【正文】 件下可以發(fā)芽又形成細(xì)菌的繁殖體。* 2205 芽胞菌制品操作區(qū)是否與相鄰區(qū)域保持相對負(fù)壓，是否有獨立的空氣凈化系統(tǒng)，排出的空氣是否循環(huán)使用，芽胞菌制品的操作直至滅活過程完成之前使用專用設(shè)備。（9）操作區(qū)送風(fēng)應(yīng)經(jīng)過初、中、高三級過濾。（5）如需送至生物安全防護(hù)區(qū)外進(jìn)行焚燒的污物和廢棄物須放置于密封袋，并裝入密閉容器內(nèi)直接送至焚燒爐內(nèi)焚燒。 （1）該操作實驗室可與其他用途房屋設(shè)在一棟建筑物中，但必須自成一區(qū)；該區(qū)通過適當(dāng)措施與公共走廊或公共部分隔離。（5） 對通過分子生物學(xué)方法生產(chǎn)的新菌株，應(yīng)按其原始親本中的最高類別對待。如：土拉弗朗西絲氏菌、布氏菌、炭？芽胞菌、肉毒梭菌、鼻疽假單胞菌、類鼻疽假單胞菌、麻風(fēng)分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌；狂犬病病毒（街菌），森林腦炎病毒，流行性出血熱病毒，國內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)病人，在國外引起腦脊髓炎及出血熱的俄其他蟲媒體病毒，登革熱病毒，甲、乙型肝炎病毒；各種立克次體（包括斑疹傷寒、Q熱）；鸚鵡熱、鳥疫衣原體、淋巴肉芽腫衣原體；馬納青霉菌、北美芽生菌、副球孢子菌、新型隱球菌、巴西芽生菌、煙曲霉，著色霉菌。依其危險程度的大小，我國的菌種分為四類。 3．本項中所說“活疫苗處理”的“處理”，是指各種類減毒活疫苗、菌苗的生產(chǎn)制備全過程。* 2203 不同種類的活疫苗的處理，灌裝是否彼此分開。 在生物制品生產(chǎn)過程中，除細(xì)菌、病毒和細(xì)胞培養(yǎng)一般需要在35~37攝氏度外，其余操作制備過程，各種制品還有各自規(guī)定的最適的溫度。* 2202 生產(chǎn)用菌毒種與非生產(chǎn)用菌毒種、生產(chǎn)用細(xì)胞與非生產(chǎn)用細(xì)胞、強(qiáng)毒與弱毒、死毒與或毒、脫毒前與脫毒后的制品和活疫苗與滅活疫苗、人血液制品、預(yù)防制品等貯存是否嚴(yán)格分開。對人體安全的類毒素稱之為“脫毒后”。 脫毒前和脫毒后是指類毒素的不同生產(chǎn)階段。滅活疫苗生產(chǎn)時，第一階段是采用從自然界分離的毒力強(qiáng)、抗原性好的強(qiáng)毒細(xì)菌菌株或病毒株進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)制備。乙型腦炎減毒活疫苗，是采用人工減毒，并證明其殘留致病力很低，毒力穩(wěn)定并保留自然相應(yīng)免疫原性的乙型腦炎減毒疫苗株來制備生產(chǎn)疫苗。3． 強(qiáng)毒細(xì)菌及病毒株與弱毒細(xì)菌及病毒株，決不允許混放在一起，亦不允許同時在同一實驗室內(nèi)進(jìn)行檢定實驗，更不允許在同一生產(chǎn)車間內(nèi)進(jìn)行強(qiáng)毒和弱毒的疫苗生產(chǎn)制備。 本項所舉的生物制品生產(chǎn)中涉及到的專業(yè)術(shù)語均有特定含義，而且又是關(guān)系到高危致病因子的安全生產(chǎn)和防護(hù)的重大問題，必須明確該項規(guī)定的具體要求：1． 凡用于疫苗、毒素、類毒素、抗毒素、抗血清、DNA重組產(chǎn)品等生產(chǎn)用菌種、毒種、工程菌種、細(xì)胞、工程細(xì)胞均為生產(chǎn)用菌、毒種和細(xì)胞。 有些生物制品是采用天然的或人工改造的微生物（包括細(xì)菌、病毒等）或動物及人源組織、體液為起始材料，這些生物活性材料，如不按規(guī)定進(jìn)行特定操作和處理，對接觸者有一定的感染危險性，甚至危及其生命健康，還可能污染環(huán)境，嚴(yán)重的可造成重大的災(zāi)難性事故。