【正文】 芽開始分化； 4 月中旬氣溫達 l0％以上時，開始展葉； 12。冬季休眠時期耐寒能力很強，在一 41． 5℃ 的絕對低溫條件下能安全越冬。 C 一一 15． 4。C 的內(nèi)蒙古呼和浩特市開花結(jié)果 (表 5)。在栽培條件下，它既能在海拔 2807． 7m、年平均氣溫 4． 2。 E，年平均氣溫 4． 4℃ 12． 7℃ ， 7 月份平均氣溫 17． 2℃ 26． 6。其野生種的自然分布區(qū)處在北緯 35。溫度、光照、水分和土壤是枸杞所要求的最基本的自然條件，是枸杞生長不可缺少的生存因子。 植物激素 2,4D 在枸杞髓組織的愈傷組織誘導(dǎo)中有重要的作用，但高濃度的 2,4D 不利于愈傷組織的誘導(dǎo)，而以 mg／ L 效果最佳，誘導(dǎo)率達 100 %。 3 討 論 細胞胚的誘導(dǎo)和植株再生已有過報道 〔 4,5〕 , 并已用愈傷組織進行了懸浮培養(yǎng) 〔 6,7,8〕 , 最近 , 通過原生質(zhì)體培養(yǎng)得到了愈傷組織 , 但沒有形成再生植株。從表 5 可以看出，以 MS + 6BA mg／ L 時，芽生長正常，經(jīng)過 20 d 的培養(yǎng)，每芽可產(chǎn)生 50～ 150 株無根苗（圖版 Ⅰ ： 4），但 BA 為 1 mg／ L 時，芽不能進行擴增，培養(yǎng) 20 d 后就轉(zhuǎn)變?yōu)椴ＡЩ纾?6BA mg／ L 的培養(yǎng)基雖能進行擴繁，但隨著培養(yǎng)時間的延長，部分也轉(zhuǎn)化為玻璃化苗。因此，這種方法是枸杞進行離體快繁較為適宜的途徑。 表 2 2,4D 對枸杞愈傷組織的影響 Table 2 Effects of 2,4D on calli of Lycium barbarum L. 培養(yǎng)基編號 medium 激素濃度 (mg/L) Hormone concentration 生長情況 Growth status 褐化時間（ d） Time of calli bee brown 愈傷組織特點 Calli characteristics （ 1） MS+2,4D2 ++++ 10 白色水質(zhì)狀，生長快 （ 2） MS+2,4D1 +++ 12 白色水質(zhì)狀，生長快 （ 3） MS+2, ++ 25 白色松散，生長較快 （ 4） MS+2,+CH ++ 28 白色松散，生長較快 （ 5） MS+2,+ + 2 白色緊密，顏色由白 轉(zhuǎn)綠 （ 6） MS++ +++ － 淡黃色，顆粒狀 注 :愈傷組織生長情況分四級 :+很少 ++少 +++中等 ++++大量 Four classes were divided according to the callus growth:+very small ++small +++medium ++++large. 表 2 可以看出 , 2, 4D 對枸杞愈傷組織的形成在一定范圍內(nèi) (～2 mg／ L)隨 2, 4D 濃度的增加 , 愈傷組織生長加快 , 但褐化時間提前。培養(yǎng)條件：溫度 20～ 25 ℃ ，每日光照 10～ 12 h，光照強度為 2 500～ 3 000 lx。挑選色澤鮮艷、生長迅速的愈傷組織進行繼代培養(yǎng)，每次 20 d， 2～ 3 次繼代后，出現(xiàn)疏松顆粒狀胚性愈傷組織，選擇顆粒較細的愈傷組織，加快繼代頻率（ 2 周 1 次），當愈傷組織易碎，顆粒均勻且生長迅速時，改為 3 周 1 次保存之。 關(guān)鍵詞 ：枸杞；髓組織；離體培養(yǎng)；植 株再生 枸杞（ Lycium barbarum L.）