【正文】 1017., RL, Nemeth, E, Tran, H, et al. BRCA1 promoter region hypermethylation in ovarian carcinoma: a populationbased study. Cancer Res 2000, 60: 53295333., DJ, Hibberts, NA, McNicol, AM, et al. Loss of pRb expression in pituitary adenomas is associated with methylation of the RB1 CpG island. Cancer Res 2000, 60: 12111216., JK, Zheng, S, Lafuente, A, et al. Aberrant methylation of p16INK4a in anatomic and genderspecific subtypes of sporadic colorectal cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 1999, 8: 501506.24. Toyooka, ., Toyooka,S., Vimani, K., et al. Loss of expression and abrrent methylation of the CDH13 (Hcadherin)gene in breast and lung carcinomas., Cancer Res 2001,61:45564560 A, Meddeb M, Pineau P, et al. Recurrent chromosomal abnormalities in hepatocellular carcinoma detected by parative genomic hybridization.Genes Chromosomes Cancer. 1997,18:5965. J, Ni M, Xu J, et al. Methylation profiling of twenty promoterCpG islands of genes which may contribute to hepatocellular carcinogenesis. BMC Cancer 2002, 2:29項(xiàng)目的 研究內(nèi)容、研究目標(biāo)，以及擬解決的關(guān)鍵問題一、研究Tcadherin在肝癌中的基因功能，使其表達(dá)Tcadherin分子，研究表達(dá)Tcadherin分子的肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的變化，證實(shí)是否Tcadherin重新表達(dá)能抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征。在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究Tcadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，進(jìn)一步揭示Tcadherin基因失活與臨床肝癌預(yù)后的關(guān)系。Takeuchi在對(duì)皮膚鱗癌細(xì)胞株的研究中發(fā)現(xiàn)，與2ug/ml去甲基化藥物5aza2’deoxycytidine共孵6天能使皮膚鱗癌細(xì)胞株恢復(fù)Tcadherin分子表達(dá)（17）。Tcadherin基因位于染色體16q24，肝癌的發(fā)生與染色體16q24的缺失、突變密切相關(guān)(25)。該文發(fā)表于Molecular and Cellular Biology 2003,23:566578（19）。近年來對(duì)經(jīng)典的Cadherin分子的深入研究發(fā)現(xiàn)，E，Ncadherin分子缺失或突變與多種腫瘤如肝癌、胃癌、乳腺癌、肺癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移特征密切相關(guān)（6，7，8,9,10）。因此, 進(jìn)一步探索研究新的基因功能改變與肝癌發(fā)生發(fā)展及其惡性特征的關(guān)系，對(duì)揭示其發(fā)生發(fā)展的精確分子機(jī)制、設(shè)計(jì)合理的治療藥物及判斷預(yù)后， 進(jìn)一步提高我國肝癌的治療水平具有重要意義。說明: 2. 項(xiàng)目組主要成員不包括項(xiàng)目申請(qǐng)者。申請(qǐng)人首次證實(shí)Tcad基因在腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤C6細(xì)胞中的腫瘤抑制基因功能，并揭示其分子機(jī)制。本研究將在肝癌細(xì)胞株進(jìn)一步研究Tcad基因失活與肝癌細(xì)胞的增殖及侵襲等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，并調(diào)查其分子機(jī)制；在臨床切除的肝癌標(biāo)本中研究Tcad基因失活與肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，明確Tcad基因失活與臨床肝癌預(yù)后的關(guān)系；在肝癌細(xì)胞株和肝癌裸鼠模型上證實(shí)去甲基化藥物是否能重新誘導(dǎo)Tcad分子表達(dá)并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲等惡性生物學(xué)特征，探索去甲基化藥物對(duì)肝癌的治療價(jià)值。