【正文】 過(guò)玻珠柱前后的血液，作血小板計(jì)數(shù)。通過(guò)計(jì)數(shù)接觸前、后的血中血小板數(shù)，即可計(jì)算出血小板粘附率。 3．細(xì)胞器內(nèi)含物結(jié)構(gòu) 主要致密顆粒和 α 顆粒、溶酶體組成。 ? 電子顯微鏡：血小板結(jié)構(gòu)由外向內(nèi)可分為表面結(jié)構(gòu)、溶膠質(zhì)層結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器內(nèi)含物三層。 ? 血小板壽命： 7～ 10天。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗(yàn) ? 了解血小板的超微結(jié)構(gòu)，在此基礎(chǔ)上理解血小板的止血功能。 樣品 6酮 PGF1α 濃度（ pg/ml） =測(cè)定值 10。以 OPD過(guò)氧化氫為基質(zhì)顯色 20min，加入 3mol/L硫酸中止反應(yīng)，在酶標(biāo)檢測(cè)儀上測(cè)定 490nm處的吸光度值 A。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗(yàn) 血漿 6酮 前列腺素 F1α 檢測(cè) 操作步驟 順利采取靜脈血后與 5%EDTANa2進(jìn)行 9： 1抗凝混勻， 3000r/min離心 20min分離出血漿。冷凍的樣品復(fù)溶時(shí)應(yīng)在 37℃水浴中進(jìn)行，室溫中緩慢解凍則可導(dǎo)致 TM沉淀。 正常情況下 ， 血漿中 TM的含量很低 ， 但當(dāng)血管內(nèi)皮受損后 ， 血漿中的 TM含量明顯升高且與內(nèi)皮的損傷程度相關(guān) 。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗(yàn) 凝血酶調(diào)節(jié)蛋白， TM 原理將抗人凝血酶調(diào)節(jié)蛋白（ Thrombomdulin,TM）單克隆抗體包被于聚苯乙烯放免小杯中，樣本中的 TM結(jié)合于包被的放免小杯上，加入 125I抗人 TM單抗，根據(jù)結(jié)合的 125I放射性強(qiáng)度計(jì)算出樣品中 TM的含量。 除本方法外，也可以采用膠乳增強(qiáng)免疫比濁法。 ? 室溫放置 10min后在酶標(biāo)儀上測(cè)定 492nm處的吸光度值。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗(yàn) 二、血管壁（內(nèi)皮）檢驗(yàn) vWF:Ag 操作 ? 單抗以 （ ）稀釋成10μ g/ml加入反應(yīng)板中，每孔 ，置于濕盒中 4℃過(guò)夜。 ? %Tween— 20， （ ，Tween— PBS）洗 3次后加入用 %BSA— PBS稀釋的待測(cè)血漿或培養(yǎng)液上清，每孔 ， 37℃ 溫育 2小時(shí)。 ? 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 正常混合血漿以 %BSA— PBA按 1： 1： 50、 1： 100、 1： 200、 1： 500、 1： 1000六種濃度稀釋?zhuān)c待測(cè)樣品在相同條件下測(cè)定。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗(yàn) vWF:Ag 參考區(qū)間 vWF:Ag 應(yīng)用評(píng)價(jià) 血管性血友病因子抗原測(cè)定主要用于血管性血友病的診斷和鑒別診斷 見(jiàn)于血管性血友?。?vWD），是診斷 vWD及其分型的重要依據(jù) 見(jiàn)于血栓性疾病，如急性冠脈綜合征（ ASC）、心肌梗死、 腦血管病變、妊娠高血壓綜合征、腎小球疾病等，同時(shí)也見(jiàn) 于劇烈運(yùn)動(dòng)后，腎上腺素受體被興奮等。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗(yàn) TM 操作 人 TM標(biāo)準(zhǔn)品用緩沖液 A做倍比稀釋?zhuān)?TM的濃度分別為 500， 250， 125， ， ， , 0ng/ml,以人 TM濃度為橫坐標(biāo)，以 cpm為縱坐標(biāo)繪制校正曲線。 