0702 從事生產(chǎn)制品制造的全體人員（包括清潔人員、維修人員）是否根據(jù)其生產(chǎn)的制品和所從事的生產(chǎn)操作進(jìn)行專業(yè)（衛(wèi)生學(xué)、微生物學(xué)等）和安全防護(hù)培訓(xùn)。我國目前生產(chǎn)和使用的生物制品有200多種，各生物制品生產(chǎn)企業(yè)所生產(chǎn)的品種各不相同，基于生物制品起始原輔材料、生產(chǎn)制備過程及質(zhì)量控制等的固有特性，細(xì)菌類或病毒類疫苗（包括毒素、類菌素、抗毒素及抗血清等）生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)和質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人應(yīng)具備細(xì)菌學(xué)或病毒學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、流行病學(xué)等方面的專業(yè)知識；細(xì)胞因子及其他活性生物制劑生產(chǎn)企業(yè)，應(yīng)具備生物化學(xué)、免疫學(xué)、分子生物等方面的專業(yè)知識；DNA產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)，應(yīng)具備現(xiàn)代生物技術(shù)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)等方面的專業(yè)知識；體內(nèi)及體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)等方面的專業(yè)知識；血液制品生產(chǎn)企業(yè)，應(yīng)具備生物化學(xué)、分析生物學(xué)、病毒學(xué)等方面的專業(yè)知識。0402 生物制品生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)和質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人是否具有相應(yīng)得專業(yè)知識（細(xì)菌學(xué)、病毒學(xué)、生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等），并具有豐富的實踐經(jīng)驗以確保在其生產(chǎn)、質(zhì)量管理中履行其職責(zé)。1． 主管生物制品生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)和質(zhì)量管理的企業(yè)負(fù)責(zé)人應(yīng)具備醫(yī)藥及生物學(xué)等方面的專業(yè)知識和實踐經(jīng)驗才能確保其在生產(chǎn)、質(zhì)量管理中履行職責(zé)。2． 本項規(guī)定應(yīng)具備的相應(yīng)專業(yè)知識，也不可機(jī)械地局限到一個人所學(xué)的具體專業(yè)學(xué)科。 1．生物制品生產(chǎn)企業(yè)人員均進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)。因此，對生物制品生產(chǎn)企業(yè)“全體人員”，特別是進(jìn)入省查車間，有可能接觸感染材料的人員，必須進(jìn)行相應(yīng)生物安全防護(hù)教育和培訓(xùn)，務(wù)必使進(jìn)入生產(chǎn)車間或檢驗室的所有人員，了解什么地方有感染危險存在、接觸后如何消毒處理、如何處理突發(fā)事故（如：感染行為、生物傾斜、接觸人體、濺入眼內(nèi)等），以確保生產(chǎn)和人員安全。生產(chǎn)用菌、毒種和細(xì)胞須經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)，除此之外的其他菌、毒種及細(xì)胞，均為非生產(chǎn)用菌、毒種及細(xì)胞。 