【正文】 的增長，辣木葉片的總黃酮含量呈不規(guī)律變化，當(dāng)葉齡增長到 45d 時，葉片的總黃酮含量達(dá)最高，為 ％；其次為生長 15d 的幼齡葉和 60d 的老齡葉，總黃酮含量為 ％ ~％之間；生長 30d 的壯齡葉的總黃酮含量最低，只有 ％。 ab AB 30 177。因此。 表 8 不同 器官辣木總黃酮含量的變化 （ n=3） 器官 總黃酮含量 /% 葉 177。 c C 花柄 177。 g G 種子 177。其中 11 月采收的辣木葉總黃酮含量與其他 4 個月采收的差異極顯著 ： 10月采收的辣木葉總黃酮含量間差異不顯著；它們都顯著高于 9 月采收的辣木葉總黃酮含量。 177。 177。 10 177。 177。 8 月份炎熱多雨，不利于辣木的生長，葉片的擴(kuò)展變緩，因此，黃酮的含量較高；進(jìn)入 9 月份 ， 氣溫趨于涼爽，雨水減少，很適于辣木的生長，生長速度快于黃酮的形成速度，使各器官的總黃酮含量都達(dá)到了最低水平；到 11 月份，氣溫逐漸降低 ， 辣木的生長幾乎趨于停頓，此時，黃酮的合 成速度快于辣木的生長速度，黃酮的積累量達(dá)到了最高。 177。 177。 注 ： 表中縱向的大寫一母代表 同一 管理水平 不同 器官的總黃酮 含量 的 極顯 著性，小寫字母代表同一管理水早不同 器 官總黃酮 含量 的顯著性；橫向的大寫字母代表 同一 器 官不同 管理 水平的辣木總黃酮含量的 極顯著 性 。葉柄和莖在低水平的管理?xiàng)l件下總黃酮含量比在中等和高管理水平條件下的高，總黃酮含量依次為低 中 高，葉在中等管理水平下多糖含量最高 (見表 11，圖 9)。 177。 177。 將樹冠分為向陽和背陽兩部分 。 不同方法提取的辣木葉多糖量在 ～ ％之間，其中超聲波提取法測得的多糖量最高，回流法次之， 水提法多糖量最低，五種方法間多糖量的差異均達(dá)到了極顯著水平。 A 為吸光度值， x 為多 糖 含量 (mg).實(shí)驗(yàn)表明標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度在 ～ ， 與吸收度呈良好的線性關(guān)系。張濤等測定結(jié)果與本研究一致 。 莖 177。 4 溶劑用量對 辣木 葉多精量的影響 圖 11 不同溶劑用量下提取的辣木葉多糖量 條件 ： 5g， 80℃ ，蒸餾水，回 流 3 次，每次 120min 如圖 11 所示，隨溶劑用量的增加，辣木葉多糖的量呈先增后降的變化趨勢。 提取溫度對辣木葉多糖量的影響 圖 12 不同提取溫度下提取的辣木葉多糖量 條件 ： 5g， 20 倍的蒸餾水，回流 3 次，每 次 120min 其他條件一定時，溫度對 辣木 葉多糖量的影響如圖 12 所示。從圖 13 可以看出 ： 隨著提取時間的增加，辣木葉多糖量增加，提取時間達(dá)到 120min 時，多糖量達(dá)到最大，當(dāng)提取時間繼續(xù)加長時，多糖的量明顯下降 。辣木葉多糖量呈先上升后下降的趨勢。園此， 辣木 多糖的最佳提取條件為 A2B1C3D3， 即提取 3 次，溶劑用量 15 倍， 90℃水浴，每次 120min。其測定結(jié)果與本研究有一定差異 。 b AB 45 177。即充分展開的45d 壯齡葉中 的多糖含量顯著高于幼齡葉和老齡葉 . 3 2 不同器官的 辣木 多糖含量 表 18 不同 器官辣木多糖含量的變化 （ n=3） 器官 多糖 含量 /% 葉 177。 b B 花柄 177。 a A 種子 177。 177。 Dd 177。 Dd 10 177。 177。 極顯著大于 9 月采收的 辣木 葉多糖含量 ： 而葉柄和莖的多糖含量在各采收期中差異不顯著，因此 ， 該種植地的 辣木 最佳采收期是 11 月 。 