熒光顯微鏡及激光掃描共聚焦顯微鏡使用(留存版)
【正文】 ?輸出：實(shí)時(shí)觀測 ,數(shù)字化圖像，可以進(jìn)行圖像處理和定量分析 ?多重染色樣品的觀察 LSCM的基本特點(diǎn) 3. 共聚焦掃描顯微鏡在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用 細(xì)胞結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)（如受體、抗原、抗體、酶、細(xì)胞 骨架蛋白等基因表達(dá)產(chǎn)物）、 DNA、 RNA等 細(xì)胞膜流動(dòng)性（熒光光漂白恢復(fù)技術(shù)） 細(xì)胞內(nèi)氧自由基活性 細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化 膜電位 三、試劑與器材 青蛙 冷丙酮、 DAPI 、甘油 /PBS封片劑、濾紙、吸管、載玻片、蓋玻片 激光掃描共聚焦顯微鏡 四、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 取涂有細(xì)胞的載玻片（細(xì)胞涂在中間），冷丙酮 40C固定10 min。由于焦點(diǎn)處的光強(qiáng)遠(yuǎn)大于非焦點(diǎn)處的光強(qiáng)，而且非焦平面光被針孔濾去，因此共聚焦系統(tǒng)的景深近似為零，沿 Z軸方向的掃描可以實(shí)現(xiàn)光學(xué)斷層掃描，形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學(xué)切片。 熒光顯微鏡技術(shù)在生命科學(xué)研究中的應(yīng)用 二、暗視野顯微鏡的成像原理 通過特殊的暗視野聚光器，使照明光線改變途徑，不直接進(jìn)入物鏡，而是傾斜地照射到樣品上，由樣品表面的繞射光線入射到物鏡內(nèi)，產(chǎn)生樣品的衍射圖象。 3. 暗視野顯微鏡要在光線盡量暗的環(huán)境下觀察。 2. PBS漂洗 2次，每次 3 min。 Confocal Principle 每一幅焦平面圖像實(shí)際上是標(biāo)
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