強(qiáng)毒與弱毒是指用于生產(chǎn)的細(xì)菌或病毒株，為毒力和致病力截然不同的兩類菌、毒株。一般生產(chǎn)減毒活疫苗所用毒力弱的菌株及病毒株為弱毒株或減毒株（Attenuated Strain）。制備出的細(xì)菌原液或病毒原液以及使用過 的培養(yǎng)設(shè)備和器材含有大量的活細(xì)菌或活病毒體，稱之為“活毒”( Live Microorganism)，這些活培養(yǎng)物具有致病性，必須在規(guī)定的相互獨立的潔凈區(qū)生產(chǎn)區(qū)進(jìn)行制備。第一階段，將產(chǎn)毒素菌株（如破傷風(fēng)梭菌、白喉桿菌等）在其適宜條件下進(jìn)行繁殖培養(yǎng)，使其生產(chǎn)出大量外毒素。6． 血液制品生產(chǎn)車間與疫苗、抗血清制品不能共用，其生產(chǎn)廠房必須為獨立的建筑物。 [解釋說明] 因為生物制品是采用天然或基因工程等人工改造手段而獲得的微生物細(xì)胞及各種動物和人源組織、液體為原材料制備的，這些材料與無機(jī)物不一樣，都是生物活性物質(zhì)，其成分含有豐富的蛋白質(zhì)、酶、血漿等營養(yǎng)物質(zhì)，因此菌種一般在2~8攝氏度保存；不同病毒的菌種，有的可在40攝氏度~ 70攝氏度保存，有的要在液氮存放；細(xì)胞要凍于130攝氏度以下；血液制品的原料血漿需在20攝氏度以下冰凍保存等等。血漿的分離提取要在低溫乙醇反應(yīng)罐內(nèi)進(jìn)行，細(xì)菌及病毒疫苗的純化宜在2~8攝氏度進(jìn)行，重組產(chǎn)品的過濾、純化、提取應(yīng)在2~8 攝氏度冷柜內(nèi)進(jìn)行。 1．不同種類的細(xì)菌活疫苗和不同種類的病毒活疫苗，不允許同時在同一生產(chǎn)車間進(jìn)行生產(chǎn)。 *2004 強(qiáng)毒微生物操作區(qū)是否與相鄰區(qū)域保持相對負(fù)壓，是否有獨立的空氣凈化系統(tǒng)，排出的空氣是否循環(huán)使用。（1） 一類：實驗室感染機(jī)會多，感染后發(fā)病的可能性大，癥狀重并能危及生命，缺乏有效的預(yù)防方法，傳染性強(qiáng)，對人群危害性大的烈性傳染病，包括國內(nèi)未發(fā)現(xiàn)或雖已發(fā)現(xiàn)，但無有效防治方法的烈性傳染病。（3） 三類：僅具一般性危險，能引起實驗室感染機(jī)會較少，一般的俄微生物實驗室采用一般實驗技術(shù)能控制感染或有對之有效的免疫預(yù)防方法的菌種。（6） 不允許進(jìn)行兩個菌株完整基因組的重組試驗。 （2）進(jìn)入生物安全防護(hù)實驗室，必須通過緩沖通道，通道設(shè)兩道連鎖門，在緩沖間進(jìn)行更衣。（6）相對實驗操作間外部，操作間內(nèi)部保持負(fù)壓，相對壓強(qiáng)以30Pa~40Pa為宜，緩沖間相對壓強(qiáng)以15Pa~20Pa為宜。（10）操作區(qū)的排風(fēng)必須經(jīng)過高效過濾和經(jīng)驗證的滅活方法進(jìn)行處理，如火焰滅活或消毒劑滅活，以不低于12m/s的速度直接向空氣中排放。 1．有些細(xì)菌在一定條件下變成圓形或卵圓形的小體，稱之為芽胞。芽胞菌在對其不利生存條件下形成芽胞，而使芽胞菌生存下來的這種固有特性是其他細(xì)菌所沒有的。 （1）生產(chǎn)炭疽桿菌、破傷風(fēng)梭菌、肉毒梭菌等芽胞菌的建筑物須與其他生物制品生產(chǎn)廠房分開。 （5）芽胞菌制品生產(chǎn)操作中需重復(fù)使用的物料和用具必須與其他制品生產(chǎn)所用的物料分開。 2．生物制品生產(chǎn)過程中涉及高危致病因子的操作，其空氣凈化系統(tǒng)、人流、物流應(yīng)全部分開。　　　　　　　　　　只有這樣，才能確保這些強(qiáng)毒細(xì)菌和病毒活生物體，只局限于規(guī)定的隔離或封閉系統(tǒng)內(nèi)，不致擴(kuò)散或逃逸出來。2． 卡介苗生產(chǎn)廠房必須與結(jié)核菌類制品生產(chǎn)車間嚴(yán)格分開。 1．