乳酸菌的鑒定與乳酸菌的抑菌性畢業(yè)論文-wenkub
2023-07-10 20:30:21 本頁(yè)面
【正文】 自由基，具抗衰老、延年益壽作用。因?yàn)閯?dòng)物源取自動(dòng)物，因菌種常處于相對(duì)不穩(wěn)定狀態(tài)，其生物功效也較不穩(wěn)定，且在大量食用時(shí)，很容易導(dǎo)致人體動(dòng)物蛋白過敏，即排斥反應(yīng)。今天，利用乳酸菌生產(chǎn)的健康食品已經(jīng)一躍成為全世界關(guān)注的健康食品。少數(shù)為異型發(fā)酵，如腸膜狀明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）是制藥工業(yè)上生產(chǎn)右旋糖酐（即代血漿）的重要菌種，但也是制糖工業(yè)的一種有害菌，常使糖汁發(fā)粘稠而無(wú)法加工。這些抑菌物質(zhì)不僅不破壞食品的風(fēng)味和組織狀態(tài)，還可以抑制腐敗菌和病原菌的生長(zhǎng)，從而防止腐敗，延長(zhǎng)食品的保藏期。乳酸菌在發(fā)酵過程中可以產(chǎn)生一系列物質(zhì),能夠抑制或殺死一些食物腐敗菌,其中起主要抑菌作用的是細(xì)菌素,其具有一定的熱穩(wěn)定性,易被人體消化道的部分蛋白酶降解,并且不會(huì)在體內(nèi)積蓄引起不良反應(yīng)。(PH , 121℃滅菌20min) A、B液滅菌后在無(wú)菌狀態(tài)下混勻后倒平板。4H2O 、吐溫80 、蒸餾水1000mL。SS培養(yǎng)基：牛肉粉5g、月示胨5g、乳糖10g、枸櫞酸鐵1g、瓊脂17g、蒸餾水1000mL。4H2O：分析純?cè)噭?上海美興化工有限公司；吐溫80（聚山梨酯80）：分析純?cè)噭?上海申宇醫(yī)藥化工有限公司。以無(wú)菌操作取奶酪稀釋液1010105 ，加入15mL BCG牛乳培養(yǎng)基，帶培養(yǎng)基凝固后放入恒溫培養(yǎng)箱中，37℃恒溫培養(yǎng)24h。 乳酸菌的抑菌實(shí)驗(yàn)管碟法a) 將擴(kuò)大培養(yǎng)的菌液進(jìn)行離心(條件: 10000r/min,10min)；b) 在培養(yǎng)皿中加入約15ml的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；c) 待第一層培養(yǎng)基冷卻后，加入混有致病菌的培養(yǎng)基約15ml；d) 待培養(yǎng)基冷卻后，加入牛津杯進(jìn)行固定；e) 在牛津杯中加入菌液及無(wú)菌水進(jìn)行對(duì)照(等邊三角形)；f) 將培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)(條件:37℃,24h)。：乳酸菌的鑒定乳酸菌的鑒定包括形態(tài)學(xué)觀察和生理生化實(shí)驗(yàn)，具體參見根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)（第八版）》與《乳酸細(xì)菌分類鑒定與實(shí)驗(yàn)方法》。置37℃培養(yǎng)培養(yǎng)13d。明膠液化實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)菌接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)，以一支未接種的試管作為對(duì)照。在培養(yǎng)液中加入乙醚1～2mL，靜置片刻后乙醚層浮于培養(yǎng)液的上面，此時(shí)沿管壁緩慢加入5～10滴吲哚試劑(加入吲哚試劑后切勿搖動(dòng)試管，以防破壞乙醚層影響結(jié)果觀察)，如有吲哚存在，乙醚層呈現(xiàn)玫瑰紅色，此為吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。下端接近培養(yǎng)基表面而不接觸液面，上端用棉塞塞緊。糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)將需要測(cè)定的糖或醇類等碳水化合物加入PY基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝含5mL培養(yǎng)基的試管。共14頁(yè)，第14頁(yè)第3章 結(jié)果與分析 抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過BCG培養(yǎng)基，從進(jìn)口奶酪中共篩選出5株乳酸菌。3. 2 抑菌物質(zhì)的確定3. 酸對(duì)乳酸菌抑菌活性的影響在排除酸的作用后, 將GL5發(fā)酵液及用酸處理后的發(fā)酵液利用管碟法以金黃色葡萄球菌為指示菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，仍有一定的抑菌作用,見表2。表4 GL5原始發(fā)酵上清液及蛋白酶處理后的抑菌圈大小樣品抑菌圈直徑(mm)發(fā)酵上清原液24．0胰蛋白酶、蛋白酶K處理后的發(fā)酵液13．0活率下降百分率（%）45．83. 3 乳酸菌的鑒定3. 形態(tài)學(xué)觀察表5 三種乳酸菌的形態(tài)特征菌株編號(hào)分離源菌落形態(tài)菌體形態(tài)GL1奶酪,凸起，邊緣整齊，乳白色油狀G+，桿狀，個(gè)別彎曲，排列緊密GL5奶酪菌落直徑約2mm，光滑，圓形，濕潤(rùn)，乳白色G+，桿狀，兩端較平，多成鏈出現(xiàn)圖1 GL5菌的革蘭氏染色圖片3. 生理生化特征鑒定生理生化特征鑒定主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目包括在不同溫度（15℃、35℃和45℃）試驗(yàn)菌種的生長(zhǎng)情況，在不同pH值（、）培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況，過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)，運(yùn)動(dòng)性檢查，明膠液化實(shí)驗(yàn)，吲哚實(shí)驗(yàn)，硫化氫產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)，精氨酸產(chǎn)氨實(shí)驗(yàn)與糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。接著對(duì)GL5菌株進(jìn)行糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表7所示。從市售奶酪中分離出的5種乳酸菌分別編號(hào)為GL1GL5 。參考文獻(xiàn)[1] 楊潔彬，葛興華．乳酸菌生物學(xué)基礎(chǔ)與應(yīng)用[M]．北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，1996．[2] 朱小喬，劉通訊．極具潛力的天然防腐劑——Nisin[J]．食品與發(fā)酵工業(yè)，2001，27（4）：6669．[3] 喬發(fā)東，吳
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