【正文】 統(tǒng)治療其他類(lèi)似疾病提供重要的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。通過(guò)透皮治療組、灌胃治療組和空白組的肉芽腫數(shù)據(jù)的對(duì)比分析，可以確定吡喹酮不僅能殺滅血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)，而且具有抗肉芽腫的作用。針對(duì)血吸蟲(chóng)卵肉芽腫的特殊病理結(jié)構(gòu)，我們?cè)O(shè)計(jì)了一種能夠使抗血吸蟲(chóng)病首選藥物吡喹酮透過(guò)皮膚、跨越肉芽腫遞送屏障的透皮給藥系統(tǒng)。HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY碩士學(xué)位論文MASTER’S DEGREE DISSERTATION吡喹酮透皮給藥對(duì)日本血吸蟲(chóng)病蟲(chóng)卵肉芽腫的影響 EFFECT OF PRAZIQUANTEL TRANSDERMAL ADMINISTRATION ON SCHISTOSOMA JAPONICUM EGG GRANULOM研 究 生:王熠CANDIDATE：WANG YI導(dǎo) 師:鄭新生 教授SUPERVISOR：PROFESSOR ZHENG XINSHENG專(zhuān) 業(yè):農(nóng)藥學(xué)MAJOR：PESTICIDE SCIENCE研究方向:FIELD：藥物劑型DOSAGE FORMS中國(guó) 武漢WUHAN，CHINA二○一二年六月JUNE，201251 / 59分類(lèi)號(hào) 密級(jí) 內(nèi)部華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文吡喹酮透皮給藥對(duì)日本血吸蟲(chóng)病蟲(chóng)卵肉芽腫的影響 Effect of praziquantel transdermal administration on schistosoma japonicum egg granuloma研究生:王熠指導(dǎo)教師:鄭新生 教授 專(zhuān)業(yè)：農(nóng)藥學(xué) 研究方向：藥物劑型 獲得學(xué)位名稱(chēng)：農(nóng)學(xué)碩士 獲得學(xué)位時(shí)間：2012年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院二○一二年六月目 錄 摘 要 1Abstract 2縮略語(yǔ)表 41 前言 5 日本血吸蟲(chóng)病及防治現(xiàn)狀 5 血吸蟲(chóng)概述 5 血吸蟲(chóng)病發(fā)病機(jī)制 6 日本血吸蟲(chóng)病蟲(chóng)卵肉芽腫形成過(guò)程 7 血吸蟲(chóng)病臨床類(lèi)型 7 我國(guó)血吸蟲(chóng)病疫情現(xiàn)狀 8 血吸蟲(chóng)病治療概況 9 透皮給藥概述 11 透皮給藥發(fā)展概況 11 透皮給藥的特點(diǎn) 12 透皮給藥的過(guò)程 12 透皮吸收的影響因素 15 透皮給藥系統(tǒng)研究進(jìn)展 16 吡喹酮治療血吸蟲(chóng)病概述 17 吡喹酮概述 17 吡喹酮的體內(nèi)代謝 17 吡喹酮的毒性與副作用 18 吡喹酮?dú)⑾x(chóng)作用與殺蟲(chóng)機(jī)制 19 吡喹酮對(duì)蟲(chóng)卵肉芽腫的作用 20 吡喹酮透皮給藥的研究進(jìn)展 21 選題的目的與意義 212 材料與實(shí)驗(yàn)方法 23 23 23 實(shí)驗(yàn)材料 23 主要實(shí)驗(yàn)儀器 23 PZQ混合組分溶媒的篩選及透皮性能預(yù)測(cè) 24 PZQ在混合溶劑中溶解度的測(cè)定 24 PZQ在水油兩相溶液間分配系數(shù)的測(cè)定 24 PZQ透皮劑對(duì)肝臟的毒性試驗(yàn) 26 PZQ藥劑的配制及給藥過(guò)程 26 肝臟毒性試驗(yàn)動(dòng)物模型的建立 26 