葡聚糖凝膠測蛋白質(zhì)分子量(文件)
【正文】 種分子如都能進入內(nèi)部空隙，即Kd都等于1，它們雖然分子大小有不同，但也沒有別離效果。假設(shè)用分子量的標準蛋白質(zhì)在一定型號葡聚糖凝膠柱上層析，精確測其洗脫體積，并以洗脫體積Ve對分子量的對數(shù)logMW作圖，可獲得一條標準曲線。 藍色葡聚糖2000(10mg/ml)；Sephsdex G100；牛血清白蛋白〔2mg/ml)〔Mr 67 000)。 二、裝柱 層析柱必須粗細均勻，通常柱愈長，別離效果愈好，但柱過長，反而(fǎn 233。在柱中加約1/3柱容積的洗脫液，并趕凈尼龍膜下方氣泡，完全(w225。把已經(jīng)溶脹好的凝膠調(diào)成薄漿，傾入柱內(nèi)，膠粒逐漸擴散下沉。 三 上樣 保持床面的穩(wěn)定，翻開柱的出口，待柱中洗脫液流至距床外表1～2mm時，關(guān)閉出口，用滴管將樣品慢慢地至柱床外表，翻開出口，當樣品滲入床中接近床外表1mm時關(guān)閉出口，參加少量洗脫液，再翻開柱的出口，使床外表的樣品也全部滲入柱內(nèi)。L1氯化鉀溶液以每管3ml/10min流速洗脫，用自動局部收集器收集流出液。大分子不能進入凝膠顆粒中的靜止相中，只留在凝膠顆粒之間的流動相中，因此以較快的速度首先(shǒuxiān)流出層析柱，而小分子那么能自由出入凝膠顆粒中，并很快在流動相和靜止相之間形成動態(tài)平衡，因此就要
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