【正文】 我所知 ，除文中 特別加以標注和致謝的地方外，不包含其他人或組織已經發(fā)表或公布過 的研究成果，也不包含我為獲得 安陽工學院 及其它教育機構的學位或學歷而使用過的材料。對本研究提供 過 幫助和做出過貢獻 的個人 或 集體，均已在文中作了明確的說明并表示 了 謝意。）能力的測定 .................................................. 16 結果與討論 .................................................................................................................... 17 松葉粗提物清除超氧陰離子自由基（ O2用最佳提取工藝對原料進行多級提取，確定提取級數(shù)為三級。 關鍵詞： 松葉 超聲提取 色素 抗氧化性 II Study on Ultrasonic Extraction of Pigment in Matsuba and Its Crude Extract Antioxidant Activity Abstract： Ultrasonic extraction of the pigment extract of pine and its free radical scavenging action done related research. Using the single factor experiment method, the effects of alcohol concentration, extraction time, ratio of material to liquid, temperature on the effects of extraction, according to the result of single factor orthogonal test design, determine the optimal ultrasonic extraction process of leaf pigment: solvent was 95% ethanol, extracting temperature was 40 ℃ , extraction time 20min, ratio of material to liquid 1:30. Multistage extraction of raw materials with the best extraction process, determine the extraction series three. Under these conditions, the extraction rate of the pigment extracted from pine needles up to % ultrasonic method. Determination of capacity, crude extract to scavenge superoxide radicals by the adjacent benzene three phenolic oxidation conclusion: pine needle extract has a scavenging effect on the superoxide free radical, scavenging rate with the concentration increasing, and decreases with the increase of time. The two adjacent phenanthridine method for the determination of crude extract of hydroxyl free radical scavenging ability, conclusion: leaf extracts on hydroxyl free radical scavenging effect increases with increase of concentration. Key words: pine。目前常用的食品色素包括兩 類：天然色素與人工合成色素。自 1856 年英國人Sir William Henry Perkins[2]發(fā)明了第一個合成色素苯胺紫之后，人工合成色素迅猛發(fā)展，很快就取代了天然色素，在食品、醫(yī) 藥等行業(yè)得到普遍應用。在上世紀五十年代曾用于食品著色的 100 余種合成色 素中，有 25 種以上具有致癌毒性，至今禁用的已有約 60 余種。 2 第一章 緒論 研究的背景和意義 隨著人類回歸自然意識的日益增強以及對合成色素危害 性認識的逐步加深，天然色素的優(yōu)點越來越受到重視。 天然色素的開發(fā)和利用已成為當今社會色素的發(fā)展趨勢。 因此，在以上背景下提取松樹的色素和研究其性質具有重要意義。礦物色素大多對人體有害，己不再用于食品的著色；植物色素是天然色素應用最多的一類，其使用非常廣泛，已被廣泛應用于飲料、糖果、糕點、酒類等食品和醫(yī)療保健品、化妝品的著色 ； 動物、微生物色素的應用較少。 天然色素的著色色調比較自然，更接近于天然物質的顏色，有的品種還具有特殊的芳 3 香氣味。 （ 2）天然色素的提取 天然色素的獲得和生產主要有 3 條途徑：一是直接提??；二是人工合成；三是利用生物技術生產。其基本原理是利用各種溶劑萃取天然色素原料，使色素溶解而進入溶液，這是一種固 液萃取過程。過程包括原料預處理、破碎、浸提、過濾、濃縮、冷凍干燥等工 藝。