是重要的藥用植物，多年來，國內(nèi)外科技工作者十分重視枸杞的組織培養(yǎng)，已有用葉片、花藥、下胚軸、莖端及幼嫩子房為材料進行組織培養(yǎng)分化出植株的 〔 1,2,3〕 ，我們在此基礎(chǔ)上，以枸杞髓組織為試驗材料進行組織培養(yǎng)，獲得了再生植株，為枸杞細胞突變體的篩選、細胞懸浮培養(yǎng)、原生質(zhì)分離、細胞雜交、基因轉(zhuǎn)移的研究提供依據(jù)。用無菌水淋洗 3～ 5 次后 ,在無菌條件下將葉片橫切成 1 厘米左右的切段 ,接種在 Murashige和 Skoog 培養(yǎng)基上 ,培養(yǎng)基附加激動素 (K),吲哚乙酸 (IAA) 或 ,IAA 枸杞髓組織離體培養(yǎng)及高頻率植株再生的研究 * 曹有龍 陳 放 羅 青 曲 琳 摘 要 ： 枸杞髓組織在 4 種 MS 培養(yǎng)基上都能誘導(dǎo)出愈傷組織，誘導(dǎo)率%～ 100%。培養(yǎng)溫度 25～ 30℃ ,自然光照。培養(yǎng)條件 :基本培養(yǎng)基為 MS。結(jié)果表明 ,不定芽誘導(dǎo)用 MS + 6BA +NAA 。增殖培養(yǎng)基以 MS + 6BA + IBA 。長芽培養(yǎng)基中的激素成分為 (毫克 /升 ):① ,KT1,② ,BA1。 ⑤ MS 和 MS(1/ 2 大量、微量元素全量 )培養(yǎng)基均適于枸杞的培養(yǎng)、芽增殖和發(fā)根 .在培養(yǎng)基的附加成分中激素的調(diào)節(jié)是重要 的 ,激素以 IBA 濃度在 0～ 10 6 mol/L 均適其培養(yǎng) ,但以 IBA 的濃度為 5 .5 10 7mol/L效果最佳 ,在有機成份中 VB1 的含量對發(fā)根有明顯的促進作用 .微量全量對枸杞的發(fā)根是必需的 .MS(1/ 2 大量、微量元素全量 ) +VB12 .96 10 5mol/L +IBA5 .5 10 7mol/L(其他有機成分常量 )是枸杞芽增殖與發(fā)根同步的最佳培養(yǎng)基 . ⑥ 枸杞屬植物 (Lycium haminifoliumMill)花粉粒發(fā)育成胚和植株的形成已有報 導(dǎo)。在培養(yǎng)基 MS + 6BA mg/L + NAA mg/L 獲得的愈傷組織，呈顆粒狀，分散性能好，胚性細胞多。 1 材料和方法 試驗材料 供試材料為寧夏農(nóng)科院枸杞研究所培育的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)枸杞新品種 —— 寧杞１號。 分化培養(yǎng) 將上述繼代過程中產(chǎn)生的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)移到含不同濃度的 6－ BA 和 NAA 的 MS 培養(yǎng)基上， 4 周后觀察不同培養(yǎng)基上愈傷組織的分化出芽情況。 2 結(jié)果與分析 愈傷組織的誘導(dǎo)和生長 枸杞髓組織切片接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上 3 d 后開始膨大，在切面上開始形成白色愈傷組織（圖版 Ⅰ: 1），其中 P1培養(yǎng)基誘導(dǎo)頻率最高，可達%； P3與 P4培養(yǎng)基誘導(dǎo)的愈傷組織白色緊密，不易分散，經(jīng)過 30 d繼代培養(yǎng)，有的可直接分 化出苗，但頻率很低（表 1），而 P2培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的愈傷組織為淡黃色松散型，這種愈傷組織繼代轉(zhuǎn)接后能迅速生長，多次繼代培養(yǎng)后，顆粒小，分散好，難以用鑷子夾起來，而且胚性細胞多，分化頻率高。當 mg／ L 2, 4D 與 mg／ L KT 配合使用時，愈傷組織生長速度很低，而且變得十分堅硬，顏色也由白色轉(zhuǎn)為綠色，近培養(yǎng)基部分 2d 后出現(xiàn)褐化；培養(yǎng)基中添加 500 mg／ L CH 對愈化組織的生長有很好的促進作用。 