【正文】 果兩管都不變色則說(shuō)明該細(xì)菌是不利用甘露醇（產(chǎn)堿型）。⑷．新生霉素敏感實(shí)驗(yàn)：金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌對(duì)新生霉素紙片（5μg/片）敏感；而腐生葡萄球菌，微球菌則對(duì)之耐藥。a. 操作方法：挑取少許金黃色葡萄球菌菌落在玻片上與血漿乳化，結(jié)合凝固酶能作用于血漿中的纖維蛋白原，從而在金黃色葡萄球菌表面發(fā)生凝集，所以我們?nèi)庋勰芸匆娔w粒。而其他葡萄球菌大多數(shù)不產(chǎn)生溶血毒素，只有表葡有極少能產(chǎn)生溶血毒素。另外呋喃唑酮（即痢特靈50μg/片）敏感實(shí)驗(yàn)微球菌為耐藥，而金黃色葡萄球菌為敏感。形態(tài)與染色：～，菌體圓形，呈單個(gè)，成雙以及不規(guī)簇狀排列。d.本實(shí)驗(yàn)避免接觸含鐵物質(zhì)（假陽(yáng)性），也不能在含糖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（假陰性）。酶并不直接與試劑（1%鹽酸四甲基對(duì)苯二胺）起反應(yīng)，而是首先使細(xì)胞色素c氧化，然后氧化型細(xì)胞色素c使對(duì)苯二胺氧化，出現(xiàn)深蘭色反應(yīng)。：絕大多數(shù)含細(xì)胞色素的需氧和兼性厭氧細(xì)菌觸酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，鏈球菌屬陰性。第一步：以結(jié)晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以盧戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）第三步：用95%乙醇脫色（染色液Ⅲ）第四步：最后用稀釋復(fù)紅復(fù)染（染色液Ⅳ）⑵．觸酶實(shí)驗(yàn)(H2O2實(shí)驗(yàn))：：具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌能催化雙氧水生成水和初生態(tài)氧，繼而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。另外最重要的是要填寫好該菌種的菌落形態(tài)以及有無(wú)溶血。對(duì)待鑒定的菌種要明確已經(jīng)獲得純化培養(yǎng)或者該菌種在血平板上生長(zhǎng)良好，有單個(gè)菌落可以進(jìn)行生化試驗(yàn)。（我們這里一般都是預(yù)先純化培養(yǎng)）對(duì)待鑒定的菌種進(jìn)行革蘭染色，觀察形態(tài)（G+c，G–b，G–c，G+b），做觸酶，氧化酶實(shí)驗(yàn)，然后按科，屬，種逐步鑒定。復(fù)習(xí)革蘭染色，觸酶實(shí)驗(yàn)，氧化酶實(shí)驗(yàn)。：一般用玻片法，就是挑取菌落在潔凈的玻片上涂開，滴加3%過(guò)氧化氫數(shù)滴，觀察結(jié)果（立即有大量氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng)性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性）。臨床常見細(xì)菌鑒定實(shí)驗(yàn)中我們一般用于區(qū)別葡萄球菌屬（+），微球菌屬（+），鏈球菌屬（－）。b.c.染色呈紫色，為革蘭陽(yáng)性球菌。4．葡萄球菌屬的種間鑒定：⑴．菌落色素與溶血毒素：金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃色，檸檬色或者淡黃色，而其他葡萄球菌則在血平板上菌落大多數(shù)為白色，也有部分為檸檬色或深黃色。⑶．血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)：用與區(qū)別金黃色葡萄球菌（陽(yáng)性），表皮葡萄球菌（陰性），腐生葡萄球菌（陰性）。玻片法主要由結(jié)合凝固酶作用產(chǎn)生；游離凝固酶是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的胞外酶，能與血漿中的血漿凝固反應(yīng)因子（類似凝血酶的一種物質(zhì)）作用，形成復(fù)合物再使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而發(fā)生凝集。抑菌環(huán)直徑16mm即為新生霉素敏感。：金黃色葡萄球菌在需氧和厭氧的條件下都能利用甘露醇（即兩管都變黃色）；表皮葡萄球菌需氧部分產(chǎn)酸，厭氧條件下不利用甘露醇（即沒加石蠟管有部分會(huì)變黃色，加石蠟管不變黃色）；腐生葡萄球菌與表皮葡萄球菌類似。肺炎鏈球菌呈矛頭狀，寬端相對(duì)，尖端向外。 根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)（C多糖抗原）的不同可分為A﹑B﹑C﹑D﹑E﹑F﹑G﹑H﹑K﹑L﹑M﹑N﹑O﹑P﹑Q﹑R﹑S﹑T等18個(gè)群，對(duì)人類有致病者90%屬于A群，偶見其他群鏈球菌致病。