sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)分子量(文件)
【正文】 項(xiàng)目（五個(gè)單項(xiàng)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目）。一般說(shuō)來(lái)，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在 202100至 15000 kD 之間時(shí)，電泳遷移率與分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系 。 標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量（標(biāo)準(zhǔn)試劑盒）： 97400kD、 66200kD、 43000kD、 31000kD、 20210kD、 14400kD。 電泳結(jié)束后，撬開(kāi)玻璃板，將凝膠板做好標(biāo)記后放在大培養(yǎng)皿內(nèi)，加入染色液，染色 過(guò)夜。l 和 10181。l。 分離膠， 溶液立即傾入制膠模板中 (1 5ｍｍ模板 )，加少許蒸餾水，待膠凝固后，倒出水并用濾紙把剩余的水分吸干，按比例 配好濃縮膠， 連續(xù)平穩(wěn)加入濃縮膠至離邊緣5mm處，樣梳需一次平穩(wěn)插入，靜置 40分鐘，待模板中的膠定型后，輕輕取出梳形樣品槽模具，梳口處不得有氣泡，拔出樣梳后，在上槽內(nèi)加入緩沖液。 實(shí)驗(yàn)器材 ? 垂直板電泳裝置 ? 直流穩(wěn)壓電源電泳厚膠濃度后要做 8各小時(shí) ， 薄膠 5各小時(shí) ） ? 電泳儀 ? 標(biāo)準(zhǔn)型酸度計(jì) （ TLD802B） ? 離心機(jī)等 四、 實(shí)驗(yàn)過(guò)程 如： 免疫球蛋白 G 分子量的測(cè)定 （一）血清 γ球蛋白的提取 硫酸胺鹽析沉淀法 （二） γ球蛋白 脫鹽 純化 葡聚糖凝膠過(guò)濾（柱層析法）除去硫酸胺，得到 γ球蛋白 （去年完成的基金項(xiàng)目） （三）純化免疫球蛋白 G DEAE離子交換纖維素法純化免疫球蛋白 G。 （ 10）固定液：取 50%甲醇 454ml，冰乙酸 46ml混勻。 三、 實(shí)驗(yàn)試劑和器材 材料 實(shí)驗(yàn)試劑 : 兔磷酸化酶 B MW=97,400 牛血清白蛋白 MW=66,200 兔肌動(dòng)蛋白 MW=43,000 牛碳酸酐酶 MW=31,000
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