輕工業(yè)微生物實驗指導書-wenkub
2023-04-22 04:04:27 本頁面
【正文】 （3）保留斜面、以便觀察形態(tài)時使用。液體接種時取一環(huán)菌苔，沿管壁輕輕擦下菌苔，塞上棉塞輕搖試管。接種工具 接種針，接種鉤，接種環(huán)。五、思考題：1．培養(yǎng)基配制好后為什么要滅菌？2．蒸汽滅菌應注意幾個問題？為什么？實驗二 微生物接種和無菌操作技術一、實驗目的了解無菌操作在微生物接種過程中的重要性，掌握無菌操作的基本環(huán)節(jié)。取出滅菌物品時一定要等到壓力降到零時打開滅菌鍋蓋。（2）在清液中加入4g葡萄糖溶解補水至200ml，此時到入一試管10ml。三、實驗材料和儀器：馬鈴薯、葡萄糖（或蔗糖）、瓊脂。實驗一 培養(yǎng)基的制備與滅菌技術一、試驗原理馬鈴薯中含有淀粉、蛋白質(zhì)、脂類及多種維生素經(jīng)煮沸后可把這些營養(yǎng)成分從中溶出以供酵母和霉菌生長需要，加入葡萄糖或蔗糖以補充微生物所需的碳源。燒杯、漏斗、試管、三角瓶、量筒、玻璃棒、紗布、棉花、細繩、牛皮紙、試管架、培養(yǎng)皿。（3）試管分裝：取玻璃漏斗裝在漏斗架上，漏斗下連一橡膠管，與玻璃管嘴相接，橡皮管上夾一彈簧夾，培養(yǎng)基倒入漏斗，通過彈簧夾控制培養(yǎng)基的流量。（6）斜面擺放：將分裝滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基試管置于水平放置的試管上，凝固后即成斜面。掌握幾種常用微生物的接種方法，為微生物的形態(tài)觀察作準備。酒精燈，標簽紙，火柴，鑷子，75%酒精棉球，試管架，電爐，鋁鍋，無菌平皿。穿刺接種：在肉湯培養(yǎng)基上接種細菌，在PDA培養(yǎng)基上接種酵母菌。液體接種觀察記錄細菌、酵母的液體培養(yǎng)特征，保留酵母液體培養(yǎng)液備用。平板接種（1）檢查平板接種的生長狀況，有無污染（凡沒接種地方長出菌落均為染菌）。也有全長為2mm，共分200小格，每小格的長度不變。在它的上面刻有各種形式的標尺，有為直線式的（圖1一4A），有為網(wǎng)式的（圖1—4B）通常用以測量長度的標尺為直線式的，一般為5mm，分成5大格，每一大格分成10小格，共計50小格。方格的大小和數(shù)目各有不同，有236和49格，也有的一個正方形大格中劃分100個方格，在中央的一個方格中再劃分25個小方格。二、實驗目的：學會測微尺的使用和計算方法。 將鏡臺測微尺有刻度的一面朝上放在載物臺上夾好，使測微尺刻度位于視野中央。按下式計算目鏡測微尺每格的長度等于多少um 目鏡測微尺每格的長度（um）＝鏡臺測微尺的格數(shù)目鏡測微尺的格數(shù)X10012345圖l—5 目鏡測微尺的標定上，目鏡測微尺；下，鏡臺測微尺例如，圖1－5中，在低倍鏡下所標定的目鏡測微尺的全長（50格），等于鏡臺測微尺70格，則目鏡測微尺每小格代表的長度則為：目鏡測微尺每格的長度（um）＝7050X10＝14 取下鏡臺測微尺，換上要測量的玻片標本，用目鏡測微尺測量細胞長度的格數(shù)，乘以每格的um數(shù)，即為細胞的實際長度。公式如下： 橢圓形V＝4лab2/3（a,b為長短軸的半徑） 圓球形V＝4лr3/3（r為半徑）酵母菌大小的測定 （1）取下鏡臺測微尺，換上酵母菌水浸片。 五、實驗結果在低倍鏡下：目鏡測微尺（ ）格＝鏡臺測微尺（ ?。└?，目鏡測微尺每小格＝（ ）um。酵母菌細胞體積=（ ）um3。三、實驗方法與步驟： 1. 血球計數(shù)板的構造:測定微生物生長量的方法很多，對酵母來說有兩大類：總菌計數(shù)和活菌計數(shù)，分別稱為直接和間接法。常用血球計數(shù)板有兩種規(guī)格。1/400mm2 XBK25計數(shù)板蓋玻片中央平臺：(1).檢查血球計數(shù)板是否有雜質(zhì)和菌體，若有用脫脂棉蘸取95%酒精輕輕擦洗計數(shù)板的計數(shù)室，用蒸餾水沖洗計數(shù)板，用濾紙吸干其上水分，勿用火烤，最后用擦鏡紙揩干凈。① 找計數(shù)室 先用低倍物鏡尋找到大方格網(wǎng)位置。（5）計算公式：25x16: 細胞數(shù)/ml=(80小格細胞總數(shù)247。：（1） 同上步驟數(shù)出酵母的出芽數(shù)并填在上面表格中（一般需平行計數(shù)三次）。
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