表 3 不同植物激素對枸杞愈傷組織分化頻率的影響 Table 3 Effects of different hormones on differentiation rate of Lycium barbarum 培養(yǎng)基 (mg/L) Medium 分化頻率（％） Regeneration rate 每塊愈傷組織平均的苗數(shù)（個） Average number of shoots on a single callus 特征 Characteristics 6BA2 100 12 大多數(shù)玻璃化 6BA1 90 10 部分玻璃化 97 8 正常 + 90 10 芽基部有愈傷組織 產(chǎn)生 + 93 11 正常 分化培養(yǎng) 將經(jīng)過 P2 培養(yǎng)基進行繼代培養(yǎng) 15 d 的愈傷組織轉(zhuǎn)入附加 3% 蔗糖、 % 瓊脂， 500 mg／ L CH, ～ 含不同 6BA 濃度的 MS 分化培養(yǎng)基，兩周后開始形成芽點，可進一步發(fā)展成芽叢 (圖版 Ⅰ :3），所做不同植物激素配比試驗結(jié)果表明，枸杞愈傷組織芽的分化需要一定濃度使用的 5 種含 6BA 的培養(yǎng)基分化頻率都在 90％以上， 6BA 濃度高 , 每塊愈傷組織得苗數(shù)多 , 但玻璃化苗也多 , 6BA 與NAA 配合使用 , 能顯著提高愈傷組織的分化頻率 , 但同時愈傷組織也得到增殖 , 分化得到的苗必須及時轉(zhuǎn)移，否則苗的基部又會轉(zhuǎn)化為愈傷組織。 生根培養(yǎng) 將叢生芽沿基部切下，接種到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，結(jié)果如表 5． 表 5 不同植物激素濃度對枸杞幼芽生根的影響 Table 5 Effects of different hormones of Lycium barbarum L 培養(yǎng)基（ mg／ L） Medium 接種苗數(shù)（個） Number of planted shoots 生根芽數(shù)（個） Number of shoots with induced root 生根率（％） Rate of root formation MS0 50 2 4 MS+NAA1 50 0 0 MS+ 50 1 2 MS+ 50 46 92 從表 5 可以看出，無激素或者高濃度的生長素不利于枸杞幼芽根的形成，低濃度的生長素對根的形成有促進作用，當培養(yǎng)基中含有 NAA mg/L 時，能形成大量完整植株（圖版 Ⅰ ： 5），生根率可達 92%，且不定根較粗，并有側(cè)根出現(xiàn)。本文報道的試驗結(jié)果與以往相比 , 一是培養(yǎng)材料選用枸杞髓組織，二是篩選出了具高分化潛能的顆粒狀愈傷組織 , 繼代一年多仍保持較高的分化頻率，為枸杞抗病突變體篩選、原生質(zhì)體融合培養(yǎng)以及外源基因轉(zhuǎn)移的研究提供了一個有用的系統(tǒng)。以 MS + mg／ L 2,4D 誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生；以 P2培養(yǎng)基進行繼代培養(yǎng)；以 MS + 6BA mg／ L + NAA mg／ L 進行分化培養(yǎng)；以 MS + mg／ L NAA 進行生根培養(yǎng)，這是枸杞進行離體培養(yǎng)的一條理想途徑。枸杞是一種適應(yīng)性很強的樹種，對溫 度、光照、水分、土壤等條件要求不太嚴格。 45。 C，絕對最高氣溫 33． 9。C、極端最低氣溫一 33． 