【正文】 過玻珠柱前后的血液，作血小板計數(shù)。通過計數(shù)接觸前、后的血中血小板數(shù)，即可計算出血小板粘附率。 3．細胞器內(nèi)含物結(jié)構(gòu) 主要致密顆粒和 α 顆粒、溶酶體組成。 ? 電子顯微鏡：血小板結(jié)構(gòu)由外向內(nèi)可分為表面結(jié)構(gòu)、溶膠質(zhì)層結(jié)構(gòu)和細胞器內(nèi)含物三層。 ? 血小板壽命： 7～ 10天。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗 ? 了解血小板的超微結(jié)構(gòu)，在此基礎(chǔ)上理解血小板的止血功能。 樣品 6酮 PGF1α 濃度（ pg/ml） =測定值 10。以 OPD過氧化氫為基質(zhì)顯色 20min，加入 3mol/L硫酸中止反應(yīng)，在酶標檢測儀上測定 490nm處的吸光度值 A。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗 血漿 6酮 前列腺素 F1α 檢測 操作步驟 順利采取靜脈血后與 5%EDTANa2進行 9： 1抗凝混勻， 3000r/min離心 20min分離出血漿。冷凍的樣品復溶時應(yīng)在 37℃水浴中進行，室溫中緩慢解凍則可導致 TM沉淀。 正常情況下 ， 血漿中 TM的含量很低 ， 但當血管內(nèi)皮受損后 ， 血漿中的 TM含量明顯升高且與內(nèi)皮的損傷程度相關(guān) 。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗 凝血酶調(diào)節(jié)蛋白， TM 原理將抗人凝血酶調(diào)節(jié)蛋白（ Thrombomdulin,TM）單克隆抗體包被于聚苯乙烯放免小杯中，樣本中的 TM結(jié)合于包被的放免小杯上，加入 125I抗人 TM單抗，根據(jù)結(jié)合的 125I放射性強度計算出樣品中 TM的含量。 除本方法外，也可以采用膠乳增強免疫比濁法。 ? 室溫放置 10min后在酶標儀上測定 492nm處的吸光度值。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗 二、血管壁（內(nèi)皮）檢驗 vWF:Ag 操作 ? 單抗以 （ ）稀釋成10μ g/ml加入反應(yīng)板中，每孔 ，置于濕盒中 4℃過夜。 ? %Tween— 20， （ ，Tween— PBS）洗 3次后加入用 %BSA— PBS稀釋的待測血漿或培養(yǎng)液上清，每孔 ， 37℃ 溫育 2小時。 ? 繪制標準曲線 正?；旌涎獫{以 %BSA— PBA按 1： 1： 50、 1： 100、 1： 200、 1： 500、 1： 1000六種濃度稀釋，與待測樣品在相同條件下測定。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗 vWF:Ag 參考區(qū)間 vWF:Ag 應(yīng)用評價 血管性血友病因子抗原測定主要用于血管性血友病的診斷和鑒別診斷 見于血管性血友?。?vWD），是診斷 vWD及其分型的重要依據(jù) 見于血栓性疾病，如急性冠脈綜合征（ ASC）、心肌梗死、 腦血管病變、妊娠高血壓綜合征、腎小球疾病等，同時也見 于劇烈運動后，腎上腺素受體被興奮等。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗 TM 操作 人 TM標準品用緩沖液 A做倍比稀釋， TM的濃度分別為 500， 250， 125， ， ， , 0ng/ml,以人 TM濃度為橫坐標，以 cpm為縱坐標繪制校正曲線。 目前認為 ， TM:Ag的檢測是了解血管內(nèi)皮損傷最好的指標 。 2. 若樣本中的 TM含量超過校正曲線范圍應(yīng)適量稀釋后再次測定 。 6酮 PGF1α BSA作一定稀釋后包被于酶標反應(yīng)板，再用 %明膠封閉。 第十三章 第一節(jié) 血管壁的止血作用及檢驗 血漿 6酮 前列腺素 F1α 檢測 參考區(qū)間 標準曲線與計算 式中 :B為測定管； B0為不加樣品管，最大結(jié)合率管；B/B0為結(jié)合率。 參考范圍 ～ pg/ml。 ? 理解并掌握血小板止血功能實驗室檢查的臨床應(yīng)用及評價。 ? 主要功能：促進止血和加速凝血，在止血、傷口愈合、炎癥反應(yīng)、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理過程中起重要作用。 1．血小板表面結(jié)構(gòu) 由血小板膜、細胞外衣和開放管道系統(tǒng)（ open canalicular system， OCS）組成。 血小板超微結(jié)構(gòu) — 功能基礎(chǔ) 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 花生四烯酸是膜磷脂代謝產(chǎn)物，其代謝途徑是血小板發(fā)揮聚集止血功能的主要代謝基礎(chǔ)。