生化工程6-種子擴(kuò)大-wenkub
2023-05-09 12:04:14 本頁面
【正文】 ? 單細(xì)胞：菌體健壯、菌形一致、均勻整齊，有的還要求有一定的排 列方式； ? 霉菌、放線菌：菌絲粗壯、對(duì)某些染料著色力強(qiáng)、生長(zhǎng)旺盛、菌絲分枝情況和內(nèi)含物情況好。但接種量過大或者過小，均會(huì)影響發(fā)酵。 接種齡與接種量 ? 接種齡 ：種子的培養(yǎng)時(shí)間。 ? 一級(jí)種子二級(jí)發(fā)酵：谷氨酸棒桿菌 ? 二級(jí)種子三級(jí)發(fā)酵：青霉菌 ? 三級(jí)種子四級(jí)發(fā)酵：灰色鏈霉菌 ? 種子罐級(jí)數(shù) 取決于： ? （ 1）菌種生長(zhǎng)特性、孢子發(fā)芽及菌體繁殖速度； ? （ 2）所采用發(fā)酵罐的容積。 ? 種 子罐的作用是使有限的數(shù)量的孢子或菌絲生長(zhǎng)繁殖成大量的菌絲體。 ? 孢子培養(yǎng)基是為了獲得孢子，應(yīng)注意避免孢子發(fā)育為菌體，所以通常使用營(yíng)養(yǎng)限制的固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)時(shí)間一般為 4~14天。培養(yǎng)溫度一般為 37℃ 。 ? 培 養(yǎng)良好的種子接入發(fā)酵罐后 ，可使 發(fā)酵生產(chǎn)周期縮短，設(shè)備利用率提高 。種子擴(kuò)大培養(yǎng) 種子擴(kuò)大培養(yǎng)是指將保存在 砂土管 、 冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種 接入試管斜面活化后 ， 再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)而獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程 。種子液質(zhì)量的優(yōu)劣對(duì)發(fā)酵生產(chǎn)起著 關(guān) 鍵作 用 。細(xì)菌菌體培養(yǎng)時(shí)間一般為 1~2天，產(chǎn)芽孢的細(xì)菌培養(yǎng)則需要 5~10天。 ? 3，放線菌孢子的制備 放線菌的孢子培養(yǎng)一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。 ? （二）液體種子制備 ? 對(duì) 于產(chǎn)孢子能力不強(qiáng)或孢子發(fā)芽慢的菌種，如產(chǎn)鏈霉素的灰色鏈霉 菌、產(chǎn) 卡那霉素的卡那鏈霉 菌可 以用搖瓶液體培養(yǎng)法。 ? 種 子罐的培養(yǎng) 基因 不同菌種而異，但其原則 為營(yíng)養(yǎng)豐富， 采 用易被菌利用的成分 如葡萄糖、玉米漿、磷酸鹽等，還需供給足夠的無菌空氣，并不斷攪拌，同時(shí)應(yīng)考慮與發(fā)酵培養(yǎng)基成分相靠近。 ? 細(xì)菌 ：生長(zhǎng)快，種子用量比例少，級(jí)數(shù)也較少，二級(jí)發(fā)酵。 ? 種齡過于年輕：前期生長(zhǎng)緩慢，發(fā)酵周期延長(zhǎng) ? 種齡過于年老：導(dǎo)致生產(chǎn)能力衰退 ? 接種量 ：移入的種子液體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例。過大會(huì)引起溶氧不足，影響產(chǎn)物合成；而且會(huì)過多移入代謝廢物，也不經(jīng)濟(jì)；過小會(huì)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率。 ? 2，生化指標(biāo) 種子液的糖、氮、磷的含量和 pH變化 。蛋白胨加工原料不同如魚胨或骨胨對(duì)孢子影響也不同 。不同的發(fā)酵工藝方式各有其優(yōu)缺點(diǎn)。這個(gè)時(shí)期稱為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 隨著細(xì)胞生長(zhǎng)，培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)物減少，廢物積累，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)速率下降，進(jìn)入減速期和穩(wěn)定期。 穩(wěn)定期的應(yīng)用意義 ? 發(fā)酵產(chǎn)物形成的重要時(shí)期（抗生素等），生產(chǎn)上應(yīng)盡量延長(zhǎng)此期，提高產(chǎn)量，措施如下： ? 補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（補(bǔ)料） ? 調(diào) pH ? 調(diào)整溫度 代謝產(chǎn) 物生成 與微生物生長(zhǎng)的關(guān)系 ? 微生物發(fā)
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