本《檢查指南》2205項中已陳述：炭疽桿菌、肉毒梭狀芽胞桿菌和破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌等在一定條件能形成芽胞，芽胞對外界環(huán)境抵抗力極強(qiáng)，用一般常規(guī)清潔消毒方法不能將其殺滅，因此，生產(chǎn)炭疽、肉毒及破傷風(fēng)芽胞菌制品必須在其專用生產(chǎn)廠房內(nèi)進(jìn)行。2． 芽胞菌生產(chǎn)車間只能專用，其他制品不能也不允許利用芽胞菌生產(chǎn)車間來進(jìn)行生產(chǎn)。5． 高壓蒸汽消毒滅菌和間歇滅菌法均進(jìn)行驗證。生產(chǎn)設(shè)備的配置和維修應(yīng)在重新裝配好后再進(jìn)行消毒滅菌，以防止在設(shè)備重新裝配過程中發(fā)生污染。 4．生物制品生產(chǎn)過程中生產(chǎn)的污物和廢棄物，特別是帶有活生物體的污染物，如不能原位消毒處理，需運送到別處消毒時，須放置在密閉容器內(nèi)，用專用運輸工具走污物通道，以避免污染擴(kuò)散和交叉污染。引物可以識別靶DNA，以單鏈DNA為模板合成一條新的DNA鏈，使目的靶DNA的拷貝數(shù)大大增加，從而使病毒或微生物DNA分子較易檢測出來，這種核酸檢測技術(shù)稱之謂聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。*2213 生產(chǎn)人免疫缺陷病毒（HIV）等檢測試劑，在使用陽性樣品時，是否有符合相應(yīng)規(guī)定的防護(hù)措施和設(shè)施。 （2） 目前用于艾滋病檢測主要診斷試劑為人免疫缺陷病毒抗體診斷酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒，該試劑盒由用人免疫缺陷病毒I型和II型（HIV1和HIV2）抗原（合成肽或基因重組蛋白）包被的微孔板和酶標(biāo)記抗人IgG及其他試劑組合而成，應(yīng)用間接法原理（ELISA法）來檢測人血清或血漿中的HIV1和HIV2抗體，這種HIV的ELISA試劑盒式用于初篩檢測用，如要對艾滋病確定診斷還要用艾滋病確診試劑。 1．生物制品生產(chǎn)企業(yè)必須指派專人對其保存的生產(chǎn)用菌毒種和細(xì)胞的容器貼上或固定上該菌毒種和細(xì)胞的標(biāo)示明確的標(biāo)簽或標(biāo)牌。非指定的其他人，未經(jīng)企業(yè)主管領(lǐng)導(dǎo)特別批準(zhǔn) 一律不得進(jìn)入該庫重地。l 原始種子批（Primary Seed Lot）：一定數(shù)目已驗明其來源、歷史和生物特性的細(xì)菌菌株或病毒株，并經(jīng)臨床研究證明其安全性和免疫原性良好的細(xì)菌菌株或病毒株，該原始種子應(yīng)確保組成單一，并經(jīng)充分簽定。一定數(shù)量的源自主種子批的細(xì)菌菌株、病毒株，每批制備應(yīng)達(dá)到一定數(shù)量、組成均一，并經(jīng)全面檢定合格。（2）細(xì)胞庫系統(tǒng)亦分為三級。（3）各種病毒所適應(yīng)不同細(xì)胞的原始細(xì)胞庫、主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫一般保存于液氮罐內(nèi)。 *2215 以人血、人血漿或動物臟器、組織為原料生產(chǎn)的制品是否使用專用設(shè)備，是否與其他生物制品的生產(chǎn)嚴(yán)格分開。上述以人血、人血漿為原材料制備的血液制品、細(xì)胞因子都是采用大批量混合人血漿、血液組成成分來制備，而人血液可能被各種病原體所污染，特別是被經(jīng)血液傳播的相關(guān)病毒污染。3． 為加強(qiáng)血液制品管理，預(yù)防和控制經(jīng)血液途徑傳播的疾病，1996年12月30日國務(wù)院頒布的《血液制品管理條例》規(guī)定。*2216 使用密封系統(tǒng)生物發(fā)酵罐生產(chǎn)生物制品可以在同一區(qū)域同時生產(chǎn)（如單克隆抗體和重組DNA制品） 1．