該試驗為判斷血小板粘附能力的常用指標。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 血小板粘附率（ %） = 100% 參考值： % 177。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 PAdT 參考區(qū)間 粘附前血小板數(shù) 粘附后血小板數(shù) 粘附前血小板數(shù) PAdT 應(yīng)用評價 血小板粘附率減低：見于先天性和繼發(fā)性血小板功能異常（以后者多見），如血管性血友病、巨大血小板綜合征、愛 唐綜合征、低（無）纖維蛋白血癥、異常纖維蛋白血癥、急性白血病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增殖性疾病、肝硬化、尿毒癥、服用抗血小板藥物等。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 血小板聚集實驗 PAgT 原理 當一定數(shù)量的誘導劑存在時血小板即發(fā)生聚集。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 PAgT 操作 1. 用硅化注射器從肘靜脈取血 ，注入含 109mmol/L枸櫞酸鈉的硅化或塑料離心管中，充分混勻； 2. 以 1000r/min室溫下離心 10min，分離 PRP，小心取出上層血漿，計數(shù)血小板并調(diào)至（ 100～ 200） 109/L； 將上述剩余血液以 3000r/min離心 20min，分離 PPP（上層較透明的液體），血小板計數(shù)一般要求低于 20 109/L； 3. 按照不同的聚集儀的要求，吸取所需的 PRP和 PPP置于比色杯中，分別調(diào)整好透光度為 10和 0； 4. 打開記錄儀走紙開關(guān)，描記 10s的 PRP基線，隨后將適量誘聚劑（視儀器要求而定，一般為反應(yīng)體系總量的 1/10左右）加入 PRP中，并開始攪拌，記錄濁度改變曲線，測定時間一般為 6～ 10min。 ? 血小板聚集率增高血液高凝狀態(tài)和（或）血栓形成性疾病，如動脈粥樣硬化性心臟病、糖尿病、腎小球腎炎、腎病綜合征、心臟瓣膜置換術(shù)后、深靜脈血栓形成、高脂飲食、口服避孕藥和吸煙等。 采血前一天應(yīng)避免使用牛奶、豆?jié){等高脂肪食物以免影響懸液透光度。此外，誘聚劑的種類和濃度對血小板聚集結(jié)果都有影響，臨床判斷是應(yīng)注明所用誘聚劑的種類和濃度。通過測定各組標本的凝固時間，比較各組時差，了解受檢者 PF3是否有缺陷。第 3組、第 4組分別為患者和正常人（作為對照管），患者 PF3有缺陷或內(nèi)源凝血因子有缺陷時（如血友?。?，第 3組凝固時間比第 4組長。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 血小板膜糖蛋白測定 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 ? 血小板膜糖蛋白（ Glucoprotein， GP）是血小板功能和血小板與其他活性物質(zhì)作用的基礎(chǔ)，一些糖蛋白如 GP Ia、GP Ib、 GP IIb、 GP IIIa等已被確定為血小板特異抗原。 主要血小板膜糖蛋白及功能 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 名 稱 CD名稱 分子量 功能特性 GP Ia CD49b 150 000 與 GP IIa形成復合物，是膠原的受體 GP Ib CD42c 170 000 與 GP IX、 GP V形成復合物，是 vWF的受體，參與血小板粘附反應(yīng)，缺乏或減少時血小板粘附功能減低，見于巨大血小板綜合征 GP Ic CD49f 140 000 與 GP II形成復合物，是層素（ laminin）的受體 GP IIa CD29 138 000 與 GP Ia和 Ic形成復合物，是膠原和層素的受體 GP IIb和IIIa CD41a IIb 145 000 IIIa 90 000 GP IIb與 IIIa形成復合物，是纖維蛋白原（ Fg）的受體，參與血小板聚集反應(yīng)，缺乏或減少時血小板聚集功能減低，見于血小板無力癥 GP IV CD36 88 000 是 TSP的受體 GP V 82 000 和 GP Ib、 GP IX構(gòu)成 vWF受體 GP IbVIX GP IX CD42a 17 000 和 GP Ib、 GP V形成復合物，構(gòu)成 vWF受體 Pselectin 140 000 即 α顆粒膜糖蛋白（ GMP140）。