【正文】 細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和 NK細(xì)胞表面相應(yīng)受體結(jié)合， 從而發(fā)揮調(diào)理吞噬和抗體依賴的細(xì)胞毒性 (ADCC效應(yīng) )，從而殺傷耙細(xì) 胞。 免疫： 特異性免疫 4) IgD： (1) 以單體形式存在于血清中，含量低，僅占人體血清 Ig總量的 1%。 Chapter 3. 免疫原理及應(yīng)用 3. 定比性： 抗原與抗體需按一定的比例結(jié)合 一般情況下，抗原表面的抗原決定簇是多價的，而抗體上的抗 原受體通常是單價的或二價的，二者只有以一定比例結(jié)合才能出現(xiàn) 可見的血清學(xué)反應(yīng)。 常用載體有人 O型紅細(xì)胞、乳膠顆粒、活性炭等，并因載體不同而分別稱為 間接血凝試驗 、 間接乳凝試驗 和 間接炭凝試驗 。該方法可用來分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分，或測定抗原、抗體提取物的純度。 ? : 是病毒在活體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗，可用來檢查患病后或人工免疫后機(jī)體血清中中和抗體的增長情況，也可用來鑒定病毒或研究病毒抗原結(jié)構(gòu)。 (4) 特點(diǎn)： 簡單、特異性高；敏感性低、同時檢測多種抗原時較復(fù)雜。它目前包括 直接法、間接法、雙抗體夾心法、雙夾心法、抗原競爭法、抑制性測定法和橋聯(lián)法 等多種。計算 B/F值，繪制 B/F和 Ag量的關(guān)系曲線圖。 原理 ： （五）免疫電鏡技術(shù) 1. 定義： 在保持抗體免疫性的前提下，用高電子密度的標(biāo)記物（如鐵蛋白、金等），或用經(jīng)細(xì)胞化學(xué)方法處理使電子密度增高的標(biāo)記物（如辣根過氧化物酶等酶類）標(biāo)記抗體后，將標(biāo)記抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合，然后用電子顯微鏡觀察的技術(shù)。 ： 將已知抗體與從病體中分離的病原進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)，以確定病原的種類，該法適于所有被診斷動物。 優(yōu)點(diǎn)： 可除去有害成分，減少異常反應(yīng)，提高免疫效果； 缺點(diǎn)： 制造過程復(fù)雜、成本高。 （三）幾種常見魚類疫苗的制備方法 1. 病毒性疫苗（組織苗）的制備方法 勻漿 , 3000rpm,30min 上清液 +(800單位青霉素 +800單位鏈霉素 )/ml 病魚組織 +生理鹽水 沉淀 加 1‰ 福爾馬林， 32℃ 72h 安全檢測 冷凍保存 組織苗 效力檢測 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 2. 細(xì)菌滅活疫苗的制備方法 擴(kuò)大培養(yǎng) 5000rpm, 30min, PBS配制 病原菌 大量病菌 1%菌懸液 活菌檢測 安全檢測 410‰ 福爾馬林 毒性檢測 4℃ , 24h 疫苗 抗體效價檢測 免疫效果檢測 ‰ 疊氮鈉 攻毒試驗 4℃ 保存 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 3. 脂多糖 (LPS)疫苗的制備 (主要針對 G) %formalin, 上清液 加 PBS 病菌擴(kuò)大培養(yǎng) 5000rpm, 30min 沉淀 滅活菌懸液 4℃ , 透析 3d 90%苯酚 (1:1) LPS水溶液 水層 65℃ , 10min 聚乙二醇 2022 中間層 混合液 苯酚層 10000rpm, 30min 濃縮 LPS溶液 冷凍干燥 粗制 LPS LPS疫苗 PBS溶解，加熱去毒 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 （四）魚類免疫應(yīng)答的過程 1. 硬骨魚類參與免疫應(yīng)答的細(xì)胞和器官 1) 參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞： 巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞 2) 參與免疫反應(yīng)的器官： 胸腺、腎 (主要為頭腎 )、脾等。 