肝臟病理切片的制作及病理檢查 27 日本血吸蟲(chóng)卵肉芽腫的治療實(shí)驗(yàn) 27 27 283 結(jié)果與討論 29 PZQ的溶解度測(cè)定及其在臨床應(yīng)用意義 29 29 PZQ在混合溶媒中的溶解度 29 PZQ多組分透皮劑在臨床應(yīng)用的意義 32 PZQ的油水分配系數(shù)及其透皮性能預(yù)測(cè) 33 PZQ在油/水兩相溶液間分配系數(shù)的測(cè)定 33 PZQ多組分透皮劑的透皮性能預(yù)測(cè) 34 PZQ透皮劑的吸收及皮膚刺激性觀察 34 PZQ對(duì)肝臟的毒理實(shí)驗(yàn) 35 PZQ對(duì)日本血吸蟲(chóng)卵肉芽腫的作用 37 PZQ治療對(duì)日本血吸蟲(chóng)卵肉芽腫的數(shù)目的影響 37 PZQ透皮治療對(duì)日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵肉芽腫結(jié)構(gòu)的影響 38 PZQ治療對(duì)日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵肉芽腫體積的影響 41 PZQ透皮給藥對(duì)肉芽腫的作用 42 肉芽腫消退機(jī)制的探討 444. 結(jié)論 46參考文獻(xiàn) 47致 謝 52附錄 53摘 要血吸蟲(chóng)病危害嚴(yán)重，傳播范圍廣泛，對(duì)全球人類(lèi)健康和畜牧業(yè)發(fā)展帶來(lái)嚴(yán)重威脅。在制備了濃度為300mg/ml的吡喹酮透皮劑，確定它在體內(nèi)能夠維持較高的血藥濃度并持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間的基礎(chǔ)上，首先通過(guò)藥物的毒性試驗(yàn)以確定合適的經(jīng)皮給藥劑量，然后對(duì)血吸蟲(chóng)病動(dòng)物模型實(shí)施透皮給藥治療并探討吡喹酮經(jīng)皮給藥對(duì)肉芽腫的作用。此外，本課題從乙二醇苯醚（EGPE）、四氫呋喃（THF）、油酸（OA）、二甲亞砜（DMSO）和1,4二氧六環(huán)五種溶液的理化性質(zhì)、配比、溶解度、油水分配系數(shù)入手，旨在開(kāi)發(fā)多組分的混合透皮劑，使它們對(duì)藥物的滲透產(chǎn)生協(xié)同作用，使吡喹酮的透皮效果更佳。 關(guān)鍵詞：血吸蟲(chóng)病 蟲(chóng)卵肉芽腫 吡喹酮 透皮給藥 作用機(jī)制Abstract Schistosomiasis is a very important parasitic helminth disease which is a serious threat to the development of livestock and the health of people in the word. The granulomatous reaction induced by the schistosome eggs present in tissues of the liver and intestine resulting in the destruction of tissues and formation of granuloma. Furthermore, the granulomatous in liver induce hepatic fibrosis and cirrhosis which finally result in death of the patients. So, it39。 Transdermal delivery。我國(guó)目前仍有30多萬(wàn)血吸蟲(chóng)病患者，近萬(wàn)頭耕牛受到感染血吸蟲(chóng)（雷正龍等，2010）。宿主由于皮膚接觸含尾蚴的疫水而被感染，血吸蟲(chóng)在體內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育為成蟲(chóng)并寄生在宿主的門(mén)靜脈系統(tǒng)，排出的蟲(chóng)卵引起肝與結(jié)腸產(chǎn)生肉芽腫反應(yīng)。