nf-kb的激活與檢測方法-wenkub
2023-05-01 07:20:08 本頁面
【正文】 ）中的一個結合而以無活性的狀態(tài)存在【4】。IκBβ和IκBε則起到緩沖系統(tǒng)活化波動趨勢的作用，從而保持NFκB有一個相對較長時間的響應。在經典的NFKB激活途徑中，IKKβ的活化起到了非常重要的作用。Sankar ghosh和matthew 【10】。接著IκBs在SCFE3泛素化酶復合體的催化作用下多泛素化而被蛋白酶降解。其他的不被人所熟知的途徑也能從IκBs中活化部分的NFκB。新合成的自由的IκBα進入細胞核內，然后使DNA上NFκB解離并且將NFκB排出細胞核，因而恢復到靜息狀態(tài)。當成熟B淋巴細胞被NFκB活性抑制劑或抗氧化劑處理時，就發(fā)生了細胞凋亡。ML等【15】發(fā)現(xiàn)在白細胞介素一6(IL一6)的啟動子上有NFκB的結合位點，TNFα，輻射等通過激活NFκB而上調IL6的基因表達。Herramnn等【17】發(fā)現(xiàn)在該基因的啟動子中也含有2個與NFκB優(yōu)先結合的序列。NFκB抗凋亡機制是作用于Caspase8和線粒體的上游，進一步研究表明，NFκB在基因和蛋白表達兩個水平上控制了TRAF一TRAF一c—IAPc—IAP2的表達，從而抑制了Caspase8的活性。例如，Trede等【19】用鬼臼亞乙苷作用于人T細胞和早幼粒白血病細胞，可活化NF—KB并誘導細胞凋亡。炎癥是機體抵御病原體入侵的一種機制。因此NFκB是許多炎癥細胞因子的轉錄因子，在炎癥反應中起著主要作用。不足之處是不能直接反映NFκB活性，而且部分轉錄因子功能改變時，只是由于活性變化所引起，蛋白總量并不發(fā)生改變，Western blot不能反映出這種由于活性改變引起的NFκB功能變化，其特異性也有待進一步提高【22】。EMSA根據所用標記物的不同分放射性和非放射性兩種。由于體內外環(huán)境存在巨大差異，EMSA 目前很難真正重建體內蛋白質與DNA之間結合過程【22】。通過使用直接與轉錄因子p65，p50，p52，cRel或者Rel B亞基配對的抗體，活化的轉錄因子亞基結合到寡核苷酸而被檢測到。報告基因分析系統(tǒng)(reporter gene assay)的建立，給NFκB的轉錄活性評價帶來了極大方便。luc分析具有快速、方便，具有很好的濃度線性范圍(具有7～8個數(shù)量級的線性范圍)，而被廣泛應用【24】。GFP報告基因的另一個優(yōu)點是可以在活細胞條件下檢測以及細胞內定位【26】。NFκB參與機體的細胞分化、免疫反應、胚胎發(fā)生、細胞凋亡及病毒感染等多種重要的生理和病理反應因此受到國內外學者的關注。New regulators of NF?κB in inflammation【J】. Nature reviews immunology 2008 8 837848.11 Beg AA，Sha WC，Branson RT，eta1．Embryonic let hality and liver degeneration in mice lacking the RelA ponent of NF—κB [J]．Nature，1995；376(6536)：167—17012Patrick A，Baeuerle．David Baltimore．Cell，1997，87(71；13)13 Vijay R B．Patrick A．Current Biology．1997，7(1)；R9414 劉 曉 核轉錄因子NF—κB與腫瘤實用腫瘤學雜志2007年第21卷第2期總第88期19119615 WL，Moore EE，Mcore FA，et a1．Interleykn一6 delays neulriophil[J]．Arch Surg，1996，131：2416 Pahl HL．Activators and target genes of Rel／NF—κB transcription factors【J】．Oncogene，1999，l8：6853—685617 HerramnnlL，Be han AW ，Sarkkiss M，et a1．Bcl一2 suppresses apoptosisResulting from disruption of the NF—κB survival pathway[J]．E印CellRes，1997，237：101—10918 Laca
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