優(yōu)點(diǎn)： 操作簡單； 缺點(diǎn)： 免疫效果差 。 缺點(diǎn)： 弱毒（減毒）疫苗 — 安全性較差 異種疫苗 — 獲得比較困難 3. 化學(xué)疫苗： 以化學(xué)方法提取病菌有效成分 (如 LPS)制成 優(yōu)點(diǎn)： 免疫劑量小，免疫原性強(qiáng)，作用穩(wěn)定； 缺點(diǎn)： 制造較復(fù)雜，成本稍高。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 第五節(jié) 免疫學(xué)原理在魚蝦病害防治中的應(yīng)用 一、用于疾病的診斷 （免疫診斷方法有二類） ： 用已知抗原與從患病動物中提取的抗體進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)，以確定病原種類。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 該技術(shù)是將發(fā)光分析（ 化學(xué)發(fā)光 和生物發(fā)光 ）和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新型超微量分析技術(shù)。 2. 原理與方法： 其基本原理為：待測抗原和標(biāo)記抗原對有限量抗體存在 競爭性結(jié)合 ： Ag* + Ab ? Ag*Ab； Ag + Ab ? AgAb (1) 抗原用同位素 (如 131I、 3H等 ) 標(biāo)記后仍能與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合； (2) 將兩類抗原與抗體混合后，兩類抗原均能與抗體結(jié)合，當(dāng) Ag*和 Ab數(shù)量恒定，且 Ag*與 Ag之和大于 Ab上結(jié)合點(diǎn)數(shù)目時， Ag*與 Ag 存在競爭抑制： Ag數(shù)量增加， AbAb生成量增加， Ag*Ab數(shù)量就減少，游離的 Ag*就增多。 5. 特點(diǎn)： 敏感性高、特異性強(qiáng)，既可定性又可定量。 2. 熒光物種類： 異硫氰酸熒光素、羅丹明熒光素、二氯三嗪基氨基熒光素等 3. 種類： 包括直接法、間接法和補(bǔ)體法 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 例： 直接法： 將待測標(biāo)本（抗原）固定于玻片表面，滴加已知熒光抗體后再以緩沖液沖洗，干燥后于熒光顯微鏡下觀察。缺點(diǎn)是多組抗原抗體存在時沉淀線易重疊在一起，缺乏分辨力。 結(jié)果： 陽性 — 白色沉淀環(huán)； 陰性 — 無 b. 雙向免疫擴(kuò)散 (double immunodiffusion)： 預(yù)先制備瓊脂板，根據(jù)需要在瓊脂板上打孔，再將抗原、抗體分別加入不同孔內(nèi)，使兩者相互擴(kuò)散，若抗原抗體相對應(yīng)，則二者在合適比例處形成白色沉淀線。在該試驗 中，將出現(xiàn)明顯凝集反應(yīng)的血清最高稀釋度稱為該抗體的效價或滴度。 二、血清學(xué)反應(yīng)的特點(diǎn) 1. 特異性與交叉性： a. 特異性： 一種抗原一般只能與其相應(yīng)的抗體結(jié)合； b. 交叉性： 當(dāng)不同抗原具有相同抗原決定簇時，其結(jié)合又具有交叉性 ： a. 表面性： 抗原與抗體分子結(jié)合是分子表面的結(jié)合； b. 可逆性： 抗原抗體結(jié)合后，在一定條件下仍可分開，且其性質(zhì)不變。 (2) 人體含量僅次于 IgG (占 10 15%)，分子量為 1820萬 Da。分子量 15萬 Da. b. 作用： (1) 抗感染作用，抗毒素及大多抗菌和抗病毒抗體均屬 IgG； IgG還是唯一能通過胎盤的 Ig，是新生兒抗感染的重要因素。 1) 哺乳類： a. 人、鼠： IgG, IgA, IgM, IgD, IgE。 免疫球蛋白是化學(xué)結(jié)構(gòu)上的概念，但抗體是生物學(xué)功能上的概念。 Ig 過去稱為 ? 球蛋白，主要存在于血液和其他分泌液中。