elisa的基本原理和質(zhì)量控制-wenkub
2023-05-21 13:07:07 本頁面
【正文】 % 10% PPV=患病率 靈敏度 /[患病率 靈敏度 +(1患病率 ) (1特異性 )] 100% 解決方法 試劑 1 試劑 2 試劑 1+2 敏感度 特異度 % % % % (串聯(lián) ) 患病率 PPV PPV PPV % % % % % % % % % % % % ELISA準確度 的影響因素 —實驗過程 ? 實驗操作人員的教育背景和培訓(xùn) ? 標本的條件 ? 試驗過程中的對照 ? 試劑 ? 設(shè)備 ? 結(jié)果的解釋 ? 結(jié)果的抄寫和報告 ELISA實驗過程中涉及的質(zhì)量控制 —儀器 ? 移液器， ELISA的加樣量小，選擇量程合適的加樣槍，其準確性直接影響試驗結(jié)果。 ELISA的質(zhì)量控制 及注意事項 ELISA質(zhì)量控制的目的 ?獲得正確的檢驗結(jié)果。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液，一般是 吐溫 20（ 聚山梨酯 ） 。產(chǎn)物為黃色的對硝基酚，在 405nm有吸收峰。 ? 底物： 不同種類的酶要求使用不同的底物 。 ? 吸附能力 ? 通透性 ? 均一性 ?酶標記物：酶與抗體的共價結(jié)合首先不影響酶及抗體的活性、不產(chǎn)生干擾物質(zhì)、不產(chǎn)生非特異反應(yīng)。 捕獲法 ELISA ?捕獲法 ELISA（ Capture ELISA） ——專門用來檢測 IgM型抗體的方法。 抗原抗體復(fù)合物與酶標的二抗結(jié)合，加入合適的底物在酶的作用下顯色， 顏色的深淺 與 特異性抗體水平 成比例關(guān)系，可進行定性和定量分析。 可以自動化。 ? ELISA的特點： 敏感度和特異度較高，重復(fù)性好。 試劑比較穩(wěn)定，易于保存。 ELISA的基本原理 ? 抗原或抗體在體外結(jié)合到某種固相載體表面后，仍然能保持其免疫學(xué)活性而能相互特異性 結(jié)合。 間接法 ELISA ?間接法 ELISA（ Indirect ELISA） ——將特異性抗原包被于固相載體表面，與標本中相應(yīng)特異性抗體結(jié)合，洗滌后再加入酶標的抗人 IgG或 IgM抗體與之結(jié)合，洗滌后加入底物顯色。將抗人 IgM抗體包被于固相載體表面，與標本中所有人IgM抗體結(jié)合，洗滌后加入特異性抗原與相應(yīng)的特異性 IgM抗體結(jié)合，洗滌后再加入酶
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