【正文】 陷。 (FHC) (LPLD) (HbS) (ADA) (PKU)等 分子病 (molecular diseases) ?分子病通常是指源于蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)改變而產(chǎn)生蛋白質(zhì)功能異常所致的遺傳性疾病。 3. LPL 活性中心由 Ser132 Asp156 His241 組成， ApoCⅡ 為其激活因子?；加羞@種遺傳疾病的小孩通 常最后都會因感染而死亡，很難活到成年，即使一場常見的水痘，對于患者來說都是致命的打擊，他（她）們只能一直過著一種 “ 與世隔絕 ” 的生活 —— 避免外 出，靜靜地呆在家里的無菌環(huán)境中，無休止地使用大量抗生素來與細(xì)菌和病毒作斗爭。其中 8種癌癥又占我國癌癥總死亡的80％以上，它們依次是：肺癌，肝癌，胃癌，食道癌，直結(jié)腸癌，宮頸癌，乳腺癌和鼻咽癌。 ? 上世紀(jì)末，心血管疾病被多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是中國和大多數(shù)國家的第一殺手，這一觀點(diǎn)統(tǒng)治了比較長的時(shí)間。蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，蛋白質(zhì)是基因的表達(dá)產(chǎn)物。 和保證。 ：同義突變，錯(cuò)義突變，無義突變，移碼突變，終止密碼突變和非編碼區(qū)的突變等等。 （ Western blot) PCR （ PCR）是基于細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制原理而發(fā)展建立的細(xì)胞外大量復(fù)制 DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。 電泳遷移率與 DNA ，雙鏈DNA的電泳遷移率與其鏈長呈反相關(guān)，據(jù)此建立了 PCRRFLP技術(shù)。 /甲基化系統(tǒng)，通過甲基化保護(hù)自身的 DNA不被破壞。 限制性 內(nèi)切酶 命名 EcoRⅠ ? E co R Ⅰ 核酸內(nèi)切酶命名一般由四部分組成。 Ⅰ 。 MstⅡ 酶切識別位點(diǎn) : ↓ CCTNAGG GGANTCC ↑ (Glu) GGAATCC GAA , GAG ↑ (Val) GGTATCC GUA , GUG ? 擴(kuò)增片段的酶切 (A) MstⅡ 酶切識別位點(diǎn) : ↓ CCTNAGG GGANTCC ↑ HbA ↓ CCTTAGG GGAATCC GAA, GAG (Glu) ↑ HbS CCATAGG GGTATCC GUA,GUG (Val) 擴(kuò)增片段的酶切 (B) HbA CCTTAGG∥ CCTTAGGCCTTAGG GGAATCC∥ GGAATCCGGAATCC ∣ ∥ ∣ ∣ HbS CCTTAGG∥ CCATAGG CCTTAGG GGAATCC∥ GGTATCCGGAATCC ∣ ∥ ∣ Hb A ↓ CCTTAGG GGAATCC ↑ Hbs CCATAGG GGTATCC 酶切產(chǎn)物的電泳 PCRRFLP應(yīng)用的關(guān)鍵 （主要是點(diǎn)突變）與疾病的發(fā)生密切相關(guān)。 多態(tài)性（突變）的確定 300百萬個(gè) SNP（ single nucleotide polymorphism ）位點(diǎn)，其中多數(shù)已被確定具有巨大的應(yīng)用價(jià)值。 C1595?G顛換并沒有直接影響目前常用的限制性內(nèi)切酶的識別序列，利用錯(cuò)配堿基引物是導(dǎo)入限制性內(nèi)切酶識別序列是常用的技術(shù)和途徑。 已知突變有和無的確定（如鐮刀性貧血）與基因多態(tài)性的篩查（如載脂蛋白 E基因多態(tài)性的檢測）。一般提倡擴(kuò)增片段在 200400bp之間。同時(shí)可以通過急劇降溫防止復(fù)性。 率一般多利用恒溫電泳。 。 PCRSSCP基因突變的檢測中發(fā)現(xiàn)的基因突變需要 DNA測序確定，同時(shí)通過DNA測序確定突變的類型和形式。該技術(shù)是PCR擴(kuò)增技術(shù)和電泳技術(shù)的巧妙結(jié)合。 鐮刀狀細(xì)胞貧血的產(chǎn)前診斷 LPL基因突變的診斷 ，甘油三酯（ TG）水平低于（ 150 mg/dl） 濁靜置后可出現(xiàn)“ 奶油蓋 ” ，高達(dá)36mmol/ L（ 3200mg/dl） 確定入選測定人員 (404名 ) ? 血漿 ?空腹肘靜脈采血 ?EDTA抗凝全血 ? ? 血脂測定 TKM法提取基因組 DNA （ TG,TC和 HDLc） ? PCR擴(kuò)增 LPL基因片段 （ 調(diào)節(jié)區(qū) ， 編碼外顯子和部分內(nèi)含子 ） ? 瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增效果 ? 擴(kuò)增基因片段加熱變性進(jìn)行電泳 （ SSCP） ? 電泳凝膠硝酸銀染色 ? 電泳圖譜異常樣品進(jìn)行 DNA測序 ? （ 外顯子 9進(jìn)行 RFLP） 探討基因突變與血脂水平的可能關(guān)系 （ 條件允許進(jìn)行家系調(diào)查 ） ? 420例血脂正常人群 Ser447?Stop 對血脂水平影響的研究 表 1 引物序列及退火溫度 目的基因片段 引物序列 擴(kuò)增片段長度 退火溫度 調(diào)節(jié)區(qū) 上游引物 5180。 203bp (142bp ~ +61bp) 55℃ 外顯子 2 上游引物 5180。 36bp+161bp+32bp= 229bp* 54℃ 外顯子 3 上游引物 5180。 25bp+180bp+27bp= 232bp* 56℃ 外顯子 4 上游引物 5180。 43bp+112bp+46bp= 201bp* 57℃ 外顯子 5 上游引物 5180。 20bp+234bp+24bp= 278bp* 56℃ 外顯子 6 上游引物 5180。 39bp+243bp+38bp= 320bp* 56℃ 外顯子 7 上游引物 5180。 75bp+122bp+40bp= 238bp*