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 血小板相關(guān)抗體測定 的應(yīng)用評價 ?特發(fā)性血小板減少性紫癜 （ ITP） ： 90%以上的病人 PAIgG增加 ， 同時測定 PAIgA、 PAIgM及 PAC3陽性率達 100%。 第十三章 第二節(jié) 血小板止血作用及檢驗 血小板壽命測定 原理 利用阿司匹林可使血小板花生四烯酸（ AA）代謝受阻，代謝產(chǎn)物丙二醛（ MDA）和血栓烷 B2（ TXB2）生成減少，而新生血小板不受抑制， MDA和 TXB2含量正常的原理，測量病人服用阿司匹林后血小板 MDA和 TXB2生成量恢復曲線來推算血小板的生存時間。 學習要點 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗 第三節(jié) 血液凝固及檢驗 一、基本理論 ? 14個： 12個經(jīng)典凝血因子 激肽釋放酶原 +高分子量激肽原 ? 特殊：因子 Ⅳ 為鈣離子（ Ca2+） ,其余均為蛋白質(zhì) 除因子 Ⅲ 即組織因子外，其余均存在于新鮮血漿中 依賴維生素 K的凝血因子 ：因子 Ⅱ 、 Ⅶ 、 Ⅸ 和 Ⅹ 接觸凝血因子 ：因子 Ⅻ 、 Ⅺ 、激肽釋放酶原及高分子量激肽原。 （ 2）因子 Ⅶ 的激活 當 TF結(jié)合到因子 Ⅶ 后，因子 Ⅶ 的構(gòu)型發(fā)生改變隨之被凝血酶、 Xa激活為 Ⅶa 。 ② 因子 V的激活：在少量凝血酶的作用下，因子 V被激活為 Va。 二、凝血機制 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗 （ 2）凝血酶的生成 在凝血活酶的作用下，凝血酶原被水解釋放出凝血酶原片段 1和 2（ F1+2），變成凝血酶（因子 Ⅱa ）。這種聚合物很不穩(wěn)定，可溶于 5mol/L（ 30%）尿素或 1%單氯（碘）醋酸溶淮中（它們能解開氫鍵），故稱為可溶性纖維蛋白單體聚合物或可溶性纖維蛋白。 二、凝血機制 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗 。 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗 凝血因子實驗室檢查 APTT 操作 （一）血凝儀法 1．預溫活化 按儀器操作方法，取正常人混合血漿 APTT試劑 ， 37℃準確孵育 3min，其間輕輕搖動數(shù)次。 2．加鈣計時 加入預溫的 25mmol/L CaCl2，混勻，并立即開動秒表計時，置水浴中不斷振搖。 3．取待測血漿重復 1～ 2的操作步驟，測定待測血漿APTT秒數(shù)，一般應(yīng)重復 2～ 3次測定取平均值。 ) s， 范圍為 32～ 43s。 3． APTT測定因所用的激活劑不同，以及部分凝血活酶來源及制備的不同，均可影響測定結(jié)果。但 APTT對診斷血栓性疾?。?thrombotic disease）和血栓前狀態(tài)（ prethrombotic state）缺乏敏感性，也無特異性，臨床價值有限。② vWD， Ⅰ 型和 Ⅲ 型患者 APTT可顯著延長，但不少 Ⅱ 型患者 APTT并不延長。 2． APTT縮短 見于血栓前狀態(tài)及血栓性疾病、 DIC早期（動態(tài)觀察 APTT變化有助于 DIC的診斷）。 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗 簡易凝血活酶生成試驗 ， STGT 原理 用受檢者稀釋全血作為本試驗中所需的全部凝血因子的來源，自身紅細胞溶解產(chǎn)物即紅細胞素代替PF3，按一定時間加入正常基質(zhì)血漿（提供凝血酶原和纖維蛋白原），測定基質(zhì)血漿的凝固時間，以檢查內(nèi)源凝血系統(tǒng)凝血活酶生成有無障礙。同時放一竹簽以挑除形成的微量纖維蛋白絲。每隔 2min重復以上步驟 1次，共 6次。 注意事項 1．等滲化的血液不宜放置過久。 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗 操作 1．取小試管 3支，分別加入正常吸附血漿、正常血清、正常新鮮血漿各 。 注意事項 1．吸附血漿制備時以 。將測得的結(jié)果與正常人新鮮混合血漿作比較，分別計算受檢血漿中所含因子 II： C、 V： C、VII： C、 X： C相當于正常人的百分率。 4．受檢血漿用生理鹽水作 1： 20稀釋后，按上述操作取得凝固時間，通過標準曲線或回歸方程，得出相當于正常人因子活性的百分比，將該值再乘以 2，即為受檢血漿凝血因子活性的水平相當于正常人的百分率（ %）。 % FX： C： %177。 第十三章 第三節(jié) 血液凝固及檢驗 血漿因子 II、 V、 VII、 X促凝活性測定 臨床意義 1．活性增高 主要見于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。 第十三章