3種植物花螺原體的分離及其基本特性-生物谷-生物醫(yī)藥門戶-wenkub
2023-04-19 23:02:18 本頁面
【正文】 菜(Brassica napus)、杜鵑(Rhododendron simsii)、紅花酢漿草(Oxalis corymbosa)3種植物花表分離到4株螺原體CNR1和CNRCNACRW1，對(duì)其形態(tài)、部分生理生化特性及分子生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究。ISSN 00016209。這4株螺原體在R2液體培養(yǎng)基中生長良好， mm的微孔濾膜；在R2固體培養(yǎng)基上呈圓形或顆粒狀菌落，菌落直徑約50~600 mm；在生長的某個(gè)階段可呈典型的螺旋狀，~ nm，~ mm；它們都能利用葡萄糖作為碳源，不能利用尿素；在不含胎牛血清的R2培養(yǎng)基中，它們都不能生長；菌株CNRCNA1能強(qiáng)烈代謝精氨酸，而CNR2和CRW1不能代謝精氨酸；在氨芐青霉素鈉濃度高達(dá)2000 U/mL的R2培養(yǎng)基中，分離菌株生長良好。作為一類重要的微生物資源，由于其形態(tài)結(jié)構(gòu)和營養(yǎng)代謝的特點(diǎn)，螺原體常作為研究生物膜和運(yùn)動(dòng)的模式生物受到關(guān)注[2, 3]。目前一般觀點(diǎn)認(rèn)為，花上螺原體可能是攜帶螺原體的昆蟲在取食花蜜或花粉時(shí)留下的,花僅是作為定居場所在昆蟲傳播中起作用，這種推測也被食葉昆蟲及非蟲媒花上沒有發(fā)現(xiàn)類似的螺原體所支持[4]。1 材料和方法 材料 供試植物花和螺原體菌株：用于分離螺原體的植物花有油菜(Brassica napus)、杜鵑(Rhododendron simsii)、紅花酢漿草(Oxalis corymbosa )、牡丹(Paeona suffruticosa)、現(xiàn)代月季(Rosa hybrida)、虞美人(Papaver rhoeas)、諸葛菜(Orychophragmus violaceus)、唐菖蒲(Gladiolus hybridus)等80多種，都是在華東地區(qū)于3 ~ 7月間開花的植物。 螺原體的分離及純化分離所用培養(yǎng)基是由C3G簡化后的R2培養(yǎng) 基[7]。在R2培養(yǎng)基中加入不同單位的氨芐青霉素鈉以檢查螺原體對(duì)青霉素的抗性[7]。 螺原體的培養(yǎng)及其生理學(xué)特性將分離物接種到R2液體或固體培養(yǎng)基中，30℃靜置培養(yǎng)，逐日觀察培養(yǎng)基顏色變化，并用暗視野顯微鏡觀察分離物的密度和運(yùn)動(dòng)方式。以接種R2培養(yǎng)基作對(duì)照，重復(fù)3次。利用BLAST將測序結(jié)果在NCBI()中與相關(guān)的16S rDNA 序列進(jìn)行同源性分析。分離物CNR1和CNR2分離自油菜花，CNA1和CRW1分別分離自杜鵑花和紅花酢漿草的花表。在氨芐青霉素鈉濃度高達(dá)2000 U/mL的R2培養(yǎng)基中，分離菌株能正常繁殖，生長良好。瓊脂濃度低、接種量少則菌落相對(duì)較大。 C: CNA1。在暗視野顯微鏡下也發(fā)現(xiàn)螺原體分離物密度的快速增加，螺原體呈劇烈的翻滾運(yùn)動(dòng)；而接種和培養(yǎng)CNR2和CRW1 14 d后培養(yǎng)基顏色仍沒有變化，而且在暗視野顯微鏡下也沒有發(fā)現(xiàn)螺原體密度的增加。同時(shí)對(duì)4個(gè)菌株之間的序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)CRW1的16S rDNA與其它3個(gè)菌株的序列差異較大，而其它3個(gè)菌株間16S rDNA僅有幾個(gè)堿基的差異。選擇不同血清組和不同血清亞組的標(biāo)準(zhǔn)菌株，從GenBank中下載相應(yīng)的ITS序列，經(jīng)整理用于系統(tǒng)發(fā)育分析的ITS序列長度約310 bp，進(jìn)行初步分析后用于系統(tǒng)發(fā)育分析。一般認(rèn)為植物花螺原體是通過媒介——主要是節(jié)肢動(dòng)物在取食花蜜時(shí)留下的[12]。分離得到的菌株均能利用葡萄糖作為碳源，不能利用尿素（表1），這些也是螺原體屬的特性[4,15]。將已分離菌株的16S rDNA序列和ITS序列進(jìn)行比較，結(jié)果顯示16S rDNA序列較為保守，而ITS序列無論是核苷酸數(shù)量還是組成上都有明顯差異。因此，根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)合形態(tài)、生理學(xué)特性研究結(jié)果，分離自油菜花的螺原體CNRCNR2和分離自杜鵑花的螺原體CNA1極有可能就是蜜蜂螺原體S. melliferum，屬于第Ⅰ血清組第2亞組；而分離自紅花酢漿草的螺原體CRW1極有可能是一個(gè)新種，但還需要用血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)一步證明。 CNA1and CRW1 from Rhododendron simsii and Oxalis corymbosa respectively. All isolates grew well in R2 liquid medium and exhibited contractive movements. The colonies of all isolates were circinal and grainlike in solid medium. Through electron microscopy, all isolates exhibited helicity during their growth phase. All isolates could pass through a μm filtrate membrane and resist to penicillin (2000 U/mL). They must grow in medium with serum. Glucose could be used as their carbon source instead of sucrose. The ability to hydrolyze arginine varied from different spiroplasmas but urea could not be hydrolyzed. The phylogenetic relationships based on 16S rDNA supported CRW1 was close to S. clarkii, and others were close to S. melliferum. The phylogenetic relationship based on ITS sequence supported CRW1 formed a separate clade, and others were also close to Spiroplasma melliferum. [Conclus
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