專題一基因工程選修三dna重組技術(shù)的基本工具,基因工程-wenkub
2023-03-23 23:32:52 本頁面
【正文】 外顯子 內(nèi)含子 終止子 成熟 mRNA 目的基因的獲取 基因表達載體的構(gòu)建 目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的檢測與鑒定 有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性。 黏性末端或平末端 DNA1 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT DNA2 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 重組 DNA GGCATCTTAA AATTCCGTAG 由于切割后的載體和目的基因具有相同的末端，故重組 DNA存在 3中可能連接 。 ？ 思考討論 何表達的？ 、 DNA、染色體 之間是怎樣的關(guān)系？ 蘇云金芽孢桿菌 毒蛋白 按照人們的愿望 ，在 DNA分子水平上 進行嚴格的設計，并通過 體外 DNA重組 和 轉(zhuǎn)基因技術(shù) ，賦予生物以 新的遺傳特性 ，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。即 、 、 。 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并可進行遺傳、表達和發(fā)揮作用 載體進入受體細胞穩(wěn)定表達，才能實現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。 多聚酶鏈式反應 體外 特定 DNA片段 ： 體外模擬雙鏈 DNA復制 （二）利用 PCR技術(shù)擴增目的基因 四種脫氧核苷酸 (dNTP) 一對引物： 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶） 模板 DNA( 含有目的基因 ) ： 與目的基因的起始段互補核苷酸序列 一段已知目的基因的核苷酸序列 ： 變性 （ 90℃ 95℃ ）：目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈； 復性 （ 55℃ 65℃ ）：引物與單鏈相應互補序列結(jié)合； 延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補的 DNA鏈； 約 2n PCR技術(shù)擴增與 DNA復制的比較 PCR技術(shù) DNA復制 相同點 原料 條件 不同點 解旋方式 場所 酶 結(jié)果 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復制 主要細胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個 DNA分子 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 目的基因 推測 推測 化學合成 例：根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： （三）化學方法人工合成的目的基因 適用：基因比較小，核苷酸序列已知 ： 使目的基因 在受體細胞中穩(wěn)定存在 ，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因 能夠表達和發(fā)揮作用 。 ③ 過程： ④ 優(yōu)點： 經(jīng)濟有效 （ 2） 基因槍法 （ 3） 花粉管通道法 缺點：成本較高 受體細胞 (單子葉植物 ) 我國科學家獨創(chuàng)，轉(zhuǎn)基因抗蟲棉 將目的基因?qū)雱游锛毎? ① 方法： 顯微注射法 ② 程序： ③常用的動物受體細胞： 受精卵和卵細胞 將目的基因?qū)胛⑸锛毎? ① 原核生物特點：繁殖快、單細胞、遺傳物質(zhì)少 ② 方法： 用 Ca2+處理細胞 → 感受態(tài)細胞 (吸收環(huán)境中 DNA生理狀態(tài) ) → 表達載體 (緩沖液 )與感受態(tài)細胞混合 → (溫度 )感受態(tài)細胞吸收 DNA分子 （二）方法 將目的基因?qū)? 植物細胞 將目的基因?qū)? 動物細胞 將目的基因?qū)? 微生物細胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— 感受態(tài)細胞法 三、將目的基因?qū)胧荏w紳胞 四、目的基因的檢測與鑒定 （一）檢測（分子水平） 檢測轉(zhuǎn)基因生物的 DNA上是否插入了目的基因 ① 提取轉(zhuǎn)基因生物的基因組 DNA ② 用含目的基因的 DNA片段用 放射性同位素 等作標記，以此做 探針 ③ 使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交 ,若顯示出雜交帶 ，表明染色體已插入染色體 DNA中 （ 1） 方法 : DNA分子
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