【正文】 影響因素： ①反應(yīng)溫度 ②連接酶濃度 ③ ATP濃度 ④ DNA片段末端 ⑤插入片段與載體的濃度比例 ，其優(yōu)缺點(diǎn)是什么？ 答：優(yōu)點(diǎn)： ①遺傳背景清楚 ②培養(yǎng)周期短 ③目標(biāo)基因表達(dá)水平高 ④抗污染能力強(qiáng) ⑤代謝途徑和基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制比較清楚 ⑥有大量可供選擇利用的表達(dá)載體 缺點(diǎn)： ①缺少真核基因產(chǎn)物的加工系 統(tǒng)，目標(biāo)蛋白無特定空間構(gòu)象 ②內(nèi)源蛋白質(zhì)會(huì)降解表達(dá)產(chǎn)生的目標(biāo)蛋白，造成目標(biāo)蛋白不穩(wěn)定。 ④斑點(diǎn)印跡雜交和狹線印跡雜交：主要用于基因組中特定基因及其表達(dá)情況的定性或定量研究。 ？ 答：（ 1） DNA 樣品的純度 （ 2） DNA 樣品的甲基化程度 （ 3）緩沖液性質(zhì) （ 4）酶切反應(yīng)的溫度 （ 5）酶的純度 （ 6） DNA 分子的構(gòu)型 （ 7）酶的星號(hào)活性 ？論述在什么情況下使用這些方法？ 答：① Southern 雜交：是將 DNA 片段從瓊脂糖轉(zhuǎn)移到濾膜上。 原理、反應(yīng)體系和基本過程： 答：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ PCR）：是 Kary Mullis 于 1985 年發(fā)明的核酸體外擴(kuò)增技術(shù)。 是（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）的簡(jiǎn)稱， PCR 反應(yīng)體系的基本要素有（緩沖液）、（模板）、(dNTP ）、（引物）等。 （限制酶）、（連接酶）、（聚合酶）、（修飾酶） 4 類。 DNA 時(shí)，要戴手套操作，原因是手上有（ 核酸酶 ）。 3. 對(duì)于雙鏈 DNA 分子，在一條鏈上失去了一個(gè)磷酸二酯鍵稱為（切口），失去一段單鏈稱為（缺口）。 ：指轉(zhuǎn)基因生物中的目的基因在生物個(gè)體、種群甚至物種間自發(fā)移動(dòng)是過程。 ： 是一種定點(diǎn)突變技術(shù)，將靶基因的一段 DNA 刪掉，并用人工化學(xué)合成所具有的突變核苷酸的雙鏈寡核苷酸片段取代的技術(shù)。 ： 用來編碼一段短肽不同堿基序列的混合物。 ： 基因工程中克隆的目標(biāo) DNA 分子。 PCR： 由已知的一段 DNA 序列向兩端擴(kuò)增未知核苷酸序列并能快速獲得未知序列的PCR 操作。 ： 可攜帶外源 DNA 片段進(jìn)入 宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、翻譯的載體，即用于在宿主細(xì)胞中高水平表達(dá)外源蛋白質(zhì)的載體。 ： 存在于多種宿主細(xì)胞、獨(dú)立于染色體外的可以自主復(fù)制閉合環(huán)狀的 DNA 分子。 ： 一類來源于不同微生物、能識(shí)別相同序列的限制性核酸內(nèi)切酶。2020級(jí)基因工程復(fù)習(xí)題 名詞解釋 ： 是由細(xì)菌產(chǎn)生的一類能特異識(shí)別雙鏈 DNA 中的特 定堿基序列，并在識(shí)別位點(diǎn)切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶。 ： 是依賴于 RNA 的 DNA 聚合酶，是分子克隆中重要的核酸酶之一。 ： 其復(fù)制宿主不偶聯(lián)，每個(gè)細(xì)胞中有幾十到幾百個(gè)拷貝數(shù)的質(zhì)粒。 : 克隆和運(yùn)載目的基因并轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制和擴(kuò)增的載體。 平臺(tái)效應(yīng)： PCR 反應(yīng)經(jīng)過一定 數(shù)量的循環(huán)后，隨著產(chǎn)物的對(duì)數(shù)積累趨于飽和， DNA片段不再呈指數(shù)積累，而進(jìn)入線性增長(zhǎng)期或靜止期的過程。 ： 遺傳信息從 DNA 轉(zhuǎn)到 mRNA，再到蛋白質(zhì)的過程。 ： 是遠(yuǎn)距離調(diào)節(jié)啟動(dòng)子并提高轉(zhuǎn)錄效率的一段 DNA 序列。 ： 指將外源正常基因?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的。 ： 是安全評(píng)價(jià)的起點(diǎn)，是指以有安全食用歷史的傳統(tǒng)食品為基礎(chǔ)，要求轉(zhuǎn)基因食品和它所替代的傳統(tǒng)食品至少要同樣安全。 ，第一個(gè)大寫字母取自（微生物屬名）的第一個(gè)字母，第二、三個(gè)字母取自（種名）的前 2 個(gè)字母，第四個(gè)字母用株名表 示。 DNA 的原理是（乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng)，對(duì) DNA很安全，是理想的沉淀劑。 2 類： DNA 探針和 RNA 探針。 的構(gòu)建元件來源于三個(gè)親本質(zhì)粒：① pSE2124： 提供 Ampr 基因； ② pMB1：提供 Colel 松弛型 (復(fù)制子 )(Ori)；③ pSC101：提供 (Tetr)基因。 1) PCR 技術(shù)原理： 類似于 DNA 的天然復(fù)制過程， 其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。檢測(cè)特點(diǎn) DNA ② Northern 雜交：檢測(cè)某一特定 RNA 分子的方法，可用于 RNA 定性和定量分析。 ⑤ Western 雜交：檢測(cè)可知被檢生物細(xì)胞內(nèi)目的蛋白的表達(dá)與否，表達(dá)量及分子質(zhì)量等。 ： 答：①目的基因的獲得； ②基因文庫第一條鏈的合成； ③基因文庫第二條鏈的合成，即雙鏈的合成； ④λ噬菌體載體的構(gòu)建，與目的基因相互連接，形成重組子； ⑤導(dǎo)入宿主細(xì)胞中（如大腸桿菌）進(jìn)行整合、擴(kuò)增、克隆重組子 ⑥重組子的篩選與鑒定 ： 答：（ 1）基因組 DNA 的分離制備 （ 2）基因組 DNA 的片段化 （ 3）載體制備 （ 4）重組連接 （ 5） 噬菌體離體包裝 （ 6）重組噬菌體感染大腸桿菌 基因文庫構(gòu)建的步驟： 答：（ 1）細(xì)胞總 RNA 的提取和 mRNA 的分離 （ 2）第一條 cDNA 合成 （ RnaseH 的作用） （ 3）第二條 cDNA 合成 （ 4）雙鏈 cDNA 克隆進(jìn)質(zhì)粒或噬菌體載體并導(dǎo)入宿主中繁殖 ？技術(shù)原理是什么？它們各有什么優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn) ? 答：⑴差異顯示 PCR：根據(jù)絕大多數(shù)真核細(xì)胞 mRNA339。 缺點(diǎn)：只能用于兩組樣品對(duì)照處理，不能提供基因表達(dá)數(shù)量上的差異。 植物 基因工程的應(yīng)用： ㈠在植物遺傳改良中的應(yīng)用： ①植物對(duì)生物逆境性的抗性基因工程。 ⑤資源利用效率的基因工程改良。 ⑨植物觀賞性狀遺傳改良。 ㈢改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)。 ㈢在藥物生產(chǎn)上的應(yīng)用（蛋白質(zhì)藥物、抗生素等）。 2) 對(duì)生態(tài)系統(tǒng)的隱患：①對(duì)生物遺傳多樣性可能有影響；②對(duì)物種多樣性可能有影響；③對(duì)生態(tài)系統(tǒng)多樣性可能有影響。 ②基因漂移：指轉(zhuǎn)基因生物種的目標(biāo)基因，在生物的個(gè)體、種群甚至是物種間自發(fā)移動(dòng)的過程。 ⑥外源基因產(chǎn)物的特性及其穩(wěn)定性。 今年是我從事人口計(jì)生工作的第七個(gè)年頭，想想當(dāng)年，初來乍到，面對(duì)各種業(yè)務(wù)術(shù)語真是一頭霧水，聽到專業(yè)名詞看到一些藥具還會(huì)臉紅，就這樣我成為了一名計(jì)生戰(zhàn)線的新兵，一干就是七年。 而過去宣教工作中的兩項(xiàng)內(nèi)容 — 幸福家庭建設(shè)、性別比治理現(xiàn)劃歸家庭發(fā)展科，再加上利益導(dǎo)向組成了現(xiàn)在的家庭發(fā)展科全部工作內(nèi)容。以上這些都是我在本職工作中任勞任怨、勤學(xué)肯干的一些積累和經(jīng)驗(yàn)，也是 支撐我能站在這里的競(jìng)崗的信心與底氣。 ” 競(jìng)爭(zhēng)上崗，有上有下，無論上、下，我都將以這句 話自勉，勝不驕、敗不餒，一如既往地勤奮學(xué)習(xí)、努力工作、追求夢(mèng)想！ 