【正文】 影響因素： ①反應溫度 ②連接酶濃度 ③ ATP濃度 ④ DNA片段末端 ⑤插入片段與載體的濃度比例 ，其優(yōu)缺點是什么？ 答：優(yōu)點： ①遺傳背景清楚 ②培養(yǎng)周期短 ③目標基因表達水平高 ④抗污染能力強 ⑤代謝途徑和基因表達調(diào)控機制比較清楚 ⑥有大量可供選擇利用的表達載體 缺點： ①缺少真核基因產(chǎn)物的加工系 統(tǒng)，目標蛋白無特定空間構(gòu)象 ②內(nèi)源蛋白質(zhì)會降解表達產(chǎn)生的目標蛋白，造成目標蛋白不穩(wěn)定。 ④斑點印跡雜交和狹線印跡雜交：主要用于基因組中特定基因及其表達情況的定性或定量研究。 ？ 答：（ 1） DNA 樣品的純度 （ 2） DNA 樣品的甲基化程度 （ 3）緩沖液性質(zhì) （ 4）酶切反應的溫度 （ 5）酶的純度 （ 6） DNA 分子的構(gòu)型 （ 7）酶的星號活性 ？論述在什么情況下使用這些方法？ 答：① Southern 雜交：是將 DNA 片段從瓊脂糖轉(zhuǎn)移到濾膜上。 原理、反應體系和基本過程： 答：聚合酶鏈式反應（ PCR）：是 Kary Mullis 于 1985 年發(fā)明的核酸體外擴增技術(shù)。 是（聚合酶鏈式反應）的簡稱， PCR 反應體系的基本要素有（緩沖液）、（模板）、(dNTP ）、（引物）等。 （限制酶）、（連接酶）、（聚合酶）、（修飾酶） 4 類。 DNA 時，要戴手套操作，原因是手上有（ 核酸酶 ）。 3. 對于雙鏈 DNA 分子，在一條鏈上失去了一個磷酸二酯鍵稱為（切口），失去一段單鏈稱為（缺口）。 ：指轉(zhuǎn)基因生物中的目的基因在生物個體、種群甚至物種間自發(fā)移動是過程。 ： 是一種定點突變技術(shù)，將靶基因的一段 DNA 刪掉，并用人工化學合成所具有的突變核苷酸的雙鏈寡核苷酸片段取代的技術(shù)。 ： 用來編碼一段短肽不同堿基序列的混合物。 ： 基因工程中克隆的目標 DNA 分子。 PCR： 由已知的一段 DNA 序列向兩端擴增未知核苷酸序列并能快速獲得未知序列的PCR 操作。 ： 可攜帶外源 DNA 片段進入 宿主細胞進行復制并進行轉(zhuǎn)錄、翻譯的載體，即用于在宿主細胞中高水平表達外源蛋白質(zhì)的載體。 ： 存在于多種宿主細胞、獨立于染色體外的可以自主復制閉合環(huán)狀的 DNA 分子。 ： 一類來源于不同微生物、能識別相同序列的限制性核酸內(nèi)切酶。2020級基因工程復習題 名詞解釋 ： 是由細菌產(chǎn)生的一類能特異識別雙鏈 DNA 中的特 定堿基序列，并在識別位點切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶。 ： 是依賴于 RNA 的 DNA 聚合酶，是分子克隆中重要的核酸酶之一。 ： 其復制宿主不偶聯(lián)，每個細胞中有幾十到幾百個拷貝數(shù)的質(zhì)粒。 : 克隆和運載目的基因并轉(zhuǎn)移到宿主細胞中進行復制和擴增的載體。 平臺效應： PCR 反應經(jīng)過一定 數(shù)量的循環(huán)后，隨著產(chǎn)物的對數(shù)積累趨于飽和， DNA片段不再呈指數(shù)積累，而進入線性增長期或靜止期的過程。 ： 遺傳信息從 DNA 轉(zhuǎn)到 mRNA，再到蛋白質(zhì)的過程。 ： 是遠距離調(diào)節(jié)啟動子并提高轉(zhuǎn)錄效率的一段 DNA 序列。 ： 指將外源正常基因?qū)氚屑毎?，以糾正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療目的。 ： 是安全評價的起點，是指以有安全食用歷史的傳統(tǒng)食品為基礎(chǔ)，要求轉(zhuǎn)基因食品和它所替代的傳統(tǒng)食品至少要同樣安全。 ，第一個大寫字母取自（微生物屬名）的第一個字母，第二、三個字母取自（種名）的前 2 個字母，第四個字母用株名表 示。 DNA 的原理是（乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學反應，對 DNA很安全，是理想的沉淀劑。 2 類： DNA 探針和 RNA 探針。 的構(gòu)建元件來源于三個親本質(zhì)粒：① pSE2124： 提供 Ampr 基因； ② pMB1：提供 Colel 松弛型 (復制子 )(Ori)；③ pSC101：提供 (Tetr)基因。 1) PCR 技術(shù)原理： 類似于 DNA 的天然復制過程， 其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。檢測特點 DNA ② Northern 雜交：檢測某一特定 RNA 分子的方法，可用于 RNA 定性和定量分析。 ⑤ Western 雜交：檢測可知被檢生物細胞內(nèi)目的蛋白的表達與否，表達量及分子質(zhì)量等。 ： 答：①目的基因的獲得； ②基因文庫第一條鏈的合成； ③基因文庫第二條鏈的合成，即雙鏈的合成； ④λ噬菌體載體的構(gòu)建，與目的基因相互連接，形成重組子； ⑤導入宿主細胞中（如大腸桿菌）進行整合、擴增、克隆重組子 ⑥重組子的篩選與鑒定 ： 答：（ 1）基因組 DNA 的分離制備 （ 2）基因組 DNA 的片段化 （ 3）載體制備 （ 4）重組連接 （ 5） 噬菌體離體包裝 （ 6）重組噬菌體感染大腸桿菌 基因文庫構(gòu)建的步驟： 答：（ 1）細胞總 RNA 的提取和 mRNA 的分離 （ 2）第一條 cDNA 合成 （ RnaseH 的作用） （ 3）第二條 cDNA 合成 （ 4）雙鏈 cDNA 克隆進質(zhì)粒或噬菌體載體并導入宿主中繁殖 ？技術(shù)原理是什么？它們各有什么優(yōu)點和缺點 ? 答：⑴差異顯示 PCR：根據(jù)絕大多數(shù)真核細胞 mRNA339。 缺點：只能用于兩組樣品對照處理，不能提供基因表達數(shù)量上的差異。 植物 基因工程的應用： ㈠在植物遺傳改良中的應用： ①植物對生物逆境性的抗性基因工程。 ⑤資源利用效率的基因工程改良。 ⑨植物觀賞性狀遺傳改良。 ㈢改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)。 ㈢在藥物生產(chǎn)上的應用（蛋白質(zhì)藥物、抗生素等）。 2) 對生態(tài)系統(tǒng)的隱患：①對生物遺傳多樣性可能有影響；②對物種多樣性可能有影響；③對生態(tài)系統(tǒng)多樣性可能有影響。 ②基因漂移：指轉(zhuǎn)基因生物種的目標基因，在生物的個體、種群甚至是物種間自發(fā)移動的過程。 ⑥外源基因產(chǎn)物的特性及其穩(wěn)定性。 今年是我從事人口計生工作的第七個年頭，想想當年，初來乍到，面對各種業(yè)務術(shù)語真是一頭霧水，聽到專業(yè)名詞看到一些藥具還會臉紅，就這樣我成為了一名計生戰(zhàn)線的新兵，一干就是七年。 而過去宣教工作中的兩項內(nèi)容 — 幸福家庭建設(shè)、性別比治理現(xiàn)劃歸家庭發(fā)展科，再加上利益導向組成了現(xiàn)在的家庭發(fā)展科全部工作內(nèi)容。以上這些都是我在本職工作中任勞任怨、勤學肯干的一些積累和經(jīng)驗，也是 支撐我能站在這里的競崗的信心與底氣。 ” 競爭上崗，有上有下，無論上、下，我都將以這句 話自勉，勝不驕、敗不餒，一如既往地勤奮學習、努力工作、追求夢想！ 最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導服務 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導寫作 –獨家原創(chuàng) 10 / 57 衛(wèi)計委衛(wèi)生計生委基層指導科科長競職演講稿 尊敬的各位領(lǐng)導、各位同事： 大家好！ 首先感謝委黨委給了我這個機會，一次檢驗、學習、提高的機會。 具有很強的協(xié)作意識。 具有過硬的業(yè)務能力。我會尊重領(lǐng)導，不越權(quán)、不 越位，積極建言獻策，為科室的工作竭盡全力。團結(jié)帶領(lǐng)科室所有同志，服從領(lǐng)導安排，聽從領(lǐng)導指揮，共同做好科室的工作。嚴格遵守法律法規(guī)和紀律的各項規(guī)定，干干凈凈做事，清清白白做人，尊重領(lǐng)導，團結(jié)同志，自覺接受領(lǐng)導、群眾的監(jiān)督和批評。進一步從工作中查找薄弱環(huán)節(jié)，提高做好各項工作的服務能力。 最后，衷心感謝委黨委對我的關(guān)心、愛護和培養(yǎng)，感謝同事們對我的幫助、照顧和支持。 一、明確理想信念 黑格爾說： “ 沒有理想，一切行動都沒有價值。所以最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導服務 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導寫作 –獨家原創(chuàng) 13 / 57 在以后的工作當中必須堅持 “ 革命理想高于天 ” ，做共產(chǎn)主義遠大理想和中國特色社會主義共同理想的堅定信仰者，志愿為實現(xiàn)民族復興的 “ 中國夢 ” 而奮斗。政府管 家并不是嘴上說說，而是從內(nèi)心深處擺正位置，拿出人民公仆的態(tài)度，敬民、親民、愛民。干部勤于政事，既要勤于 “ 察政 ” 、善于發(fā)現(xiàn)問題，也要勤于 “ 謀政 ” 、善于思考問題，更要勤于 “ 施政 ” 、善于處理問題。 