【正文】 ulfamethoxazole SMX 300 ≤ 12 1316 ≥ 17 胺 類 復方新諾明 Sulfamethoxazole/Trimethoprim SXT ≤ 10 1115 ≥ 16 呋喃 呋喃妥因 Nitrofurantoin FT 300 ≤ 14 1516 ≥ 17 類 痢特靈 Furazolidone FR 300 ≤ 14 1516 ≥ 17 喹 萘啶酸 Naidixic Acid NA 30 ≤ 13 1418 ≥ 19 諾 諾氟沙星 Norfloxacin NOR 10 ≤ 12 1316 ≥ 17 酮 環(huán)丙沙星 Ciprofloxacin CIP 5 ≤ 15 1620 ≥ 21 類 氧氟沙星 Ofloxacin OFL 5 ≤ 12 1315 ≥ 16 碳青霉 亞胺配能 IMI 10 ≤ 13 1415 ≥ 16 烯類 Imipenem 細菌分離培養(yǎng)與鑒定程序 1. 基本要求 : 細菌 分離培養(yǎng)的全過程需在嚴格無菌的條件下進行。 4 四個步驟一次。 5 如果在記錄結(jié)果時發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)皿上沒有細菌菌落生長，或者細菌菌落生長不均勻，或者發(fā)現(xiàn)所有藥敏紙片的周圍沒有抑菌圈，則必需取經(jīng)過純培養(yǎng)的致病菌，重復上述 2 3 將培養(yǎng)皿放置于 37℃的恒溫箱中培養(yǎng) 1824 小時。 1 在無菌條件下，取新鮮無污染的可疑含菌臨床病料或經(jīng)過純培養(yǎng)的致病菌均勻涂抹培養(yǎng)基表面。 1密封于塑料袋中，放 48℃的冰箱中保存（不超過 7 天）備用。 藥敏試驗檢驗程序 1 用加樣器取 5微升混勻的待檢抗生素稀釋液加到培養(yǎng)基中的濾紙片上，待液體吸入濾紙片和培養(yǎng)基后，將平皿置于 37℃溫箱中培養(yǎng) 1618 小時。 濾紙片：用打孔器將優(yōu)質(zhì)濾紙片制成直徑為 6毫米的圓形紙片，經(jīng) 121℃高壓蒸汽滅菌，干燥后密閉保存于 48℃冰箱中備用。 試驗微生物：選擇診斷室保存的對待檢抗生素 (或其同類抗生素 )敏感的致病微生物株作為試驗微生物。檢查其他有關(guān)化驗結(jié)果。檢查病變組織的病理組織學檢查結(jié)果。檢查病雞群的血清學檢測結(jié)果。 2 30分鐘，然后用鹽酸酒精分化液作用 1030秒鐘；繼續(xù)流水沖洗 1015分鐘； 25分鐘； ； 70%、 80%、 90%、 95%酒精溶液中脫水各 1分鐘；然后置于 100%酒精溶液中兩次 ，每次 23分鐘； 510 分鐘； ； 37℃溫箱中 2448 小時，烘干。 將切片置于烤箱中烤干 (烤片溫度一般不超過 50℃，時間約 13小時 )。浸蠟時間視組織塊大小可做適當調(diào)整。 組織透明：用二甲苯透明。 組織水洗：將固定好的病變組織分成兩份，一份放回 10%福爾馬林溶液中作備份，另一份用紗布包裹后，用流水沖洗 56小時。對于特殊組織要做特殊的處理。 11. 檢查腦、神經(jīng)。 7. 用解剖刀切開胸肌，檢查深層胸肌及注射油苗情況。對于要取腦組織做病原分離的情況，則 只能用前一種方法。 2. 用注射器采病雞血液（較大雞：從翅膀 靜脈采；較小雞：從心臟采）放在采血管中并編號。 10．用空氣將酶聯(lián)儀調(diào)零。 6．重復第 3步。 3．用將近 300ul 一倍濃度的洗液洗滌每孔 4遍或更多次。使用時將濃洗液 1:20稀釋，如： 20ml 濃洗液加入 380ml水中，可用于一塊酶標板的洗滌。 16．計算結(jié)果。 12．在室溫下孵育顯色 15 分鐘。 8．在每孔中加入 100ul兔抗 p27辣根過氧化物酶結(jié)合物。 5．在室溫下孵育 60 分鐘。 2．在 A1， A2 孔中各加入 100ul 陰性對照樣品。 （五） 傳染性支氣管炎（ IB）的 HA 和 HI 試驗 操作步驟及用量同于雞新城疫的 HA 和 HI 試驗，只是在試驗中所用的紅細胞懸液的濃度為 %。 25．用 12 頭移液器吸取 1%紅細胞懸浮液 加入各孔中。 