血吸蟲(chóng)是吸蟲(chóng)的一類(lèi)，具有吸蟲(chóng)某些共有的特征。成蟲(chóng)雌雄異體，生活狀通常是雌雄合抱。成熟的尾蚴鉆出釘螺體外，浮游于水體表面，脫去尾巴鉆入皮膚轉(zhuǎn)變成童蟲(chóng)，童蟲(chóng)進(jìn)入血管移至門(mén)靜脈系統(tǒng)處寄生，22天后發(fā)育為成蟲(chóng)，周而復(fù)始，這就是血吸蟲(chóng)的生活史，如圖11所示。從免疫學(xué)角度分析，血吸蟲(chóng)病實(shí)際上是一種細(xì)胞免疫和體液免疫均參與的蟲(chóng)卵肉芽腫性疾病。成蟲(chóng)及其代謝物所致病變：發(fā)育成熟的血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)消化道及生殖器官分泌的排泄物及代謝產(chǎn)物作為抗原持續(xù)地進(jìn)入宿主體內(nèi)，與相應(yīng)的抗體形成免疫復(fù)合物沉積于器官，造成疾病。隨著病情的發(fā)展，卵內(nèi)毛蚴死亡、蟲(chóng)卵鈣化吸收，肉芽腫周?chē)念?lèi)上皮細(xì)胞變成纖維細(xì)胞，產(chǎn)生膠原纖維，肉芽腫逐漸纖維化。雌蟲(chóng)剛產(chǎn)出的未成熟蟲(chóng)卵沉積在組織內(nèi)不形成典型的蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)，其周?chē)乃拗鹘M織無(wú)反應(yīng)或輕微的反應(yīng)，僅引起局部結(jié)締組織輕度增生。急性期的肉芽腫易液化而出現(xiàn)膿腫樣損害，中心常常出現(xiàn)壞死，蟲(chóng)卵周?chē)写罅康氖人嵝约?xì)胞聚集。 血吸蟲(chóng)病臨床類(lèi)型根據(jù)日本血吸蟲(chóng)病的病程和主要臨床表現(xiàn)，我國(guó)將其分為急性、慢性與晚期三個(gè)階段。急性血吸蟲(chóng)病多見(jiàn)于初次感染者或者再次大量感染尾蚴的慢性或晚期血吸蟲(chóng)病患者。晚期血吸蟲(chóng)病是由于患者反復(fù)重度感染，經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間的發(fā)展而形成。 2010年，全國(guó)估計(jì)有血吸蟲(chóng)病病人33萬(wàn)多人，與2009年相比減少了11%左右，急性血吸蟲(chóng)病病人43例，較去年的77例下降了44%。具體原因如下：（1）釘螺分布廣，環(huán)境復(fù)雜，難以消滅。（2）傳染源種類(lèi)繁雜，數(shù)目龐大。為解決中國(guó)能源匱乏和水資源分布不均，這幾年在血吸蟲(chóng)病疫區(qū)大力興建大壩、溝渠及南水北調(diào)工程，很大程度地改變了這些地區(qū)的江水湖泊流域，這些都可能導(dǎo)致血吸蟲(chóng)傳染源的擴(kuò)散和遷移?？傮w而言，我國(guó)的血吸蟲(chóng)病防治工作面臨著資金短缺、物資匱乏、學(xué)術(shù)支撐不足的困難。研究期間，大致經(jīng)歷了從蟲(chóng)源性疫苗（死疫苗、活疫苗）、抗感染分子疫苗到基因工程疫苗等其他新型疫苗一系列探索研究。直到60年代初中國(guó)學(xué)者雷興翰等合成第一個(gè)非銻劑抗血吸蟲(chóng)藥物呋喃丙胺，各種抗血吸蟲(chóng)新藥才相繼問(wèn)世，奧沙尼喹、敵百蟲(chóng)、硝硫氰胺和吡喹酮的研制與應(yīng)用，使得血吸蟲(chóng)病化療有了突破性進(jìn)展。 呋喃丙胺（F30066）于1960年由上海醫(yī)藥工業(yè)研究所開(kāi)發(fā)研制，是我國(guó)首次開(kāi)發(fā)的非銻劑類(lèi)抗血吸蟲(chóng)藥物。 奧沙尼喹（羥氨喹，Oxamniguine）合成于1969年，后用于臨床治療，由于該藥僅僅對(duì)曼氏血吸蟲(chóng)有效，且療效好，毒性低，成為全球治療曼式血吸蟲(chóng)病的主要藥物之一。