第十章蛋白質(zhì)和氨基酸的測定第一節(jié)概述-wenkub
2022-10-22 11:38:58 本頁面
【正文】 蛋白質(zhì)的測定方法分兩大類： 一類是利用蛋白質(zhì)的共性即含氮量、肽鍵和折射率等測定蛋白質(zhì)含量； 另一類是利用蛋白質(zhì)中的氨基酸殘基、酸性和堿性基因以及芳香基團等測定蛋白質(zhì)含量。這里也包括非蛋白的氮，所以只能稱為粗蛋白的含量（但馬鈴薯等非蛋白氮多的要單測）。 主要由 C、 H、 O、 N、 S五種元素組成 。 某些蛋白質(zhì)中還含有微量的 P、 Cu、 Fe、 I 等 。 蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎 ， 人體 11%~13%總熱量來自蛋白質(zhì) 。 具體測定方法： 凱氏定氮法 —— 最常用的 ， 國內(nèi)外應用普遍 。 第二節(jié) 蛋白質(zhì)的定性測定 一 、 蛋白質(zhì)的一般顯色反應 電泳或紙層析之后用一些染料與蛋白質(zhì)結合并變色 。 ?一些蛋白質(zhì)的含氮量 一般為 15%~ %，有的上下浮動 可以測出總氮 N 一、 凱氏定氮法 由 Kieldhl于 1833年提出，現(xiàn)發(fā)展為常量、微量、自動定氮儀法，半微量法及改良凱氏法。 ① 用 H3BO3吸收后再以標準 HCl溶液滴定 。也可加入硫酸鈉，氯化鉀等提 高沸點，但效果不如硫酸鉀。 3 加氧化劑 如雙氧水、次氯酸鉀等加速有機 物氧化速度。 指示劑 紅色 綠色 紅色 （酸） （堿） （酸） 2 用過量的 H2SO4 或 HCl 標準溶液吸收，再用 NaOH 標準溶液滴定過剩的酸液，用甲基紅指示劑。 方法 溶解 g HgI2 + KI 10 g于適量少許水，后加水稀釋至 50 ml,靜置后，取其澄清液，棄去沉淀，儲存于棕色瓶中。 ③ 消化時應注意不時轉(zhuǎn)動凱氏燒瓶，以便利用冷凝酸液將附在瓶壁上的固體殘渣洗下，并促進其消化完全。 ⑦ — 般消化至呈透明后，繼續(xù)消化 30分鐘即可，但對于含有特別難以氨化的氮化合物的樣品．如含賴氨酸、組氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等時，需適當延長消化時間。 氫氧化銅在 70～ 90℃ 時發(fā)黑。 102 102 三、 自動凱氏定氮法 原理及適用范圍同前 特點： （ 1）消化裝置用優(yōu)質(zhì)玻璃制成的凱氏消化瓶，紅外線加熱的消化爐。 北京福德泰和科技有限公司 產(chǎn)品名稱： 凱氏定氮儀 二、雙縮脲法 傳統(tǒng)的凱氏定氮法應用范圍廣 ， 靈敏度高 、 準確 ， 不要大儀器 ， 但費時間 ， 有環(huán)境污染 。 （ 縮二脲反應 ） 蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵 — CO— NH— 與雙縮脲結構相似 。 本法亦適用于豆類 、 油料 、 米谷等作物種子及肉類等樣品測定 。 3．主要儀器： ① 紫外分光光度計 ② 離心機（ 3000 — 5000 r/min） 4．操作：用凱氏法測定作標樣做標準曲線 第五節(jié) 氨基酸的定性測定 ? 利用各種顯色反應（ 170～ 174
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