同時當大量的超聲波作用于提 取介質，振動處于稀釋狀態(tài)時，介質被撕裂成許多小空穴，這些小空穴瞬時閉合，閉合時產生高達幾千大氣壓的瞬時壓力，即空化現(xiàn)象 [9]。 李云雁 [10]運用超聲波技術從板栗殼中提取棕色素 ， 得到優(yōu)化的工藝參數(shù)為 :提取溫度為 70℃ 、超聲提取 2 次、每次 1h，在此條件下的提取率為 64mg/g，遠高于常規(guī)法 。 ○ 3 微波萃取法 微波是一種頻率在 300MHz 至 300GHz 之間的電磁波，它具有波動性、高頻性、熱特性和非熱特性四大基本特性。根據(jù)超臨界流體對溶質有很強的溶解能力，且在溫度和壓力變化時，流體的密度、粘度和擴散系數(shù)隨之變化，溶質的親和力也隨之變化，從而使不同性質的溶質被分段萃取出來，達到萃取、分離的目的。這種方法不受自然條件的限制，能在短期內生產大量的色素。通過對比各種性質的藥材，分別進行冷浸提取法、滲漉提取法、回流提取法和破碎提取法所得提取物收率和薄層色譜對比試驗。 ○ 1 酶法精制 ： 近年來隨著科學技術的發(fā)展，可以利用生物體合成的酶經物理化學方法分離提取酶制品，可在常溫中性條件下，利用酶的催化作用，使天然色素粗品中的雜質除去。在中藥有效成分分離提取的應用中，呈現(xiàn)出良好的發(fā)展勢頭。 ○ 4 凝膠層析法精制 ： 凝膠層析的應用始于 20 世紀 50 年代初期， 60 年代得到了迅速的發(fā)展。凝膠層析不僅適用于分析而且適用 于大規(guī)模的設備。 ○ 6 結晶法精制 ： 用結晶和重結晶方法將天然色素進行純化的過程中，由于只有同類物質才能排列成晶體，所以這種方法有良好的選擇性，結晶物一般純度較高，工藝過程成本低，設備簡單，操作方便。而中國 1996 年合成色素的產量約為 800t，而食用天然色素的產量約達 10000 萬 t（ 其中焦糖色素 7000t） ，目前在中國生產食用天然色素的工廠百余家， 1998年產量已達 25000 萬 t。近年來合成色素的增長量不大，而食用天然色素以約每年 4%的速度遞增。還有用黑芝麻為原料提取的黑芝麻色素、用烏飯素提取的蘭黑色素和從西雙版納地區(qū)找到的一種染飯花提取的紅色素，以及楮樹果殼提取的棕色素，從沙棘中提取的沙棘黃色素，這些色素對光、熱、 pH 的穩(wěn)定性在現(xiàn)有色素品種中都是出類拔萃的。 7 天然食用色素可以應用于各種食品之中，如飲料、糖果、乳制品、糕點、魚、畜肉和罐頭制品、加工蔬菜、水果和調味料等。但是，盡管我國天然色素的發(fā)展取得了喜人的進展，與國外相比，仍然存在著不足之處，如純化精制工藝相對粗糙，產品質量差，純度低，有異味和溶劑殘留，成本較高等問題。其提取液對食品腐敗菌有明顯的抑制作用。松屬植物約 80 余種，我國約有 22 種 10 變種 [18]。萜類是存在于植物界的一類化合物，其生物活性是多方面的，并且是某些中藥的主要有效成分。 松葉中含有豐富的粗蛋白、氨基酸。總氨基酸在原藥中含量為 %。國外學者從新鮮的馬尾松葉的石油醚提取物中分得 β胡蘿卜素、維生素 E、植物甾醇。 （ 3）松葉的作用 一般來說，松樹樹干利用完松葉也就當作廢物給遺棄 ，殊不知松葉具有很高的營養(yǎng)價值。將松葉配制成健膚靈軟膏， 對口腔潰瘍、牙齦紅腫、皮膚 皸裂 及凍瘡，都有很好療效。 本課題研究的目的和意義 我國松樹資源豐富，品種眾多。利用超聲波輔助提取松葉中的色素，研究提取過程中各種因素如提取溫度、提取劑濃度、提取料液比、提取時間對其提取效果的影響。 無水乙醇分析純 ，實驗用水均為去離子水。然后加入一定體積的乙醇溶液，在一定溫度下超聲提取一定時間。 松葉 清洗 烘干 粉碎 超聲 過濾 干燥 粗產品 減壓濃縮 11 正交試驗 根據(jù)單因素的實驗結果，設計正交試驗，找出提取雪松松葉 色素 的優(yōu)化組合。 浸提液體積吸光度相對含量 ?? （ 21） 將收集的多級提取液混合并減壓蒸餾得到膏狀物，烘干后稱重并計算產率。結果如圖 所示 12 0102030405060700% 20% 40% 60% 80% 100%乙醇濃度相對含量 圖 不同 乙醇濃度對 雪松松葉 色素 提取效果的影響 由圖 可知在乙醇濃度 90%以前提取效果隨著乙 醇濃度的升高而升高，乙醇濃度達到 90%的時候提取效果最好，而大于 90%的時候又有下降的趨勢。而實驗過程證溫度到達 50℃ 以后提取液顏色逐漸加深，這是由于超聲的空化作用會在局部產生高溫高壓 [21]， 若提取環(huán)境的溫度又較高， 會加劇 色 素的分解， 使 色 素中一些活性成分被破壞而導致提取率不再增加反而下降。 （ 4） 料液比對提取效果的影響 取 松葉樣品， 在 乙醇濃度 70%、溫 度 50℃ 、時間 30min，用不同料液比（ 1:1:1 1: 1:2 1: 1:35）進行單因素試驗。 提取效果影響因素的順序 ： 為 乙醇濃度 溫度 時間 料液比 ， 方差分析表 表明濃度和溫度對提取條件的影響具有顯著性，是影響提取效果的主要因素， 優(yōu) 化 組合為： 乙醇 濃度 95%，溫度 40℃ ，時間 20min，料液比 1:30。派尼化學試劑廠 ） 能力的測定 清除超氧陰離子自由基能力的測定，采用鄰苯三酚氧化法 [23]。 計算公式： %10000 ??? A AA S清除率 (31) 松葉粗提物 清除羥基自由基（ OH如果反應體系中同 17 時存在羥自由基清除劑，則 Fenton 反應產生的羥自由基將被此清除劑全部或部分清除，鄰二氮菲 Fe2+絡合物受到的破壞將會隨之減少。 計算公式： %100???? 損傷空白 損傷加樣清除率 AA AA （ 32） 結果與討論 松葉粗提物 清除超氧陰離子自由基 （ O2因此可以選擇 322nm 為