（產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，即 產(chǎn)生免疫記憶 ） 如：病毒、細(xì)菌、細(xì)胞及各種蛋白質(zhì)等抗原都屬 TD抗原 (2) 胸腺非依賴性抗原（ thymus independant antigen, TIAg）： TI抗原： 只含 B細(xì)胞抗原決定簇、不需 T細(xì)胞協(xié)助可直接激活 B細(xì)胞產(chǎn)生 Ab（只有 IgM） 的抗原 (只產(chǎn)生體液免疫，所以 無免疫記憶 ) 如：革蘭氏陰性菌的 LPS、莢膜多糖等。 4) 共同抗原與交叉反應(yīng) 共同抗原： 指具有相同的抗原決定簇的抗原。 抗原的特異性是由抗原分子表面的抗原決定簇決定的。 免疫原性與抗原和宿主種系關(guān)系遠(yuǎn)近有關(guān)，種系關(guān)系越遠(yuǎn)，免疫原性越強(qiáng)。 b. 耐受原 (tolerangen)： 能誘導(dǎo)機(jī)體對其表現(xiàn)無免疫應(yīng)答 (免疫耐受 )的抗原。 2) 抗原的兩種性能： a. 免疫原性： 指抗原分子能刺激機(jī)體免疫細(xì)胞，并使之活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生效應(yīng)分子（抗體）或細(xì)胞體（致敏 T細(xì)胞） 的性能 。 ④ IFNOγ可以調(diào)節(jié)抑癌基因 P53 和腫瘤壞死因子的表達(dá)來抑制瘤細(xì)胞的增殖促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的 凋亡。為大腦與軀干屏障 作 用： 防止病原和其他異物進(jìn)入大腦 免疫： 非特異性免疫 1) 吞噬細(xì)胞： 包括粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞 作用： 受病原和宿主產(chǎn)生的趨化因子作用接近并吞噬 或殺傷病原 2) 非特異性細(xì)胞毒細(xì)胞： 主要存在于腎臟和腹腔，血中少。 細(xì)胞因子 (Cytokines) ： 由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞（如纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等）合成和分泌的，具有調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生理功能的可溶性小分子蛋白質(zhì)。外周血中占淋巴細(xì)胞總數(shù)的 10~15%。 魚類免疫細(xì)胞主要存在于免疫器官、組織以及血液和淋巴液中。 B. 魚類脾的結(jié)構(gòu)與功能 a. 有頜類才有真正的脾，軟骨魚類脾較大，分化為紅髓和白髓，為造血器官；硬骨魚類無明顯紅髓和白髓分化，但同時有造血和免疫功能。淋巴濾泡主要由 B細(xì)胞構(gòu)成，接受抗原刺激后可出現(xiàn)生發(fā)中心，內(nèi)含增殖分化的 B細(xì)胞。 2） 胸腺 (Thymus)： 真骨魚類的胸腺位于 ？ ，它無皮質(zhì)與髓質(zhì)的分界線，胸腺由結(jié)締組織被膜環(huán)繞，實質(zhì)由上皮細(xì)胞網(wǎng)組成，在上皮細(xì)胞網(wǎng)中分布由淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和成熟的漿細(xì)胞等。 正常： 消除體內(nèi)衰老的和被破壞的細(xì)胞 異常： （過高）自身免疫病 自身免疫?。?自身抗體或自身致敏淋巴細(xì)胞攻擊自身靶抗原細(xì)胞和組織，使其產(chǎn)生的病理性改變或功能障礙。 2）水產(chǎn)動物 免疫學(xué)（ Immunology） ： 指研究水產(chǎn)養(yǎng)殖動物免疫系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)與生理功能的一門新興學(xué)科。 簡單說，抗體是一種免疫球蛋白 (Immunoglobulin, Ig) Chapter 3. 免疫學(xué)原理 與 應(yīng)用 3. 免疫反應(yīng)的功能 1) 免疫防御： 為機(jī)體清除異己物質(zhì)的一種免疫保護(hù)功能。 免疫： 水產(chǎn)動物免疫的基本概念 二、免 疫 系 統(tǒng) 的 組 成 中樞免疫器官： 骨髓、胸腺、法氏囊（禽類） 免疫器官 外周免疫器官： 淋巴結(jié)、脾、黏膜相關(guān)的淋巴組織 造血干細(xì)胞