目前認(rèn)為 ， TM:Ag的檢測(cè)是了解血管內(nèi)皮損傷最好的指標(biāo) 。 2. 若樣本中的 TM含量超過(guò)校正曲線范圍應(yīng)適量稀釋后再次測(cè)定 。 6酮 PGF1α BSA作一定稀釋后包被于酶標(biāo)反應(yīng)板，再用 %明膠封閉。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗(yàn) 血漿 6酮 前列腺素 F1α 檢測(cè) 參考區(qū)間 標(biāo)準(zhǔn)曲線與計(jì)算 式中 :B為測(cè)定管； B0為不加樣品管，最大結(jié)合率管；B/B0為結(jié)合率。 參考范圍 ～ pg/ml。 ? 理解并掌握血小板止血功能實(shí)驗(yàn)室檢查的臨床應(yīng)用及評(píng)價(jià)。 ? 主要功能：促進(jìn)止血和加速凝血，在止血、傷口愈合、炎癥反應(yīng)、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理過(guò)程中起重要作用。 1．血小板表面結(jié)構(gòu) 由血小板膜、細(xì)胞外衣和開(kāi)放管道系統(tǒng)（ open canalicular system， OCS）組成。 血小板超微結(jié)構(gòu) — 功能基礎(chǔ) 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) 花生四烯酸是膜磷脂代謝產(chǎn)物，其代謝途徑是血小板發(fā)揮聚集止血功能的主要代謝基礎(chǔ)。該試驗(yàn)為判斷血小板粘附能力的常用指標(biāo)。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) 血小板粘附率（ %） = 100% 參考值： % 177。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) PAdT 參考區(qū)間 粘附前血小板數(shù) 粘附后血小板數(shù) 粘附前血小板數(shù) PAdT 應(yīng)用評(píng)價(jià) 血小板粘附率減低：見(jiàn)于先天性和繼發(fā)性血小板功能異常（以后者多見(jiàn)），如血管性血友病、巨大血小板綜合征、愛(ài) 唐綜合征、低（無(wú)）纖維蛋白血癥、異常纖維蛋白血癥、急性白血病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增殖性疾病、肝硬化、尿毒癥、服用抗血小板藥物等。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) 血小板聚集實(shí)驗(yàn) PAgT 原理 當(dāng)一定數(shù)量的誘導(dǎo)劑存在時(shí)血小板即發(fā)生聚集。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) PAgT 操作 1. 用硅化注射器從肘靜脈取血 ，注入含 109mmol/L枸櫞酸鈉的硅化或塑料離心管中，充分混勻； 2. 以 1000r/min室溫下離心 10min，分離 PRP，小心取出上層血漿，計(jì)數(shù)血小板并調(diào)至（ 100～ 200） 109/L； 將上述剩余血液以 3000r/min離心 20min，分離 PPP（上層較透明的液體），血小板計(jì)數(shù)一般要求低于 20 109/L； 3. 按照不同的聚集儀的要求，吸取所需的 PRP和 PPP置于比色杯中，分別調(diào)整好透光度為 10和 0； 4. 打開(kāi)記錄儀走紙開(kāi)關(guān)，描記 10s的 PRP基線，隨后將適量誘聚劑（視儀器要求而定，一般為反應(yīng)體系總量的 1/10左右）加入 PRP中，并開(kāi)始攪拌，記錄濁度改變曲線，測(cè)定時(shí)間一般為 6～ 10min。 ? 血小板聚集率增高血液高凝狀態(tài)和（或）血栓形成性疾病，如動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、糖尿病、腎小球腎炎、腎病綜合征、心臟瓣膜置換術(shù)后、深靜脈血栓形成、高脂飲食、口服避孕藥和吸煙等。 采血前一天應(yīng)避免使用牛奶、豆?jié){等高脂肪食物以免影響懸液透光度。