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基因克隆的一般流程-wenkub

2023-01-27 12:46:15 本頁(yè)面

　

【正文】關(guān)于連接酶 ? 定義： ATP存在下，在 3’ OH和 5’ P之間形成磷酸二酯鍵。 ? 如 Pst I（ CTGCA↓ G， 12℃ ）， EcoRI（ G↓ AATTC， 8℃ ）。 15 ?l體積反應(yīng)體系中：加 ddH2O使終體積為 15 ?l Liner vector 50100 ng Target gene fragment 15 30 ng 10 Ligase Buffer (已含有 ATP) ?l T4 DNA Ligase ?l ? 輕輕混勻，稍加離心 , 1416℃ 或 4℃ ,O/N 。 ? DNA量： ? 摩爾數(shù)之比載體 :目的 DNA ＝ 1 : ( 1~3 )

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