中國(guó)于70年代初用于治療日本血吸蟲(chóng)病，效果不佳，WHO于1997年將敵百蟲(chóng)從抗血吸蟲(chóng)基本藥物中刪除。吡喹酮的發(fā)明，開(kāi)創(chuàng)了血吸蟲(chóng)病化療的新局面，使得抗血吸蟲(chóng)病有了突破性進(jìn)展，是目前治療血吸蟲(chóng)病的首選藥物。 透皮給藥概述 透皮給藥發(fā)展概況透皮給藥系統(tǒng)（transdermal drug delivery system, TDDS）顧名思義，即藥物通過(guò)皮膚吸收產(chǎn)生作用的給藥方式：藥物透過(guò)皮膚，由毛細(xì)血管吸收進(jìn)入全身血液循環(huán)并在病灶部位產(chǎn)生療效的給藥方式。上世紀(jì)末，美國(guó)FDA批準(zhǔn)了第一個(gè)透皮給藥制劑——東莨菪堿貼劑的上市，用于治療暈動(dòng)癥引起的惡心嘔吐。經(jīng)過(guò)多年的研究，經(jīng)皮給藥不僅使得許多新發(fā)現(xiàn)的藥物實(shí)現(xiàn)成功給藥，也使得已經(jīng)存在的藥物發(fā)現(xiàn)新的治療效果（Mark et al，2004）。現(xiàn)在，更多的透皮給藥制劑正處于研發(fā)中, 整體方向朝著智能化、小型化發(fā)展，即在透皮給藥的過(guò)程中, 利用物理、化學(xué)，甚至一些電子芯片技術(shù)，按照具體的要求緩釋藥物分子透過(guò)皮膚(邊佳明等，2005)。（3）一次給藥能夠使得藥物以恒定的速度進(jìn)入人體，藥物作用時(shí)間長(zhǎng)，減少用藥次數(shù)。表皮吸收的主要障礙是角質(zhì)層細(xì)胞，藥物通過(guò)這層細(xì)胞有兩種擴(kuò)散途徑，第一種是穿透整個(gè)角質(zhì)層細(xì)胞到達(dá)細(xì)胞的另一邊，第二種是通過(guò)角質(zhì)層細(xì)胞之間的細(xì)胞間隙透過(guò)整個(gè)角質(zhì)層。但該吸收途徑卻不容忽視，因?yàn)榻?jīng)皮吸收開(kāi)始初期，附屬器透過(guò)藥物的速度快，藥物首先透過(guò)附屬器進(jìn)入人體。（2）藥物透皮滲透模型透皮給藥動(dòng)力學(xué)模型常用來(lái)預(yù)測(cè)、分析藥物通過(guò)皮膚進(jìn)入體循環(huán)的情況。但對(duì)于高脂溶性的藥物，活性表皮則對(duì)其透皮吸收有很大的阻礙。藥物溶解藥物擴(kuò)散 給藥裝置 角質(zhì)層（脂溶性強(qiáng)） 藥物分配至角質(zhì)層 部分藥物結(jié)合形成貯庫(kù) 繼續(xù)向下層擴(kuò)散 活性表皮（親水性） 受體 代謝 表皮內(nèi)擴(kuò)散 藥物分配至真皮 受體 真皮 代謝 部分藥物形成貯庫(kù) 藥物分配進(jìn)入毛細(xì)血管 真皮內(nèi)擴(kuò)散 分配進(jìn)入皮下脂肪 皮下脂肪/肌肉 脂肪/肌肉貯庫(kù) 圖13 藥物從透皮貼劑進(jìn)入血液循環(huán)的吸收過(guò)程 The absorption process of drug from transdermal patch to the blood circulation 透皮吸收的影響因素（1）藥物性質(zhì)的影響 如果藥物在油、水中都難溶，則很難透過(guò)皮膚吸收，藥物在制劑中的濃度越高，則藥物的熱力學(xué)活度越高，更容易從制劑中向皮膚擴(kuò)散。當(dāng)藥物在辛醇/水兩相中的分配系數(shù)的對(duì)數(shù)值lgP范圍在1～3時(shí)，藥物具有較好的皮膚滲透性（Guy et al, 1987）。比如：常溫下為液態(tài)的尼古丁, 透皮性能很高，而熔點(diǎn)較高的嗎啡滲透性就很差（司紅彬等，2007）。老年人皮膚干燥，萎縮，皮膚附屬器功能減弱，所以藥物吸收能力較差。 角質(zhì)層的厚度以及皮膚附屬器密度不同，使得身體的不同部位存在藥物吸收差異，一般透過(guò)性大小依次為：耳后腋窩頭皮手臂腿部胸部。當(dāng)皮膚角質(zhì)層含水量超過(guò)50%，藥物的滲透性能增加5～10倍。溶解和分散藥物的物質(zhì)能影響藥物的熱力學(xué)活性，包括藥物的溶解、釋放和藥物在給藥系統(tǒng)