2．紅細胞凝集抑制試驗（ HI） 21．用移液器向第 1 孔中加生理鹽水 ，第 2 孔至第 12 孔每孔加生理鹽水 。 能將 4 單位病毒物質(zhì)凝集紅細胞的作用完全抑制的血清最高稀釋度倍數(shù)，稱為該血清的紅細胞凝集抑制效價，用以 2 為底數(shù)的對數(shù)（ Log2）表示。 45． 用 12 頭移液器吸取 1%紅細胞懸浮液，各孔加入中 毫升。 41． 用 12 頭移液器向每個孔加入生理鹽水 毫升。如上例，病毒液 HA 效價為 1:256，在 HI試驗時，病毒抗原液 ml 內(nèi)須含 4 個凝集單位，則應(yīng)將病毒液 作成 256/4=64 倍的稀釋液。在 1822℃室溫下作用 40 分鐘后觀察結(jié)果。第 12 孔做紅細胞對照孔。 2．紅細胞凝集試驗（ HA） HA 試驗主要是測定病毒的紅細胞凝集價，以確定紅細胞凝集抑制試驗所用的病毒稀釋 倍數(shù)（抗原單位）。如此反復洗滌三次，將最后一次離心后的紅細胞泥，按 1% 的稀釋度加入生理鹽水（ 1 毫升紅細胞泥加 99 毫升 % 的生理鹽水）。 2．陰性：受檢血清與抗原之間不形成沉淀線或者陽性血清的向毗鄰受檢孔直伸或其向外側(cè)偏彎者，此受檢血清判為陰性。 6 孔各加入待檢血清（抗原和待檢血清各孔加約 30 微升，每加一份血清更換一個滴頭。將孔中的瓊脂用 68號針頭輕輕向上挑出即可。大體有三種，即： PBS， %PBS， BBS。 二．免疫擴散試驗 免疫擴散試驗又稱瓊脂凝膠擴散試驗 (AGP)。并檢測一下抗原是否有自凝現(xiàn)象，如抗原污染細菌或霉菌，出現(xiàn)自凝顆?；蛎箞F時應(yīng)廢棄。同時，陰陽性對照應(yīng)分別呈陰陽性結(jié)果。 保健中心檢驗程序 血清學 一．血清平板凝集試驗 細菌等顆粒性抗原的懸液與相應(yīng)的抗體結(jié)合后 ,在電解質(zhì)的參與下，抗原顆粒相互凝集形成團塊 ,這種現(xiàn)象叫做凝集反應(yīng)。 本試驗應(yīng)在 22℃以上的環(huán)境中進行，每次進行反應(yīng)時應(yīng)有陽性血清和抗原對照。如抗原一次使用不完，剩余部分應(yīng)放回冰箱保存。其原理是抗原抗體在含有電解質(zhì)的瓊脂凝膠中可以向四周自由擴散，當抗原、抗體擴散至適當部位相遇時，則出現(xiàn)肉眼可見的沉淀線，這是抗原抗體的特異性結(jié)合物，可以用此試驗測定未知的抗體或抗原。瓊脂平板由供應(yīng)室制備。在酒精燈上稍加熱，蒸發(fā)其表面水分，即封底，目的是防止瓊脂 與平皿底脫離。）加至孔滿為止，但不要溢出。 三．紅細胞凝集試驗（ HA） 和紅細胞凝集抑制試驗（ HI）的操作程序 （一） 雞新城疫（ ND）的 HA 和 HI 試驗 1．試驗準備 11．抗原：從中監(jiān)所或 哈獸研買的已知抗原。 13． 被檢血清：由雞場送來的裝有全血的采血管，經(jīng) 10000 轉(zhuǎn) /分鐘，離心 5 分鐘，待血清析出后使用。本試驗采用 96 孔 V型微孔塑料板，可同時測 8 個樣品。每次至少重復測 4 排病毒液，以消除偶然誤差。如下圖： 孔號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 病毒 稀釋倍數(shù) 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 紅細胞對照孔 稀釋液 （ m） 病毒液 （ ml） 棄去 1%紅細胞 （ ml） 判定 （例） ? ? ? ? ? ? ? ? ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++ 注： ++++表示完全凝集， ++表示不完全凝集， 表示不凝集。 4．紅細胞凝集抑制試驗（ HI） 新城疫病毒凝集紅細胞的作用，能被特異性抗體抑制。 42． 用單頭移液器吸取待檢血清 毫升加入第一孔中，反復擠壓 5 次，使稀釋液與血清混勻，再吸出 毫升加入第二孔中，如此連續(xù)稀釋 至第 12 孔，最后棄去 毫升。 46． 置于震蕩器上震蕩混勻 12 分鐘，在 1822℃室溫下作用 40 分鐘后觀察結(jié)果。