抗體效價(jià)的elisa測(cè)定(文件)
【正文】 泳原理的應(yīng)用及操作 Western Blotting or immunoblotting a specific primary antibody 1979, Towbin 1975, Southern, Southern blotting 1977, Alwine, Northern blotting 1979, Towbin, Western Blotting 1982, Reihart, Eastern blotting ,雙向蛋白質(zhì)印記 Western blotting: Antibodies can be used to detect specific proteins Alternate detection method – Secondary antibodies Memebrane: 吸附生命大分子的固體材料 NC, nitrocellulose 硝酸纖維素膜 結(jié)合率： 80 ug Pr/cm2 便宜，可簡(jiǎn)單快速封閉非特異性抗體的結(jié)合 NDM, nylondensed membrane 尼龍膜 結(jié)合率： 480 ug Pr/cm2 DBM, diazobenzyloxymethyl 重氮芐氧甲基膜 濕法轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)：將 gel 和 membrane 夾在 blotter paper 中，浸在轉(zhuǎn)移裝置的 buffer中，通電 45min 或 over night 可完成。大塊的可能使接觸周圍的凝膠，并允許目前的替 代路線，從而使傳輸效率。 4. sandwich blotter paper – membrane gel blotter paper make sure no air bubbles are trapped The membrane must therefore be positioned correctly the first time. Do not try to adjust. 三明治 吸墨紙紙 –膜凝膠 記事簿紙 確保沒(méi)有氣泡被困 膜因此必須正確定位第一時(shí)間。 連接到一個(gè)合適的電源供應(yīng)裝置。 8 mm x 7 mm minigels at 100 mA. Molecular Weight Transfer Period 20,000 15 minutes 20,00080,0000 30 minutes 80,000 45 minutes Problem： 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移效率低？ （轉(zhuǎn)移后對(duì)凝膠或膜染色進(jìn)行觀察） 1. transfer buffer中加入 20％甲醇或加入終濃度為%SDS, 可增加膜結(jié)合蛋白質(zhì)的能力； 2. 使用小孔徑的硝酸纖維素膜 3. 轉(zhuǎn)移后的膜在含 %戊二醛的 TBS中浸泡 45min。打開(kāi)電源并設(shè)定約 / 厘米 ~ 2凝膠。 5. Hold the cover level and slide it gently down onto the stack. 持有的封面和滑動(dòng)它輕輕地放到堆棧 6. weigh down the lid in order to ensure even contact with the
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