其中葉的多糖含量投顯著大于葉柄和莖的多糖含量。 177。 177。 注 ： 表中縱向的大寫一母代表 同一 管理水平 不同 器官的 多糖 含量 的 極顯 著性，橫向的大寫字母代表同一器官不同管理水平的辣木多糖含量的極顯著性。 177。 177。 由表 22 的結(jié)果可以看出 ： 同一器官不同朝 向的多糖含量葉、葉柄、莖均沒有顯著性差異，比較辣木同朝向不同器官的多糖含量發(fā)現(xiàn)，葉的多糖含量顯著大于葉柄和莖的含量，而葉柄和莖的多轄含量差異不顯著 。對于評價和監(jiān)測黃酮含量往往采用分光光度法 ， 分光光度法白20 世紀(jì) 90 年代以來由于其成本低、便于操作等特點(diǎn)，一直廣泛用于植物中黃酮類 化臺物含量的測定，是一種快捷有效的方法。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品。實(shí)驗(yàn)中 辣木 中黃酮類化舍物是用醇和酮等溶劑提取的，考慮到保持溶劑的一致性，減少實(shí)驗(yàn)誤差，采用 NaNO2 Al（ NO3） 3NaOH 顯色體系 。 水浴溫度對總黃酮得率的影響表明，并非水浴溫度越高，總黃酮得率就越高 。乙醇濃度對總黃酮提取的影響是乙醇的濃度越高，總黃酮的得率越低，表明 辣木 中的黃酮類化合物具有一定的水溶性 .80％的乙醇兼有極性、非極性和中等極性的特點(diǎn) .適合提取混合物成分。 不同植 物的黃酮種類不同 ， 應(yīng)用價值也可不相同 ， 關(guān)于辣木黃酮的功效及其在臨 床上的應(yīng)用需進(jìn)一步深入研究。 本研究結(jié)果表明，英東生態(tài)園 辣木 種植地的辣木葉換算因子為 ，張濤等 采用苯酚一硫酸法測定辣木葉中多搪?lián)Q算因子為，陳瑞嬌、彭珊珊等 采用 葸酮 硫酸比色法測定辣木葉中多糖換算因子為 ，其測定結(jié)果與本研究有較大差異，原因可能與測定方法、辣木產(chǎn)地、辣木葉采集時間、采集部位等因素有關(guān)。因此，在辣木多塘的提取中應(yīng)避免長時間高溫抽提 。多糖鏈?zhǔn)怯蓡翁菤埢ㄟ^ O醚鍵來連接，自由度與柔性較大，加之多糖鏈上自由羥基很多 ， 易形成氫鍵 ， 使糖鏈間相互締合 。因此在分離提取時必須考慮提取劑、沉淀劑、溫度、pH 等因素的影響，如稀酸提取時間宜短，溫度不超過 60℃，以肪止糖苷鍵斷裂 ： 而多糖樣品脫水干燥時。推測辣木多糖具有廣泛的應(yīng)用前景 。因此，以提取辣木黃酮為目的是要注意原材料器官的選擇 ， 葉片是辣木的重要產(chǎn)品器官之一，葉片中的總黃酮含量僅次于花柄，可達(dá) %。 這些結(jié)果表明，黃酮在 辣木 體內(nèi)的合成速度和辣木的生長速度不成比例，也就是說，緩慢的生長更有利于 辣木 黃酮的積累。 關(guān)于辣木多糖含量的影響因素 辣木多糖含量的器官問差異也很大。因此， 以獲得多糖為目的的辣木栽培除考慮不同器官的多糖含量外 。關(guān)于辣木多糖的種類、分子量、功效以及它們與環(huán)境、栽培條件的關(guān)系等問題都有待進(jìn)一步研究。通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)選的辣木多耱提取的最佳條件為 ： 以 15倍的溶劑用量 .在 90℃ 水浴條件下，提取 3 次 。當(dāng)葉齡增長到 45d 時，辣木葉片的有效成分含量達(dá)最高，其中總黃酮含量為 ％ ， 多糖含量為 ％ 。并通過實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證此條件是有效的。 