基因的克隆方法大全-wenkub
2023-05-27 23:26:03 本頁面
【正文】 隆方法 ? 基于 基因產(chǎn)物 的基因克隆方法 ? 基于 基因加標簽 的基因克隆方法 ? 基于 基因序列 的基因克隆方法 ? 基于 基因圖譜 的基因克隆方法 5 一、 基于基因產(chǎn)物的基因克隆方法 mRNA 翻譯成蛋白質(zhì) 根據(jù) 蛋白質(zhì)序列 克隆目的基因 根據(jù) 基因表達差異（ mRNA） 克隆基因 6 原理：根據(jù)蛋白質(zhì)上的一段多肽的氨基酸序列，反推核苷酸序列，然后設(shè)計探針或引物從基因組文庫或 cDNA文庫中分離出相應(yīng)的基因。 蛋白質(zhì)序列克隆法 7 實用性： 分離純化蛋白質(zhì)十分困難 Cys Met Asp Glu Met Lys Arg Asn Ile TGTATGGACGAAATGAAAAGAAACATA C T GATG G G T T C 據(jù)某段氨基酸序列推導(dǎo)可能的核苷酸序列 8 根據(jù)基因表達差異（ mRNA）克隆基因 基因表達的差異表現(xiàn)： ?一是基因表達的種類的不同； ?二是基因表達水平的改變。 差減雜交技術(shù)的應(yīng)用方面 ： 13 ? 抑制性差減雜交（ SSH） Tester樣本 mRNA Driver樣本 mRNA SfiI A cDNA cDNA SfiI B A B 混合，變性雜交 過量 A B PCR擴增 5` 3` 14 ?應(yīng)用 ?基因突變體的研究：如基因的表達與不表達 ?基因時空表達的研究：如根、莖、葉 ?不同處理條件下的基因表達差異：如施肥與不施肥、光照與不光照 15 ? 差異顯示 PCR（ DD RTPCR） ?最先由 Liang等于 1992年報道，目前已廣泛在實驗室使用。 ?工作量大。 ?所需的 mRNA量少。 22 外源 DNA 基因組染色體 DNA 基因 A 產(chǎn)生突變型 ? 分類： TDNA標簽法 轉(zhuǎn)座子標簽法。 ?把陽性克隆轉(zhuǎn)化突變體進行功能互補及進行測序分析。 27 ?轉(zhuǎn)座子根據(jù)結(jié)構(gòu)不同可
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1