立的一種新型超微量分析技術(shù)。 2. 種類： (1) 非包埋法免疫染色： 該法是以超薄冷凍切片進行免疫染色。 免疫應用： 免疫學方法 免疫應用： 免疫學原理的應用 第五節(jié) 免疫學原理在魚蝦病害防治中的應用 一、用于疾病的診斷 （免疫診斷方法有二類） ： 用已知抗原與從患病動物中提取的抗體進行血清學反應，以確定病原種類。 過程： 先將抗原（疫苗）注入同種或其他種動物機體， 14周后從接種動物的血液等部位提取抗體（或制備卵黃抗體），并將提取的抗體接種到患病動物中進行疾病治療。 缺點： 弱毒（減毒）疫苗 — 安全性較差 異種疫苗 — 獲得比較困難 3. 化學疫苗： 以化學方法提取病菌有效成分 (如 LPS)制成 優(yōu)點： 免疫劑量小，免疫原性強，作用穩(wěn)定； 缺點： 制造較復雜，成本稍高。 6. 合成疫苗： 將具有保護性免疫力的人工合成肽與適當載體結(jié)合后，再加入佐劑制成的疫苗稱為合成疫苗 優(yōu)點： 作用效果好，易于規(guī)模生產(chǎn)； 缺點： 研究難度大。 優(yōu)點： 操作簡單； 缺點： 免疫效果差 。 （五）魚類免疫效果的檢測方法 1. 免疫保護效果檢測： 接種疫苗 ?(24周 )致病菌攻毒 ?(1020d)成活率 2. 免。 （三）幾種常見魚類疫苗的制備方法 1. 病毒性疫苗（組織苗）的制備方法 勻漿 , 3000rpm,30min 上清液 +(800單位青霉素 +800單位鏈霉素 )/ml 病魚組織 +生理鹽水 沉淀 加 1‰ 福爾馬林， 32℃ 72h 安全檢測 冷凍保存 組織苗 效力檢測 免疫： 免疫學原理的應用 2. 細菌滅活疫苗的制備方法 擴大培養(yǎng) 5000rpm, 30min, PBS配制 病原菌 大量病菌 1%菌懸液 活菌檢測 安全檢測 410‰ 福爾馬林 毒性檢測 4℃ , 24h 疫苗 抗體效價檢測 免疫效果檢測 ‰ 疊氮鈉 攻毒試驗 4℃ 保存 免疫： 免疫學原理的應用 3. 脂多糖 (LPS)疫苗的制備 (主要針對 G) %formalin, 上清液 加 PBS 病菌擴大培養(yǎng) 5000rpm, 30min 沉淀 滅活菌懸液 4℃ , 透析 3d 90%苯酚 (1:1) LPS水溶液 水層 65℃ , 10min 聚乙二醇 2022 中間層 混合液 苯酚層 10000rpm, 30min 濃縮 LPS溶液 冷凍干燥 粗制 LPS LPS疫苗 PBS溶解，加熱去毒 免疫： 免疫學原理的應用 （四）魚類免疫應答的過程 1. 硬骨魚類參與免疫應答的細胞和器官 1) 參與免疫反應的細胞： 巨噬細胞、淋巴細胞、漿細胞 2) 參與免疫反應的器官： 胸腺、腎 (主要為頭腎 )、脾等。 優(yōu)點： 免疫效果好； 缺點： 操作困難，易損傷接種魚類，幼魚無法使用 。 優(yōu)點： 可除去有害成分，減少異常反應，提高免疫效果； 缺點： 制造過程復雜、成本高。 免疫： 免疫學原理的應用 （一）魚用疫苗的種類 A. 根據(jù)疫苗的獲得方法來分： 1. 死疫苗 (滅活疫苗 )： 熱滅活、化學滅活、紫外線滅活、超聲滅活等 優(yōu)點： 安全性好，制造簡單； 缺點： 免疫劑量大，免疫持久性差。 ： 將已知抗體與從病體中分離的病原進行血清學反應，以確定病原的種類，該法適于所有被診斷動物。 (2) 包埋前免疫染色： 組織固定 ? 厚切片 ?免疫染色 ?包埋 ?超薄切片? 投射電鏡觀察。 原理 ： （五）免疫電鏡技術(shù) 1. 定義： 在保持抗體免疫性的前提下，用高電子密度的標記物（如鐵蛋白、金等），或用經(jīng)細胞化學方法處理使電子密度增高的標記物（如辣根過氧化物酶等酶類）標記抗體后，將標記抗體與相應抗原結(jié)合，然后用電子顯微鏡觀察的技術(shù)。 2. 種類： 包括熒光免疫組織化學 (如熒光抗體 )技術(shù)和熒光免疫測定。計算 B/F值，繪制 B/F和 Ag量的關(guān)系曲線圖。 加待測抗原 加酶標抗體 已知抗體吸附 抗原抗體復合物 酶聯(lián)抗體抗原抗體復合物 免疫應用： 免疫學方法 （三）放射免疫測定技術(shù) (Radioimmunoassay, RIA) 1. 定義： 用放射性同位素標記來檢測抗原抗體反應的高靈敏度的技術(shù)。它目前包括 直接法、間接法、雙抗體夾心法、雙夾心法、抗原競爭法、抑制性測定法和橋聯(lián)法 等多種。 3. 標記酶： 辣根過氧化物酶（ HRP）和堿性磷酸酶；它們與抗原或抗體結(jié)合后活性不受影響。 (4) 特點： 簡單、特異性高；敏感性低、同時檢測多種抗原時較復雜。 免疫： 免疫學方法及其應用 四、現(xiàn)代免疫標記技術(shù)（ immunolabelling technique） 定義： 將抗原或抗體用熒光素、酶、放射性同位素或電子致密物質(zhì)等加以標記，以提高抗原抗體反應以及抗原或抗體檢測靈敏度的一類新技術(shù)。 ? : 是病毒在活體內(nèi)或細胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗，可用來檢查患病后或人工免疫后機體血清中中和抗體的增長情況，也可用來鑒定病毒或研究病毒抗原結(jié)構(gòu)。經(jīng)過一定泳動時間后，在比例最適處，形成肉眼可見的白色沉淀線。該方法可用來分析和鑒定復雜的抗原成分，或測定抗原、抗體提取物的純度。 2. 沉淀反應的種類與應用： 1) 經(jīng)典方法： a. 環(huán)狀沉淀反應： 在小試管中加入抗血清 + 緩慢加入待測抗原 ? (數(shù) 分鐘 )結(jié)果： 陽性 — 白色沉淀環(huán)； 陰性 — 無 ： 將已知抗體與待測抗原混勻于試管或凹玻片 ?結(jié)果：