在 80℃的水浴條件下，提取 3 次，每次 提取條件下，辣木總黃酮量為 %通過實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證此條件是有效的。 賀玉林等對黨參質(zhì)量變異的研究表明，黨參不同產(chǎn)地、不同加工方式和生長年限的多塘含量不同 .其質(zhì)量也有所差異 。多糖含量最高和最低的器官相差達(dá) 倍，沒有黃酮的差異大。既不 能片面追求生物量的最大化，也不能片面追求黃酮含量的最大化。 在研究辣木黃酮含量和環(huán)境因素的關(guān)系時我們發(fā)現(xiàn)，凡是使辣木生長速度加快的條件都會引起黃酮含量的降低。 關(guān)于辣木總黃酮含量的影響因素 辣木總黃酮含量器官 間 的差異很大，總黃酮含量最高的是花柄 ， 可達(dá) 6 31％；較高的是葉、花和葉柄 ： 根中的總黃酮含量最低 ， 只有 ％。 植物多糖作為免疫增強(qiáng)劑己引起人們的廣泛關(guān)注，臨床用于糖屎病和腫瘤病人 的 治療己取得較好療效。多糖的空問結(jié)構(gòu)與生物活性密切相關(guān)，因糖鏈的柔性大和締合性導(dǎo)致易變性，引起構(gòu)象變化從而影響生物活性 。提取時間不宜太長，一般常規(guī)提取為每次 l～ 2h， 造成 辣木 多糖容易解聚的原因可能是其分子量較小的緣故，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，分子量較小的多糖組分在水溶液系統(tǒng)中的溶解度和聚結(jié)穩(wěn)定性較同類大分子量多 糖 優(yōu)越 ， 而在醇等有機(jī)溶劑中則相反。 常規(guī)提取植物多搪的方法往往是先用 95％乙醇或甲醇加熱回流提取以除去單糖、低聚糖、甙類等干擾性成分，然后再加水多次抽提其中的多糖類成分。苯酚 硫酸法的實(shí)驗(yàn)原理為多糖在濃硫酸的作用下水解生成單糖，并迅速脫水成醛，然后與苯酚縮合生成有色化臺物，用分光光度法測定其含量 .本法簡單快速，靈敏度高，顯色穩(wěn)定 ， 重現(xiàn)性好。 黃酮種類較多包括黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、黃烷酮類等 ， 廣義的范圍還包括查耳酮、嗅酮、異黃烷酮及茶多酚 ， 本實(shí)驗(yàn)只是對辣木的總黃酮進(jìn)行了提取井初步測定其在不同材料中的含量。 溫度過低降低了黃酮的溶解度 ， 不能充分地把材料中的總黃酮提取出來 。黃酮 類化合物的紫外光譜圖上主要有兩個吸收帶 ： 環(huán)肉桂酰 系統(tǒng)引起的吸收帶 I(300550nm)和環(huán)苯酰系統(tǒng)引起的吸收帶Ⅱ(240280nm)?？紤]到比色法測定黃酮類化學(xué)物質(zhì)吸收波長時，因溶荊的種類、 PH 值和溶劑含量的不同，波長會發(fā)生明顯的紅移或紫移 。 由于黃酮類化合物與鋁枯形成配臺物，在可見區(qū)能獲得穩(wěn)定的吸收峰 .因此，實(shí)驗(yàn)中選擇鋁配合物顯色體系來測定辣木提取物中黃酮類化合物的含量。有關(guān)它的提取、分離、分析和藥理方面的研究報(bào)道很多，對于黃酮類化舍物的分離以及單一黃酮成分的定量分析，常用的 有；氣相色譜法、高效液相色譜法 (HPLC)。有相同字母表示差異不顯著。 向陽 177。高管理水平：每株辣木施有機(jī)肥 3050 斤；中等管理水平：沒施肥，但在種植地上種了 2 季花生；地管理水平：沒有施肥也沒種其他作物。 177。 葉柄 177。 