最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導(dǎo)服務(wù) 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導(dǎo)寫作 –獨(dú)家原創(chuàng) 10 / 57 衛(wèi)計(jì)委衛(wèi)生計(jì)生委基層指導(dǎo)科科長(zhǎng)競(jìng)職演講稿 尊敬的各位領(lǐng)導(dǎo)、各位同事： 大家好！ 首先感謝委黨委給了我這個(gè)機(jī)會(huì)，一次檢驗(yàn)、學(xué)習(xí)、提高的機(jī)會(huì)。 具有很強(qiáng)的協(xié)作意識(shí)。 具有過硬的業(yè)務(wù)能力。我會(huì)尊重領(lǐng)導(dǎo)，不越權(quán)、不 越位，積極建言獻(xiàn)策，為科室的工作竭盡全力。團(tuán)結(jié)帶領(lǐng)科室所有同志，服從領(lǐng)導(dǎo)安排，聽從領(lǐng)導(dǎo)指揮，共同做好科室的工作。嚴(yán)格遵守法律法規(guī)和紀(jì)律的各項(xiàng)規(guī)定，干干凈凈做事，清清白白做人，尊重領(lǐng)導(dǎo)，團(tuán)結(jié)同志，自覺接受領(lǐng)導(dǎo)、群眾的監(jiān)督和批評(píng)。進(jìn)一步從工作中查找薄弱環(huán)節(jié)，提高做好各項(xiàng)工作的服務(wù)能力。 最后，衷心感謝委黨委對(duì)我的關(guān)心、愛護(hù)和培養(yǎng)，感謝同事們對(duì)我的幫助、照顧和支持。 一、明確理想信念 黑格爾說： “ 沒有理想，一切行動(dòng)都沒有價(jià)值。所以最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導(dǎo)服務(wù) 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導(dǎo)寫作 –獨(dú)家原創(chuàng) 13 / 57 在以后的工作當(dāng)中必須堅(jiān)持 “ 革命理想高于天 ” ，做共產(chǎn)主義遠(yuǎn)大理想和中國(guó)特色社會(huì)主義共同理想的堅(jiān)定信仰者，志愿為實(shí)現(xiàn)民族復(fù)興的 “ 中國(guó)夢(mèng) ” 而奮斗。政府管 家并不是嘴上說說，而是從內(nèi)心深處擺正位置，拿出人民公仆的態(tài)度，敬民、親民、愛民。干部勤于政事，既要勤于 “ 察政 ” 、善于發(fā)現(xiàn)問題，也要勤于 “ 謀政 ” 、善于思考問題，更要勤于 “ 施政 ” 、善于處理問題。 對(duì)內(nèi)是指在單位內(nèi)部敢于擔(dān)當(dāng)也體現(xiàn)在勇于批評(píng)和反求諸己，作為財(cái)政工作人員不應(yīng)該怕得罪人，搞無原則的一團(tuán)和氣 ，干事拈輕怕重，遇事明哲保身，這種不敢擔(dān)當(dāng)、不愿擔(dān)當(dāng)、不會(huì)擔(dān)當(dāng)?shù)? “ 老好人 ” 、 “ 墻頭草 ” 多了，黨和人民的事業(yè)，還怎么向前推進(jìn)？正是從這個(gè)意義上，敢于擔(dān)當(dāng)，是今天我們黨的干部必須具備的基本素質(zhì)，也是衡量 “ 好干部 ” 的重要標(biāo)準(zhǔn)。我們要嚴(yán)格要求自己，依法辦事，嚴(yán)格執(zhí)法，不以權(quán)代 法，做學(xué)法、守法、用法的模范。我是 XX，今天演講的題目是《不忘初心，方得始終》。我們常常因?yàn)樽叩锰h(yuǎn)和時(shí)光老去，就忘記當(dāng)初為什么出發(fā)。情為民所系，權(quán)為民所用，利為民所謀。 我們應(yīng)從以下三個(gè)方面嚴(yán)格要求自己： 第一、勤于學(xué)習(xí)、填補(bǔ)空白 最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導(dǎo)服務(wù) 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導(dǎo)寫作 –獨(dú)家原創(chuàng) 16 / 57 進(jìn)入一個(gè)新的工作領(lǐng)域，不熟悉，不了解，不內(nèi)行的東西必然很多，我們應(yīng)把學(xué)習(xí)作為第一要?jiǎng)?wù) ，腳踏實(shí)地，安心學(xué)習(xí)，扎實(shí)工作。但是，人生之路不一定都是順境與成功，也有逆境和失敗。 現(xiàn)在這個(gè)浮躁的社會(huì)，大家都帶著有色眼鏡看待公務(wù)員。 2 月份，市委下發(fā)了黨的建設(shè)目標(biāo)管理考核實(shí)施辦法，先后召開了紀(jì)檢、組織、宣傳、統(tǒng)戰(zhàn)及政法會(huì)議，對(duì)黨 建工作進(jìn)行了再細(xì)化、再布置。