對內(nèi)是指在單位內(nèi)部敢于擔當也體現(xiàn)在勇于批評和反求諸己，作為財政工作人員不應該怕得罪人，搞無原則的一團和氣 ，干事拈輕怕重，遇事明哲保身，這種不敢擔當、不愿擔當、不會擔當?shù)? “ 老好人 ” 、 “ 墻頭草 ” 多了，黨和人民的事業(yè)，還怎么向前推進？正是從這個意義上，敢于擔當，是今天我們黨的干部必須具備的基本素質(zhì)，也是衡量 “ 好干部 ” 的重要標準。我們要嚴格要求自己，依法辦事，嚴格執(zhí)法，不以權(quán)代 法，做學法、守法、用法的模范。我是 XX，今天演講的題目是《不忘初心，方得始終》。我們常常因為走得太遠和時光老去，就忘記當初為什么出發(fā)。情為民所系，權(quán)為民所用，利為民所謀。 我們應從以下三個方面嚴格要求自己： 第一、勤于學習、填補空白 最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導服務 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導寫作 –獨家原創(chuàng) 16 / 57 進入一個新的工作領(lǐng)域，不熟悉，不了解，不內(nèi)行的東西必然很多，我們應把學習作為第一要務 ，腳踏實地，安心學習，扎實工作。但是，人生之路不一定都是順境與成功，也有逆境和失敗。 現(xiàn)在這個浮躁的社會，大家都帶著有色眼鏡看待公務員。 2 月份，市委下發(fā)了黨的建設(shè)目標管理考核實施辦法，先后召開了紀檢、組織、宣傳、統(tǒng)戰(zhàn)及政法會議，對黨 建工作進行了再細化、再布置。主要表現(xiàn)在：一是高度重視。三是推進有序。少數(shù)單位管黨治黨主體責任還需強 化，抓黨建的主動性有待進一步增強。部分單位抓黨建工作的思路不明晰，著力點找得不夠準，對新常態(tài)下黨建工作的重點措施不具體、方法不夠新、任務不夠細。希望大家要立足村情，進一步細化舉措，及時落實到位，確保完成年度的目標任務。如換屆工作存在簡單化的傾向，少數(shù)干部存在著按慣例、走程序、簡單操作等問題，對中央和上級黨委關(guān)于這次換屆的主要精神，只是簡單地提出要求，缺少具體落實的舉措。對報告的起草重視不夠，特別是對以換屆為契機，加強鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委建設(shè)，加強村級組織建設(shè)重視不夠。就當前而言，鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委換屆工作是所有工作重中之重。換屆的關(guān)鍵是圍繞科學發(fā)展，要把換屆工作放到實現(xiàn) “ 十三五 ” 時期經(jīng)濟社會發(fā)展的大局中去謀劃，圍繞推動科學發(fā)展、加快經(jīng)濟發(fā)展方式轉(zhuǎn)變的目標去落實。鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委書記要親自主持，要廣泛征求各方面意見，真正使報 告形成的過程成為最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導服務 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導寫作 –獨家原創(chuàng) 20 / 57 一個統(tǒng)一思想、形成共識、明晰思路、凝聚人心的過程。要堅持德才兼?zhèn)?、以德為先的用人標準，堅持服務科學發(fā)展和重基層的導向，優(yōu)化領(lǐng)導班子結(jié)構(gòu)，激發(fā)班子活力 ，增強整體功能。前期，市委已向每一個鄉(xiāng)鎮(zhèn)派出由市委常委、列席常委任組長的換屆指導組，為進一步加強對工作指導，根據(jù)宣城市要求，市委決定，這次不再提名的鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委書記暫不安排工作職務，直接轉(zhuǎn)任各自鄉(xiāng)鎮(zhèn)換屆指導組副組長，負責指導所在鄉(xiāng)鎮(zhèn)做好換屆工作 ，待鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委換屆圓滿結(jié)束后，再安排工作職務（這里需要強調(diào)的是：所在鄉(xiāng)鎮(zhèn)換屆工作成效直接關(guān)系到下一步職務安排）。二要精心組織召開好黨員代表大會。要將會務組織、材料分發(fā)、氛圍營造、后勤保障等方面工作做精做細，確保各項工作有序不亂。 消費者權(quán)益日宣傳紀念活動主持稿 最 新精 品 資料推薦 提 供全程指導服務 2020 全新精品資料 全新公文范文 全程指導寫作 –獨家原創(chuàng) 22 / 57 A