綜合表 21 和圖 1 1 17 可以 看出 ： 同一器官在不同的管理水平下其多糖含量均未達(dá)到顯著水平，但葉柄和莖在低水平的管理?xiàng)l件下其含量略比在中等和高管理水平條件下的多糖含量高，依次為 ： 低 中 高；葉在中等管理水平下多糖含量最高 。而葉柄和莖之間的多糖含量差異不顯著。 注 ： 表中縱向的大寫字母代表同一 器官 不同 采收期 多糖 含量 的 極顯著 性，小寫字母代表同一器官不同采 收期 多糖含量 的顯著性；橫向的大寫字母代表同一采收期不同器官 多糖 含量 的 極顯著 性 ， 小寫字母代表同一采收期不同器官 多糖含量的顯著性 ， 有 相同 字母表示茬異不顯著，不同字母表示差異顯著(P 多重比較采用 Duncan). 比較辣木同一器官，不同采收期的多糖含量 ， 從表 20 可以看出，無論是哪一器官，都是在 11 月采收時多糖含量最高，可 達(dá) ： 葉 ％、葉柄 ％、莖 ％ 。 Dd 177。 177。 Dd 8 177。 各器官問除花與果、花柄與種子之間多糖含量差異不顯著外，其他器官間多糖含量差異均達(dá)到了極顯著水平 。 b B 果莢 177。 f F 莖 177。 b AB 注 ： 表中相同字母表示差異不顯著，不同字母表示差異顯著（ P,P,多重比較采用 Duncan） 由表 17 可以看出 ： 隨著葉齡的增長， 辣木 葉片的多糖含量呈遞增趨勢，當(dāng)葉齡增長到 45d 時，辣木葉多糖含量最高，為％， 45d 葉齡葉的多糖顯著大于 15d、 30d 和 60d 葉齡葉的多糖含量。 2 生長發(fā)育對 辣木 多糖含量的影響 不同葉齡葉片辣木多糖含量變化（ n=9） 葉齡 /d 多糖 含量 /% F 15 177。 陳瑞嬌研究結(jié)果為 ： 對辣木提取效果影響程度最大的是固液比 。 多因素正交試驗(yàn)下的辣木葉多糖量 表 15 辣木葉多糖提取條件的正交試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)號 總黃酮量 /% A B C D 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 K1 K2 K3 X1 X2 X3 R 表 16 不同提取條件下辣木葉 多糖 量的方差分析 誤差來源 離差平方和 自由度 方差 方差比 顯著性 Ss f s F A 2 B 2 C 2 D 2 誤差 8 對提取條件組合的正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析 (表 15)和方差分析 (表 16)，由表 15 的極差分析結(jié)果表明，在考察的四個因素中，各個因素對辣木提取效果影響程度不同，各 因素 影響辣木多糖得率的順序依次為 ： 提取次數(shù) (D)提取時間 (C)溶劑用量(B)提取溫度 (A)。 多糖類物質(zhì)受其他水溶性物質(zhì)的影響、從而其量下降 。 多糖量呈增加趨勢，其中當(dāng)溫度由 70℃上升到 80℃ 時， 多糖類物質(zhì)浸出率上升最快 ， 由 ％上升到2l_92％ ， 溫度由 60℃上升到 70℃ ， 80℃ 上升到 90℃ ： 時多糖類物質(zhì)浸出率增幅較平緩，溫度達(dá)到 90℃ 以后，多糖量變化又明顯增高。 溶劑用量在 20 倍以上時，辣木葉多糖量明顯下降 ，當(dāng)溶劑用量為 30 倍時，多糖量降到 20 25％ 。辣木各部位多糖與葡萄糖之間的換算因子如表 14 所示 。 3 2 辣木多糖一葡萄糖換算因子 表 14 不同部位多糖的轉(zhuǎn)換因子（ n=3） 材料 轉(zhuǎn)換因 子 f 方差 置信度（ 95%） 葉 177。測定結(jié)果見