我國現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和國際上通行的《藥品生產(chǎn)檢查互相承認(rèn)公約（PIC）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范指南》、歐共體《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》等均明確規(guī)定：使用生物發(fā)酵罐密封系統(tǒng)的一些制品可以在同一區(qū)域或者同時生產(chǎn)，如單克隆抗體和重組DNA產(chǎn)品。 *2217 各種滅活疫苗（包括重組DNA產(chǎn)品）、類毒素及細(xì)胞提取物，在其滅活或消毒后可以與其他無菌制品交替使用同一灌裝間和灌裝、凍干設(shè)施。 *2218 操作有致病作用的微生物是否在專門的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，是否保持相對負(fù)壓。 *2219 有菌（毒）操作區(qū)與無菌（毒）操作區(qū)是否有各自獨立的空氣凈化系統(tǒng)，來自病原體操作區(qū)的空氣是否循環(huán)使用。為了適應(yīng)滅活疫苗的生產(chǎn)工藝流程的連續(xù)性，在設(shè)計和建造滅活疫苗生產(chǎn)車間時，必須將該滅活疫苗生產(chǎn)車間，分隔成有菌（毒）操作區(qū)與無菌（毒）操作區(qū)兩個獨立的部分，有各自獨立的空氣凈化系統(tǒng)。 *2220 來自危險度為二類以上病原體的空氣是否通過除菌過濾器排放，濾器的性能是否定期檢查。2． 該生物安全防護(hù)操作區(qū)，應(yīng)設(shè)有高壓蒸汽菌鍋或化學(xué)消毒裝置來對廢棄物進(jìn)行消毒處理。因為經(jīng)常要進(jìn)行清潔消毒，地面、物體和天棚等應(yīng)采用能耐受消毒劑或熏蒸消毒的材料。WHO于1994年頒布的《生物制品生產(chǎn)企業(yè)GMP檢查指南》對生物制品生產(chǎn)廠房的設(shè)計亦要求能進(jìn)行薰蒸消毒。 生物檢定：采用微生物、細(xì)胞或?qū)嶒瀯游飦頇z定或判定制品效價及安全性的方法稱為生物檢定法。2． 對用于生產(chǎn)的主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批、對照細(xì)胞、培養(yǎng)液以及臨床治療用細(xì)胞進(jìn)行支原體檢查時（包括培養(yǎng)法或DNA染色法）應(yīng)在專用100級的潔凈操作室或萬級潔凈室中的100級潔凈工作臺進(jìn)行。 *3302 用于生物制品生產(chǎn)的動物室、質(zhì)量檢定動物室是否與制品生產(chǎn)區(qū)各自分開。因此，3002項宜改為“用于生物制品生產(chǎn)的動物的繁殖飼養(yǎng)區(qū)、質(zhì)量檢定動物室是否與制品生產(chǎn)區(qū)各自分開”。因此，GMP認(rèn)證檢查時，應(yīng)要求被檢查單位提供省級實驗動物管理部門核發(fā)的“實驗動物登記合格證書”和“實驗動物飼養(yǎng)條件可許證書”。　　　　　　　　 （2）清潔級動物（二級動物）；除應(yīng)排除人畜共患病及動物烈性傳染病原體外，還應(yīng)排除影響動物健康的動物傳染病及對動物實驗結(jié)果影響大的疾病原體；清潔級動物須在有相應(yīng)潔凈級別的亞屏障系統(tǒng)內(nèi)繁殖飼養(yǎng)。 上述四個等級實驗動物評定標(biāo)準(zhǔn)，以及實驗動物飼養(yǎng)設(shè)施要求，國家實驗動物管理部門均已制定有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。再如日本、歐盟等國家和地區(qū)，到目前為止，對生產(chǎn)用胚數(shù)量巨大的流行性感冒疫苗和水痘疫苗也沒有完全采用SPF雞胚。 1．藥品生產(chǎn)檢查淮南國承認(rèn)公約（PIC）199