此外，誘聚劑的種類(lèi)和濃度對(duì)血小板聚集結(jié)果都有影響，臨床判斷是應(yīng)注明所用誘聚劑的種類(lèi)和濃度。通過(guò)測(cè)定各組標(biāo)本的凝固時(shí)間，比較各組時(shí)差，了解受檢者 PF3是否有缺陷。第 3組、第 4組分別為患者和正常人（作為對(duì)照管），患者 PF3有缺陷或內(nèi)源凝血因子有缺陷時(shí)（如血友?。?，第 3組凝固時(shí)間比第 4組長(zhǎng)。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) 血小板膜糖蛋白測(cè)定 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) ? 血小板膜糖蛋白（ Glucoprotein， GP）是血小板功能和血小板與其他活性物質(zhì)作用的基礎(chǔ)，一些糖蛋白如 GP Ia、GP Ib、 GP IIb、 GP IIIa等已被確定為血小板特異抗原。 主要血小板膜糖蛋白及功能 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) 名 稱(chēng) CD名稱(chēng) 分子量 功能特性 GP Ia CD49b 150 000 與 GP IIa形成復(fù)合物，是膠原的受體 GP Ib CD42c 170 000 與 GP IX、 GP V形成復(fù)合物，是 vWF的受體，參與血小板粘附反應(yīng)，缺乏或減少時(shí)血小板粘附功能減低，見(jiàn)于巨大血小板綜合征 GP Ic CD49f 140 000 與 GP II形成復(fù)合物，是層素（ laminin）的受體 GP IIa CD29 138 000 與 GP Ia和 Ic形成復(fù)合物，是膠原和層素的受體 GP IIb和IIIa CD41a IIb 145 000 IIIa 90 000 GP IIb與 IIIa形成復(fù)合物，是纖維蛋白原（ Fg）的受體，參與血小板聚集反應(yīng)，缺乏或減少時(shí)血小板聚集功能減低，見(jiàn)于血小板無(wú)力癥 GP IV CD36 88 000 是 TSP的受體 GP V 82 000 和 GP Ib、 GP IX構(gòu)成 vWF受體 GP IbVIX GP IX CD42a 17 000 和 GP Ib、 GP V形成復(fù)合物，構(gòu)成 vWF受體 Pselectin 140 000 即 α顆粒膜糖蛋白（ GMP140）。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) 血小板相關(guān)抗體測(cè)定 的應(yīng)用評(píng)價(jià) ?特發(fā)性血小板減少性紫癜 （ ITP） ： 90%以上的病人 PAIgG增加 ， 同時(shí)測(cè)定 PAIgA、 PAIgM及 PAC3陽(yáng)性率達(dá) 100%。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗(yàn) 血小板壽命測(cè)定 原理 利用阿司匹林可使血小板花生四烯酸（ AA）代謝受阻，代謝產(chǎn)物丙二醛（ MDA）和血栓烷 B2（ TXB2）生成減少，而新生血小板不受抑制， MDA和 TXB2含量正常的原理，測(cè)量病人服用阿司匹林后血小板 MDA和 TXB2生成量恢復(fù)曲線來(lái)推算血小板的生存時(shí)間。 學(xué)習(xí)要點(diǎn) 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗(yàn) 第三節(jié) 血液凝固及檢驗(yàn) 一、基本理論 ? 14個(gè)： 12個(gè)經(jīng)典凝血因子 激肽釋放酶原 +高分子量激肽原 ? 特殊：因子 Ⅳ 為鈣離子（ Ca2+） ,其余均為蛋白質(zhì) 除因子 Ⅲ 即組織因子外，其余均存在于新鮮血漿中 依賴(lài)維生素 K的凝血因子 ：因子 Ⅱ 、 Ⅶ 、 Ⅸ 和 Ⅹ 接觸凝血因子 ：因子 Ⅻ 、 Ⅺ 、激肽釋放酶原及高分子量激肽原。 （ 2）因子 Ⅶ 的激活 當(dāng) TF結(jié)合到因子 Ⅶ 后，因子 Ⅶ 的構(gòu)型發(fā)生改變隨之被凝血酶、 Xa激活為 Ⅶa 。 ② 因子 V的激活：在少量凝血酶的作用下，因子 V被激活為 Va。 二、凝血機(jī)制 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗(yàn) （ 2）凝血酶的生成 在凝血活酶的作用下，凝血酶原被水解釋放出凝血酶原片段 1和 2（ F1+2），變成凝血酶（因子 Ⅱa ）。這種聚合物很不穩(wěn)定，可溶于 5mol/L（ 30%）尿素或 1%單氯（碘）醋酸溶淮中（它們能解開(kāi)氫鍵），故稱(chēng)為可溶性纖維蛋白單體聚合物或可溶性纖維蛋白。 二、凝血機(jī)制 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗(yàn) 。 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗(yàn) 凝血因子實(shí)驗(yàn)室檢查 APTT 操作 （一）血凝儀法 1．預(yù)溫活化 按儀器操作方法，取正常人混合血漿 APTT試劑 ， 37℃準(zhǔn)確孵育 3min，其間輕輕搖動(dòng)數(shù)次。 2．加鈣計(jì)時(shí) 加入預(yù)溫的 25mmol/L CaCl2，混勻，并立即開(kāi)動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，置水浴中不斷振搖。 3．取待測(cè)血漿重復(fù) 1～ 2的操作步驟，測(cè)定待測(cè)血漿APTT秒數(shù)，一般應(yīng)重復(fù) 2～ 3次測(cè)定取平均值。 ) s， 范圍為 32～ 43s。 3． APTT測(cè)定因所用的激活劑不同，以及部分凝血活酶來(lái)源及制備的不同，均可影響測(cè)定結(jié)果。但 APTT對(duì)診斷血栓性疾?。?thrombotic disease）和血栓前狀態(tài)（ prethrombotic state）缺乏敏感性，也無(wú)特異性，臨床價(jià)值有限。② vWD， Ⅰ 型和 Ⅲ 型患者 APTT可顯著延長(zhǎng)，但不少 Ⅱ 型患者 APTT并不延長(zhǎng)。 2． APTT縮短 見(jiàn)于血栓前狀態(tài)及血栓性疾病、 DIC早期（動(dòng)態(tài)觀察 APTT變化有助于 DIC的診斷）。 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗(yàn) 簡(jiǎn)易凝血活酶生成試驗(yàn) ， STGT 原理 用受檢者稀釋全血作為本試驗(yàn)中所需的全部凝血因子的來(lái)源，自身紅細(xì)胞溶解產(chǎn)物即紅細(xì)胞素代替PF3，按一定時(shí)間加入正?；|(zhì)血漿（提供凝血酶原和纖維蛋白原），測(cè)定基質(zhì)血漿的凝固時(shí)間，以檢查內(nèi)源凝血系統(tǒng)凝血活酶生成有無(wú)障礙。同時(shí)放一竹簽以挑除形成的微量纖維蛋白絲。每隔 2min重復(fù)以上步驟 1次，共 6次。 注意事項(xiàng) 1．等滲化的血液不宜放置過(guò)久。 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗(yàn) 操作 1．取小試管 3支，分別加入正常吸附血漿、正常血清、正常新鮮血漿各 。 注意事項(xiàng) 1．吸附血漿制備時(shí)以 。將測(cè)得的結(jié)果與正常人新鮮混合血漿作比較，分別計(jì)算受檢血漿中所含因子 II： C、 V： C、VII： C、 X： C相當(dāng)于正常人的百分率。 4．受檢血漿用生理鹽水作 1： 20稀釋后，按上述操作取得凝固時(shí)間，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程，得出相當(dāng)于正常人因子活性的百分比，將該值再乘以 2，即為受檢血漿凝血因子活性的水平相當(dāng)于正常人的百分率（ %）。 % FX： C： %177。 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗(yàn) 血漿因子 II、 V、 VII、 X促凝活性測(cè)定 臨床意義 1．活性增高 主要見(jiàn)于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。 第十三章