上表 HI 效價為 8（ Log2）。 22．用單頭移液器吸取待檢血清 加入第 1 孔中，反復擠壓稀釋 5 次，吸出 加入第 2 孔中，如此連續(xù)稀釋至第六孔，血清稀釋倍數(shù)依次為 1:101:320，最后從第六孔中吸出 棄去。 26．置于震蕩器上震蕩混勻 12 分鐘，在室溫 1822℃靜置 40 分鐘后觀察結(jié)果。 （六） 檢測血清的禽淋巴白血病 ELISA實驗程序 準備：所有試劑在使用之前都應(yīng)回復到室溫。 3．在 A3， A4 孔中各加入 100ul 陽性對照樣品。 6．將所有孔中的液體甩入一個廢液回收容器 內(nèi)。 9．在室溫下孵育 60 分鐘。 13．在每孔中加入 100ul終止液終止反應(yīng)。 （七） 檢測蛋清的禽淋巴白血病 ELISA實驗程序 濃的蛋白樣品有時很難靠標準 的水洗過程洗凈。另外，所有試劑在使用之前都應(yīng)回復到室溫，并且應(yīng)輕旋混勻?；蛴?300ul 一倍濃度的洗液浸泡 2分鐘，然后將洗液甩掉。 7．在每孔中加入 100ul TMB底物溶液。 11．在 650nm波長下測量并記錄標準對照孔和樣品孔的光吸收值。 3. 處死病雞。 4. 檢查病、死雞羽毛、皮膚、眼、鼻、喙等外表組織器官。 8. 用解剖剪從龍骨左側(cè)打開胸腹腔，依次檢查 肝臟、心臟、氣囊、脾臟、性腺、腎臟、胃腸道及其內(nèi)容物、法氏囊和胸腹腔璧等。 12. 在北京家禽育種有限公司保健中心雞只尸體剖檢記錄表中詳細記錄病理剖檢結(jié)果。如腦組織，要從腦正中垂直縱切后固定；消化道上皮等不定形的組織，要放在硬紙片上幫助定形后固定。 組織脫水：將組 織依次放在下列溶液中脫水，脫水時間依組織塊大小而定。透明時間視組織塊大小和實際透明情況而定，一般不超過 1小時。 組織包埋：用不銹鋼勺取溶解的硬蠟和組織一起放在事先疊好的長方體形硬紙盒中包埋，待蠟塊完全凝固后進行下一步。 石蠟切片的染色： 常用 蘇木素 伊紅染色法。 3. 切片的觀察 : 借助光學顯微鏡觀察組織切片的病理變化情況，記錄觀察結(jié)果。詳細檢查北京家禽育種有限公司保健中心病例背景登記表中的各項內(nèi)容，了解有關(guān)信息。 4 6 8一般選擇大腸桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌、綠膿桿菌四種常見致病菌作為試驗微生物。 2. 方法： 根據(jù)《抗菌藥物藥敏試驗判定標準》中同類 (作用相同或相似 )抗生素藥敏試驗紙片含藥劑量，將待檢抗生素用滅菌蒸餾水稀釋成一定濃度的溶液或混懸液 (每 5微升液體含有 1片藥敏紙片中的抗生素量 )。 按照藥敏試驗檢驗程序記錄結(jié)果，并判定試驗微生物對受檢抗生素的敏感性。 材料： 1 1 3 試驗菌：新鮮可疑帶菌病料，或者經(jīng)過純培養(yǎng)的致病菌。 2 2 1， 2 3既要防止外界細菌污染病原菌 , 又要防止病原菌污染周圍環(huán)境。 對于可疑厭氧菌或其它有特殊條件要求的細菌（如嗜血桿菌）感染的病料，要滿足相應(yīng)的條件要求做病原的分離培養(yǎng)。 觀察細菌在固體培養(yǎng)基上的生長特性及菌落形態(tài)特性。 細菌和霉菌 一：孵化廳細菌監(jiān)測技術(shù) ： （棉試子涂擦檢驗法） :培養(yǎng)基及器械 (皿 )數(shù)量的準備應(yīng)根據(jù)送檢計劃事先進行，凡與被檢樣品 直接接觸的物品 :平皿、吸管、生理鹽水等，必需經(jīng)過高壓滅菌處理及紫外線消毒 。 : 登記、編號 : 化驗室接到樣品后，首先根據(jù)送檢單對其進行清點和簦記。 標號 : 加樣前先要將棉拭子的編號標記在平皿上 ,每個棉拭子使用四個平皿。 培養(yǎng) :待凝固后倒置于 37℃恒溫箱中培養(yǎng)。產(chǎn)硫化氫菌株有的菌落中心帶有黑色 ,即為沙門氏可疑菌落。 A: 產(chǎn)酸 。 血清學鑒定試驗 : 檢查培養(yǎng)物有無自凝性 在潔凈的玻片上加一滴生理鹽水 ,將待檢培養(yǎng)物混合于生理鹽水滴內(nèi) ,使其成為均一性的渾濁懸液 ,將玻片輕輕搖動