經(jīng)費(fèi)申請(qǐng)表 （金額單位：萬元）科目申請(qǐng)經(jīng)費(fèi)備注（計(jì)算依據(jù)與說明）（1）測試/計(jì)算/分析費(fèi)統(tǒng)計(jì)分析及數(shù)據(jù)處理費(fèi)（2）能源/動(dòng)力費(fèi)水電費(fèi)（3）會(huì)議費(fèi)/差旅費(fèi)參加國內(nèi)學(xué)術(shù)會(huì)議45人次（4）出版物/文獻(xiàn)/信息傳播費(fèi)論文準(zhǔn)備及發(fā)表（5）其它（1）原材料/試劑/藥品購置費(fèi)購置各種抗體、脂質(zhì)體（2）其它購買氚標(biāo)胸腺嘧啶、去甲基化試劑、合成引物（1）購置購買小型冰凍切片機(jī)、動(dòng)物解剖器材及消耗性器材（2）試制各種常規(guī)試劑建立動(dòng)物解剖工作臺(tái)及同位素實(shí)驗(yàn)專區(qū)委托動(dòng)物中心維持約100只裸鼠約1年的飼養(yǎng)及管理；流試細(xì)胞儀分析參加國際會(huì)議一次邀請(qǐng)Gutmann教授來院指導(dǎo)課題進(jìn)展及專題講座23次合 計(jì)與本項(xiàng)目相關(guān)的其他經(jīng)費(fèi)來源國家其他計(jì)劃資助經(jīng)費(fèi)其他經(jīng)費(fèi)資助（含部門匹配）其他經(jīng)費(fèi)來源合計(jì) 報(bào)告正文（一）立項(xiàng)依據(jù)與研究內(nèi)容項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)原發(fā)性肝癌是高度惡性的腫瘤，盡管采取積極手術(shù)治療，但絕大多數(shù)病人仍難免死于腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，其死亡率高居我國腫瘤死亡率的第二位。Tcadherin分子屬細(xì)胞粘附分子cadherin超家族。將Ecadherin分子重新導(dǎo)入缺失Ecadherin分子表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，則腫瘤細(xì)胞的增殖及侵犯能力顯著受抑（11）。這一研究發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究Tcadherin分子在肝癌中的功能、分子機(jī)制及臨床意義奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 Riou （2002）對(duì)位于染色體16q24的13個(gè)常常在肝癌中缺失表達(dá)的基因的轉(zhuǎn)錄研究發(fā)現(xiàn)，Tcadherin mRNA在HepG2, PLC/PRF/C, TONG 和HA22TNGH四種肝癌細(xì)胞株中缺失表達(dá)，但Tcadherin基因本身并未發(fā)生缺失突變（12）。但目前對(duì)Tcadherin基因失活與肝癌惡性分化程度、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系，以及應(yīng)用去甲基化藥物是否能誘導(dǎo)Tcadherin分子在肝癌細(xì)胞株中重新表達(dá)，并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性特征全世界尚無研究報(bào)道。在肝癌細(xì)胞株及裸鼠肝癌模型上證實(shí)是否去甲基化藥物能重新誘導(dǎo)Tcadherin分子表達(dá)，并抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征，觀察其潛在的治療作用和可能的毒副作用。 的HepG2細(xì)胞于皮下接種裸鼠，在裸鼠肝癌模型上進(jìn)一步證實(shí)Tcadherin基因的腫瘤抑制基因功能。，揭示Tcadherin基因表達(dá)水平（失活）與肝癌惡性分化程度、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移（包括合并門靜脈癌栓和衛(wèi)星灶形成）的關(guān)系。二、研究Tcadherin基因失活與臨床肝癌惡性分化程度、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)特征的關(guān)系的技術(shù)路線a. 檢測Tcadherin表達(dá)： 定量PCR；免疫組織化學(xué)；Western blot ，研究Tcadherin缺失表達(dá)（基因失活）與人肝癌發(fā)生的關(guān)系。采用Herman已報(bào)導(dǎo)的檢測Tcadherin啟動(dòng)子甲基化和非甲基序列的引物，進(jìn)一步證實(shí)Tcadherin在上述肝癌細(xì)胞株中的啟動(dòng)子甲基化現(xiàn)象。 采用細(xì)胞增殖計(jì)數(shù)、3H標(biāo)胸腺嘧啶攝取率測定、克隆增殖試驗(yàn)、細(xì)胞粘附試驗(yàn)和細(xì)胞聚集試驗(yàn)檢測Tcadherin表達(dá)前后肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征的變化。但目前尚無人對(duì)Tcadherin在肝癌中的基因功能及其分子機(jī)制進(jìn)行研究。但對(duì)應(yīng)用去甲基化藥物誘導(dǎo)Tcadherin表達(dá)并研究其對(duì)肝癌的治療學(xué)意義目前尚無研究。證實(shí)是否Tcadherin抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)特征。預(yù)期研究成果：，在國內(nèi)權(quán)威期刊上發(fā)表論文810篇。該文發(fā)表于Oncogene 2002, 21:13251334（影響因子 ）。參加在美國