熒光顯微鏡及激光掃描共聚焦顯微鏡使用-wenkub
2023-04-29 20:46:15 本頁面
【正文】 圖象。 五、注意事項 六、作業(yè)與思考題： 的實驗現(xiàn)象。但當所觀察的熒光標本稍厚時，普通熒光顯微鏡不僅接收焦平面上的光量，而且來自焦平面上方或下方的散射熒光也被物鏡接收，這些來自焦平面以外的熒光使觀察到的圖像反差和分辨率大大降低（即焦平面以外的熒光結(jié)構(gòu)模糊、發(fā)虛，原因是大多數(shù)生物學(xué)標本是層次區(qū)別的重疊結(jié)構(gòu)）。兩者的幾何尺寸一致，約 100200nm； 相對于焦平面上的光點，兩者是共軛的，即光點通過一系列的透鏡，最終可同時聚焦于照明針孔和探測針孔。由于焦點處的光強遠大于非焦點處的光強，而且非焦平面光被針孔濾去，因此共聚焦系統(tǒng)的景深近似為零，沿 Z軸方向的掃描可以實現(xiàn)光學(xué)斷層掃描，形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學(xué)切片。 3. 滴加 DAPI溶液 100 ul室溫孵育 30 min。 五、注意事項 注意染色時間 注意避光 六、作業(yè)與思考題： 試述激光掃描共聚焦顯微鏡成像基本原理，并描述實驗中所觀察的現(xiàn)象 思考題： 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察到的圖象為什么比普通的熒光顯微鏡的清晰度、層次感要強許多？ 。 5. 滴一小滴甘油 /PBS封片劑 (， PBS:甘油 =1:9， v/v)封片 。 ?觀察方式：以熒光為主 ?光源：激光（紫外、可見光、近紅外） ?照明方式：點照明、逐點
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