b．d．主要有變異鏈球菌，輕型鏈球菌，血鏈球菌，唾液鏈球菌等。奧普托欣（Optochin）含量為5μg/片，抑菌環(huán)18mm為敏感，15mm為不敏感，15～18mm應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。 膽汁七葉苷實(shí)驗(yàn)：變黑為陽(yáng)性。 %NaCl心浸液肉湯：由紫變黃為能在高鹽環(huán)境中生長(zhǎng)（陽(yáng)性）。⑴ 奈瑟氏菌的生物學(xué)特性：革蘭陰性球菌，需氧，卵圓形或腎形，無(wú)動(dòng)力，氧化酶及觸酶均陽(yáng)性。b． ⑶．幾種主要細(xì)菌對(duì)葡萄糖﹑麥芽糖﹑蔗糖的氧化分解產(chǎn)酸結(jié)果如下： 氧化分解產(chǎn)酸 菌種 葡萄糖 麥芽糖 蔗糖淋病奈瑟氏菌 ＋ － －腦膜炎奈瑟氏菌 ＋ ＋ －粘液奈瑟氏菌 ＋ ＋ ＋卡他布蘭漢菌 － － －⑷ DNA酶實(shí)驗(yàn)：a．（腸桿菌科中只有沙雷氏菌和變形桿菌可產(chǎn)生DNA酶，陽(yáng)性球菌中只有金葡菌能產(chǎn)生DNA酶。1．培養(yǎng)基成分：葡萄糖蛋白胨水試劑：，酒精300ml，水200ml主要用于大腸埃希菌（＋）和產(chǎn)氣腸桿菌（－）的鑒別；常與VP實(shí)驗(yàn)聯(lián)合使用，一般情況下兩者結(jié)果正好相反，但也有例外如奇變兩者同為陽(yáng)性。③．尿素試驗(yàn)：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿，再使培養(yǎng)基中的指示劑（%酚紅）變紅色即為陽(yáng)性。 ⑺．氨基酸脫羧試驗(yàn) 細(xì)菌產(chǎn)生脫羧酶分解氨基酸使其脫羧生成胺和CO2，雖然各種細(xì)菌所產(chǎn)生的脫羧酶不一定相同，但最后都能生成胺（賴氨酸→尸胺，鳥氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和CO2。（生成的胺更穩(wěn)定，還能誘導(dǎo)氨基酸脫羧酶的產(chǎn)生） ②對(duì)照管如果不顯黃色，則結(jié)果不能判斷。 腸桿菌的鑒定流程⑴．根據(jù)苯丙氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)： （＋）：變形桿菌屬，普羅威登斯菌屬，摩根氏菌屬 （－）：埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，沙門氏菌屬，枸櫞酸桿菌屬，愛德華菌屬；克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬。 IMViC（＋＋－－）：大腸埃希菌（H2S－）或愛德華菌屬（H2S＋）。a．志賀氏菌屬 主要系統(tǒng)生化：KIA：K/A（只有福氏6型能產(chǎn)氣），H2S（－）；MIU：－+/－； 苯丙：－；枸櫞酸鹽：－。血清凝集步驟如下：AF多價(jià)O（＋）： O2，Ha（＋）：A群（甲型副傷寒沙門氏菌） O4，Hb（＋）：B群（乙型副傷寒沙門氏菌） O6﹑7，Hc，Vi（＋）：C群（丙型副傷寒沙門氏菌） O9，Hd，Vi（＋）：D群（傷寒沙門氏菌） O3﹑10，Heh（＋）：E群 O11，Hi（＋）：F群AF多價(jià)O（－），做Vi血清因子凝集：（＋）濃菌液沸水煮沸30min，再用AF多價(jià)O血清定群；（－）繼續(xù)以AF以外的多價(jià)O血清凝集分型。非發(fā)酵菌按下列試驗(yàn)進(jìn)行初步分屬 菌屬 氧化酶 OF試驗(yàn) 動(dòng)力 MaCC生長(zhǎng)情況 觸酶假單胞菌屬 ＋ O/－ ＋/－ 生長(zhǎng) ＋無(wú)色桿菌屬 ＋ O/－ ＋/－ 生長(zhǎng) ＋ 不動(dòng)桿菌屬 － O/－ － 生長(zhǎng) ＋產(chǎn)堿桿菌屬 ＋ － ＋ 生長(zhǎng) ＋摩拉菌屬 ＋ － － 不生長(zhǎng) ＋金氏菌屬 ＋ F（弱） － 不定 －黃桿菌屬 ＋ F（弱） － 不生長(zhǎng) ＋ 八．棒狀桿菌屬 棒狀桿菌屬是一群革蘭陽(yáng)性桿菌。 鑒定：根據(jù)觸酶和有無(wú)溶血，可分： ⑴．H2O2＋，無(wú)溶血：白喉﹑假白喉﹑潰瘍﹑干燥﹑假結(jié)核﹑馬棒﹑牛棒； ⑵．H2O2－，有溶血：溶血棒﹑化膿棒﹑陰道棒 ⑶．加做葡萄糖，麥芽糖，蔗糖產(chǎn)酸試驗(yàn)，結(jié)合⑴⑵和標(biāo)本類型，基本上可以鑒定到是哪一種棒狀桿菌。將確定好的藥敏紙片分貼到平板表面。貼完紙片后，應(yīng)在15分鐘內(nèi)放入35度孵箱。鏈球菌、奈瑟菌屬、流感嗜血桿菌、除銅綠假單孢菌和不動(dòng)桿菌外的假單孢菌屬不用KB法. 肺炎鏈球菌膠乳凝集測(cè)定法在一干凈玻片上分別滴兩滴生理鹽水。2分鐘內(nèi)，如R1出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性；如RR2均未出現(xiàn)凝集為陰性。如頭孢他定/克拉維酸與頭孢他定，頭孢噻肟/棒酸與頭孢噻肟的差值≥5mm，則確證ESBLS產(chǎn)生。氨基糖甙類抗生素阿米卡星與慶大霉素不完全交叉耐藥。除表皮葡萄球菌和溶血葡