蛋白質化學下ppt課件-wenkub
2023-05-28 02:02:43 本頁面
【正文】 ?氨肽酶法 DNS法 ?丹磺酰氯（二甲基氨基萘磺酰氯） ?6mol/L HCl 105℃ 水解 18hr 氨肽酶法 ?外切酶，從多肽鏈的 N端逐個的向里水解 ?根據(jù) 不同的反應時間測出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，按反應時間和氨基酸殘基釋放量作動力學曲線，從而知道蛋白質的 N末端殘基順序 2） C末端測定 ?肼解法 ? 多肽與肼在無水條件下加熱， C端氨基酸即從肽鏈上解離出來，其余的氨基酸則變成肼化物 ? 肼化物能夠與苯甲醛縮合成不溶于水的物質而與 C端氨基酸分離 H 2 N C H CR OH N C H CR O OR nCC HH N O Hn 1N 端氨基酸 C 端氨基酸OR nCC HH 2 N O HH 2 N C H CR ON H N H 2 +H+N H 2 N H 2氨基酸酰肼 C 端氨基酸羧肽酶法 羧肽酶 A作用于促腎上腺皮質激素氨基酸的釋放曲線 ?對多肽鏈進行部分水解 (酶解 )，獲得一套短肽混合物；用不同的酶分別進行 ,得到幾套短肽混合物 蛋白質序列分析原則 肽鏈部分水解的方法 ?化學法 ? 溴化氰法 ? 羥胺法 ? 酸 ?酶解法（切點多，肽段大小不一） ? 胰蛋白酶 1）溴化氰法 ?斷開甲硫氨酸羧基參與的肽鍵 ?由于蛋白質中含有很少的甲硫氨酸，因此可以得到較大的片斷 C H 3 S ：C H 2C H 2C HN H C N H C H CO OR+ B r C+NB rC H 3 S+C H 2C H 2C HN H C N H C H CO ORC NC H 3 S C N C H2C HN H C N H C H CO ORC H 2+H 2 O+C H 2C HN H COC H 2O H 3 N+C H COR高絲氨酸內酯2）羥胺法 ?羥胺能專一地裂解AsnGly的肽鍵 ?分離短肽混合物 獲得單一的短肽 ?測定所有短肽的的氨基酸序列 ? 將所獲得的所有序列進行拼湊 ,確定蛋白質序列 ? ，測出全部一級結構 蛋白質序列分析原則 二、二級結構 ?蛋白質多肽鏈自身的折疊和盤繞方式 ?肽鏈骨架原子的相對空間位置，不涉及側鏈 ?維持二級結構的力：氫鍵 肽平面 ?肽平面各個原子所構成的鍵長、鍵角在蛋白質構象中恒定不變 二級結構的種類 ?α螺旋 ?β－ 折疊 ?β－ 轉角 ?自由回轉 α螺旋 ?絕大多數(shù)為右手螺旋 ?α角蛋白：全部由 α螺旋構成 ?結構要點 ? 每 圈 ? 每圈向上移動 ? 氨基酸殘基側鏈伸向外側，相鄰螺圈間形成氫鍵，氫鍵基本與中心軸平行 ?SN： α螺旋 完成一個螺旋需 ， 螺旋每上升一圈，螺 距為 ，相鄰 兩個氨基酸殘基之間 的軸心距為 l 維持螺旋的作用力是 氫鍵 ，相鄰螺圈之間 形成鏈內 H鍵， H鍵的取向幾乎與軸平行。 要點： l 肽鏈幾乎是完全伸展的，整個肽鏈成折疊形式。 β－ 折疊 β－ 折疊（平行） ?氫鍵傾斜 β－ 折疊（反平行） ?氫鍵垂直，更穩(wěn)定 球狀蛋白質中廣泛存在的一種結構 肽鏈發(fā)生 180度回折，回折角度就是 β轉角結構。 α 螺旋 β 折疊 β 轉角 無規(guī)卷曲 三、超二級結構
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