主要表現(xiàn)在：一是高度重視。三是推進(jìn)有序。少數(shù)單位管黨治黨主體責(zé)任還需強(qiáng) 化，抓黨建的主動(dòng)性有待進(jìn)一步增強(qiáng)。部分單位抓黨建工作的思路不明晰，著力點(diǎn)找得不夠準(zhǔn)，對(duì)新常態(tài)下黨建工作的重點(diǎn)措施不具體、方法不夠新、任務(wù)不夠細(xì)。希望大家要立足村情，進(jìn)一步細(xì)化舉措，及時(shí)落實(shí)到位，確保完成年度的目標(biāo)任務(wù)。如換屆工作存在簡(jiǎn)單化的傾向，少數(shù)干部存在著按慣例、走程序、簡(jiǎn)單操作等問題，對(duì)中央和上級(jí)黨委關(guān)于這次換屆的主要精神，只是簡(jiǎn)單地提出要求，缺少具體落實(shí)的舉措。對(duì)報(bào)告的起草重視不夠，特別是對(duì)以換屆為契機(jī)，加強(qiáng)鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委建設(shè)，加強(qiáng)村級(jí)組織建設(shè)重視不夠。就當(dāng)前而言，鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委換屆工作是所有工作重中之重。換屆的關(guān)鍵是圍繞科學(xué)發(fā)展，要把換屆工作放到實(shí)現(xiàn) “ 十三五 ” 時(shí)期經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展的大局中去謀劃，圍繞推動(dòng)科學(xué)發(fā)展、加快經(jīng)濟(jì)發(fā)展方式轉(zhuǎn)變的目標(biāo)去落實(shí)。鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委書記要親自主持，要廣泛征求各方面意見，真正使報(bào) 告形成的過程成為最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導(dǎo)服務(wù) 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導(dǎo)寫作 –獨(dú)家原創(chuàng) 20 / 57 一個(gè)統(tǒng)一思想、形成共識(shí)、明晰思路、凝聚人心的過程。要堅(jiān)持德才兼?zhèn)洹⒁缘聻橄鹊挠萌藰?biāo)準(zhǔn)，堅(jiān)持服務(wù)科學(xué)發(fā)展和重基層的導(dǎo)向，優(yōu)化領(lǐng)導(dǎo)班子結(jié)構(gòu)，激發(fā)班子活力 ，增強(qiáng)整體功能。前期，市委已向每一個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)派出由市委常委、列席常委任組長(zhǎng)的換屆指導(dǎo)組，為進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)工作指導(dǎo)，根據(jù)宣城市要求，市委決定，這次不再提名的鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委書記暫不安排工作職務(wù)，直接轉(zhuǎn)任各自鄉(xiāng)鎮(zhèn)換屆指導(dǎo)組副組長(zhǎng)，負(fù)責(zé)指導(dǎo)所在鄉(xiāng)鎮(zhèn)做好換屆工作 ，待鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委換屆圓滿結(jié)束后，再安排工作職務(wù)（這里需要強(qiáng)調(diào)的是：所在鄉(xiāng)鎮(zhèn)換屆工作成效直接關(guān)系到下一步職務(wù)安排）。二要精心組織召開好黨員代表大會(huì)。要將會(huì)務(wù)組織、材料分發(fā)、氛圍營(yíng)造、后勤保障等方面工作做精做細(xì)，確保各項(xiàng)工作有序不亂。 消費(fèi)者權(quán)益日宣傳紀(jì)念活動(dòng)主持稿 最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導(dǎo)服務(wù) 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導(dǎo)寫作 –獨(dú)家原創(chuàng) 22 / 57 A