專題一基因工程選修三dna重組技術(shù)的基本工具,基因工程-wenkub
2023-03-23 23:32:52 本頁(yè)面
【正文】 外顯子 內(nèi)含子 終止子 成熟 mRNA 目的基因的獲取 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測(cè)與鑒定 有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性。 黏性末端或平末端 DNA1 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT DNA2 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 重組 DNA GGCATCTTAA AATTCCGTAG 由于切割后的載體和目的基因具有相同的末端，故重組 DNA存在 3中可能連接 。 ？ 思考討論 何表達(dá)的？ 、 DNA、染色體 之間是怎樣的關(guān)系？ 蘇云金芽孢桿菌 毒蛋白 按照人們的愿望 ，在 DNA分子水平上 進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過(guò) 體外 DNA重組 和 轉(zhuǎn)基因技術(shù) ，賦予生物以 新的遺傳特性 ，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。即 、 、 。 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可進(jìn)行遺傳、表達(dá)和發(fā)揮作用 載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)，才能實(shí)現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 特定 DNA片段 ： 體外模擬雙鏈 DNA復(fù)制 （二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 四種脫氧核苷酸 (dNTP) 一對(duì)引物： 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶） 模板 DNA( 含有目的基因 ) ： 與目的基因的起始段互補(bǔ)核苷酸序列 一段已知目的基因的核苷酸序列 ： 變性 （ 90℃ 95℃ ）：目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈； 復(fù)性 （ 55℃ 65℃ ）：引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合； 延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補(bǔ)的 DNA鏈； 約 2n PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較 PCR技術(shù) DNA復(fù)制 相同點(diǎn) 原料 條件 不同點(diǎn) 解旋方式 場(chǎng)所 酶 結(jié)果 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復(fù)制 主要細(xì)胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細(xì)胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個(gè) DNA分子 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 目的基因 推測(cè) 推測(cè) 化學(xué)合成 例：根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： （三）化學(xué)方法人工合成的目的基因 適用：基因比較小，核苷酸序列已知 ： 使目的基因 在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 ，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因 能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 。 ③ 過(guò)程： ④ 優(yōu)點(diǎn)： 經(jīng)濟(jì)有效 （ 2） 基因槍法 （ 3） 花粉管通道法 缺點(diǎn)：成本較高 受體細(xì)胞 (單子葉植物 ) 我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)，轉(zhuǎn)基因抗蟲棉 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 ① 方法： 顯微注射法 ② 程序： ③常用的動(dòng)物受體細(xì)胞： 受精卵和卵細(xì)胞 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 ① 原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少 ② 方法： 用 Ca2+處理細(xì)胞 → 感受態(tài)細(xì)胞 (吸收環(huán)境中 DNA生理狀態(tài) ) → 表達(dá)載體 (緩沖液 )與感受態(tài)細(xì)胞混合 → (溫度 )感受態(tài)細(xì)胞吸收 DNA分子 （二）方法 將目的基因?qū)? 植物細(xì)胞 將目的基因?qū)? 動(dòng)物細(xì)胞 將目的基因?qū)? 微生物細(xì)胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— 感受態(tài)細(xì)胞法 三、將目的基因?qū)胧荏w紳胞 四、目的基因的檢測(cè)與鑒定 （一）檢測(cè)（分子水平） 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的 DNA上是否插入了目的基因 ① 提取轉(zhuǎn)基因生物的基因組 DNA ② 用含目的基因的 DNA片段用 放射性同位素 等作標(biāo)記，以此做 探針 ③ 使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交 ,若顯示出雜交帶 ，表明染色體已插入染色體 DNA中 （ 1） 方法 : DNA分子
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