6。據(jù)調(diào)查， 1 月份平均氣溫一 4． 8℃ 7． 1℃ ，年平均氣溫 8． 6℃ 。 C，年平均氣溫為 4． 4℃ 12． 7℃ 也能生長良好，并獲得較高產(chǎn)量。當春季氣溫穩(wěn)定在 7℃ 左右時，種子即可萌發(fā)，幼苗可抵御短期一 2℃ 一 3℃ 低溫。 (2 以上時，春梢生長； 15％以上時，生長迅速。 秋季當氣溫下降到 11℃ 時，果實生長發(fā)育緩慢，體形小，品質(zhì)降低，但還能成熟。光照強弱和日照長短直接影響枸杞的生長和發(fā)育。據(jù)調(diào)查，樹冠各 部位因受光照強弱不一樣，枝條座果率也不一樣。 由于光照對枸杞生長發(fā)育影響大，所以在生產(chǎn)中應(yīng)很好地選擇栽植密度、方式和修剪量，充分利用土地、空間和光照，才能既提高產(chǎn)品質(zhì)量，又獲得豐產(chǎn)。 枸杞耐旱能力強。但是，在栽培條件下若是獲得豐產(chǎn)，就必須有足夠的土壤水分供應(yīng)。枸杞最忌地表淹水和表土長期積水，在過濕的土壤中，容易誘發(fā)根腐病，引起枸杞樹死亡。 40cm 土壤含水量 15． 27％一 18． 1％時，生長正常，最適宜的土壤含水量為 20％。因為地下水位過高，土壤的通氣條件惡化，會影響枸杞根系的呼吸和生長。 69／ L 的苦水灌溉枸杞園，也生長良好。 四、土壤 土壤作為枸杞的生存基礎(chǔ)，供給其生長結(jié)實的營養(yǎng)和水分。據(jù)有關(guān)資料介紹，枸杞的耐鹽性僅次于胡楊。但如果土壤沙性過強，則會造成肥水保持能力差，容易干旱，枸杞生長不良。 枸杞的耐鹽堿能力很強，適應(yīng)范圍也很廣。 66． 4％。 8． 含鹽量 0． o9％ 0． 11％的土壤條件下形成單產(chǎn) 23 萄一 4200 千克／ hm2 的豐產(chǎn)園；個別新栽枸杞的土壤 pH 值 9． 8，在加強田問管理的情況下，枸杞仍然能正常生長，如新品種寧杞 1 號能在 pH 值 9． 09． 含鹽量 0． 2％的灰鈣土上生長良好，并能結(jié)實，可見枸杞是很耐堿的。 第二節(jié) 育苗 一、育苗 枸杞育苗方法有播種、枝條扦插、根蘗、壓條和組織培養(yǎng)等 5 種，生產(chǎn) 上以播種和扦插育苗為主。播種育苗的優(yōu)點是在短期內(nèi)能快速地、集中地育出大量苗木，滿足生產(chǎn)上對種苗的需要，而且通過選種和加強管理，可以培育出健壯、根系完整的良種壯苗，并且成本低，易掌握。寧夏枸杞栽種品種繁多，但目前以寧杞 1 號枸杞、寧杞 2 號枸杞和大麻葉枸杞三個品種最優(yōu)良。對于品質(zhì)混雜的小粒果實不要用于制種，以防降低種子質(zhì)量。 2．播種技術(shù)枸杞播種育苗在春、夏、秋三季都可進行，但以春季播種為好，即在 3月下旬至 4 月份播種，因春季有利于種子發(fā)芽出土，幼苗生長期長，當年可育成大量壯苗出圃。種子育苗多用條播，行距 3040cm，開 35cm寬、 23cm 深的播種溝，將催芽后的種子與 l0 倍細沙拌勻，撒入溝內(nèi)。覆土后不立即灌水，如果播種后遇天氣干旱，土壤墑情差，較長時間不出芽，也可用小水淺灌，促進種子發(fā)芽出土。它的最大優(yōu)點是苗木能保持母樹優(yōu)良性狀，結(jié)果早，產(chǎn)量高，優(yōu)良品種能在生產(chǎn)上迅速繁殖推廣。為促進生根，可用 1520ppm 的 NAA(a 一萘乙酸 )浸泡 24 小時或 100ppm 的NAA 浸泡 2 小時 (浸泡部位應(yīng)在插條下部 3cm)。此法操作簡便，生產(chǎn)上已普遍采用。 嫩枝扦插一般在 57 月份進行。按5cm10cm 株、行距定點，用細樹枝在沙床上插 12em 深小孔，將浸沾生根劑的插條插入孔里，填細沙，用手指稍微按實。 34℃ ，空氣相對濕度保持在