企業(yè)營(yíng)銷策略未來(lái)趨勢(shì)解析-wenkub
2023-02-06 19:03:01 本頁(yè)面
【正文】 HBsAg，其敏感度可達(dá) 。 解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性。Ab 抗體的親和力（ affinity），可以用平衡常數(shù) K表示：K=[Ag基礎(chǔ) :抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。Ab] ／ [Ag][Ab] ,Ag原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 特異性 抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點(diǎn)之間。原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 免疫測(cè)定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原，因此免疫測(cè)定的應(yīng)用范圍極廣。 原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 雙抗體夾心法測(cè)抗原此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如 HBsAg、HBeAg、 AFP等。乙肝標(biāo)志物中抗 HBsAg的檢測(cè)常采用本法。原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體 當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 ABSELISA法 ① ：固相支持物；② ：樣品；③ ：特異性 IgG；④ ：生物素化抗小鼠 IgG （ Biotin）；⑤ ：辣根過(guò)氧化物酶 HRP酶標(biāo)鏈親和素（ Avidin）；⑥ ： DAB顯色液；⑦ ：顯色；原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果3. ELISA的試劑 (A、 B、 C三部分 )ELISA中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物。 良好的 ELISA板應(yīng)該是 吸附性能好 ， 空白值低 ， 孔底透明度高 ，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間 性能相近 。大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的 疏水基團(tuán) ，故更易吸附到固相載體表面。 優(yōu)點(diǎn)：試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。一般只含有一個(gè)抗原決定簇，純度高，特異性也高，但由于分子量太小，往往難于直接吸附于固相上。腹水中單抗的濃度較高，特異性亦較強(qiáng)，因此不需要作吸收層析處理，直接包被。包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。常用封閉劑： %%的 BSA。原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 ELISA的試劑準(zhǔn)備 B 結(jié)合物 即酶標(biāo)記的抗體（或抗原）是 ELISA中關(guān)鍵的試劑 1 酶的催化活性 2抗體（或抗原）的免疫活性 3含有或少含有游離的抗體（或抗原） 4結(jié)合物尚要有良好的穩(wěn)定性。原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 酶純度高，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，專一性強(qiáng)，性質(zhì)穩(wěn)定，來(lái)源豐富，價(jià)格不貴，受檢標(biāo)本中不存在相同的酶。原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 結(jié)合物的制備酶標(biāo)記抗體的制備方法主要有兩種，即戊二醛交聯(lián)法和過(guò)碘酸鹽氧化法。（ 2）過(guò)碘酸氧化法：適用含糖量較高的酶。 制得結(jié)合物，最適的工作濃度就是指結(jié)合物稀釋至這一濃度時(shí)，能維護(hù)一個(gè)低的本底，并獲得測(cè)定的最佳靈敏度，達(dá)到最合適的測(cè)定條件和測(cè)定費(fèi)用的節(jié)省。另外再加入抗生素（例如慶大霉素）和防腐劑（ HRP結(jié)合物加硫柳泵， AP結(jié)合物可加疊氮鈉）。原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果試劑準(zhǔn)備 C 酶的底物原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果 酶的底物 HRP的底物OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色，用酸終止酶反應(yīng)后，在 492nm處有最高吸收峰，靈敏度高，比色方便，是 HRP結(jié)合物最常用的底物。E原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果TMB經(jīng) HRP作用后共產(chǎn)物顯藍(lán)色。HRP對(duì)氫受體的專一性很高，僅作用于 H2O小分醇的過(guò)氧化物和尿素過(guò)氧化物 (urea peroxide)。 AP也有發(fā)熒光底物（磷酸 4甲基傘酮），可用于 ELISA作熒光測(cè)定，敏感度較高于用顯色底物的比色法。加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱；在測(cè)定中得到的吸光值與受檢標(biāo)本吸光值比較，可以估計(jì)標(biāo)本物質(zhì)的量。以血清標(biāo)本為例：血漿中除尚含有 纖維蛋白原 和 抗凝劑 外，其他成份同血清。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在 LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 37℃ 是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。室溫溫育的反應(yīng)，操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指 2025℃ ，但具體操作時(shí)可根據(jù)說(shuō)明書的要求控制溫育。ELSIA洗滌：達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。洗滌的方式除某些 ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外，手工操作有 流水沖洗式和 浸泡式兩種：原理類型試劑準(zhǔn)備對(duì)照標(biāo)本結(jié)果（ 1）流水沖洗式 流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌，洗滌液為蒸餾水，自來(lái)水。 （ 2）浸泡式 微量滴定板多采用。反應(yīng)的溫度
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