【正文】 ： 院科教部從我院申報國家自然科學基金項目中挑選了一份嚴格按照 報告正文撰寫提綱要求撰寫，并在撰寫的整體布局、寫作方法上比較適宜的申請書作為樣板申請書，提供給其他申請人在撰寫申請書時參考。 注：考慮到本項目也將申請國家自然科學基金，從技術保密方面考慮，涉及核心技術和關鍵問題之處將以“ XXXXXXX”代替。 報告正文 （一）立項依據與研究內容 1立項依據 肝纖維化是嚴重威脅人類健康的重要疾病之一，迄今沒有滿意的治療方法。目前國內外絕大多數學者認為，肝星狀細胞（ hepatic stellate cell， HSC）激活是肝纖維化的關鍵，抑制 HSC的激活對肝纖維化的防治有重要 價值 [1]。 粉防己堿 （ tetrandrine，又名漢防己甲素）是中藥粉防己（ Stephania tetrandra S Moore）的主要有效生物堿成分，具有廣泛的藥理作用?？垢卫w維化是 Tet 的重要應用領域 之一 。我們研究室在過去的十幾年中，對 Tet 抗肝纖維化作用及機制進行了系統研究，證實 Tet 是抗肝纖維化有效藥物。然而，由于 Tet 的劑量安全范圍較小，以往研究發(fā)現的抗肝纖維化有效劑量與中毒劑量比較接近， 故 成為限制其臨床應用的重要因素。近年國內 Tet 抗肝纖維化研究也由此逐漸走向低谷。 為減少毒副反應，拓展該藥物的臨床應用，我們近四年從降低 Tet 的單藥劑量、聯合用藥及改造藥物毒性基團等方面進行實驗性探索。新近，我們在國內外首次發(fā)現，低濃度 Tet 能上調轉化生長因子 β（ transforming growth factor factor β， TGFβ） 抑制性信號分子 Smad 7表達，調控 TGFβSmad 信號通路，抑制體外培養(yǎng)靜止期 HSC 活化，阻斷TGFβ1促靜止期 HSC 活化效應， Tet 還誘導活化 HSC 活化逆轉。部分最新研究成果已經整理成文發(fā)表在本領域有一定影響力的 SCI 索引源 期刊上 ，并被 SCI 收錄 (收錄號 IDS Number: 963XN )[2]（ 相關文章參 詳見 申請人 簡歷及附件 二、三 ）。這些全新研究成果進一步增強了我們開發(fā)這一傳統中藥的信心。 TGFβ1是目前認識的最重要的促肝纖維化因子。抑制 TGFβ1對 HSC 的作用一直以來均是抗肝纖維化重要著眼點 [3]。 Smad 7 是 HSC TGFβ 信號通路的 最 主要負反饋調節(jié)信號分子 ， 上調 Smad 7 是 抑制 TGFβ 對 HSC 不良生物效應的有措施之一 [4]。在肝纖維化過程中， TGFβ 信號通路 還 與整合素信號通路存在密切聯系。這表現在 三 個方面 ：① XXXXXX。② XXXXXX。③XXXXXXXXX。 綜上所述， XXXXXXX， 如能 XXXXXX， 可 進一步實現 XXXXX 治療。 基于以上研究結果， 我們研究室在國家自然科學基金資助下，過去三 年中 應用化 學方法合成了 RGD 和 M6P，并將 RGD 與 M6P 結合成一新型復合分子 RGDM6P，研究比較了它們 對 HSC 靶向性及在 抑制 其 功能中的作用（ 項目名稱： RGD 修飾細胞生物信息調控分子和綴合基因的功能研究，編號：30170412） 。 我們的研究發(fā)現， RGD 和 RGDM6P 均可抑制 HSC 活化。 RGD在抑制 TGFβ 激活同時，還可阻止 HSC 與 ECM 結合，阻斷整合素信號轉導。研究還發(fā)現 ， M6P 能提高 RGD 作用于 HSC 的靶向性，增加其局部濃度，使RGDM6P 顯示出 較 RGD 更強的抑制作用 [14]。我 們 首次證實，新型復合分子RGDM6P 用于抗肝纖維化治療，無論在對 HSC 靶向的特異性，還是多位點聯合作用方面，都優(yōu)于單一的含 RGD 序列的肽段或 M6P（參見基金結題摘要，相關文章參見申請人簡歷及附件四） 。 RGDM6P 新型復合分子的研制成功及其對 HSC 靶向與抑制功能的發(fā)現，有助于我們去研究更多的 HSC 靶向選擇性高、局部作用強、系統毒性小的新型藥物和 (或 )制劑，從而提高藥物的療效、減輕毒性反應。結合我們對 Tet 藥理作用的分 子機制的研究結果，不難發(fā)現， XXXXXXXX?；谝陨?系列研究基礎 與設想 ，緊跟國內外 在 制劑學方面的進展，我們擬設計XXXXXXXXXXX。 當前，受體調節(jié)藥物靶向（ receptormediated drug targeting） 作為一種新型的給藥系統受到人們的重視 [16]。 XXXXXXXXXXXXXXXXX。 迄今為止，尚未見到 XXXXXXXXXXX。 結合國內外同行的研究報道與我們的研究基礎，不難推斷，XXXXXXXXXXXXXXXXX。 綜上所述，我們擬在 XXXXXXXXXX。本研究 將為 XXXXXXXX 等提供理論與實踐基礎。 XXXXXXXXXX 可以設想， 如能取得預期效果， 經過良好設計的基礎研究后，這一 XXXXXX 應用于臨床 的時間不會太久， 前景廣闊。 參考文獻 1 Friedman SL. Mechanisms of disease: Mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic implications. Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2021。1(2):98105. 2 Chen YW, Li DG, Wu JX, et al. Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells stimulated by transforming growth factorbeta in vitro via upregulation of Smad 7. J Ethnopharmacol 2021。100(3):299305. 3 Breitkopf K, Haas S, Wiercinska E, et al. AntiTGFbeta strategies for the treatment of chronic liver disease. Alcohol Clin Exp Res 2021。29(11 Suppl):121S131S. 4 Dooley S, Hamzavi J, Breitkopf K, et al. Smad7 prevents activation of hepatic stellate cells and liver fibrosis in rats. Gastroenterology 2021。125(1):17891. 5 Ludbrook SB, Barry ST, Delves CJ, et al. The integrin alphavbeta3 is a receptor for the latencyassociated peptides of transforming growth factors beta1 and beta3. Biochem J 2021。369(Pt 2):3118. 6 Annes JP, Chen Y, Munger JS, et al. Integrin alphaVbeta6mediated activation of latent TGFbeta requires the latent TGFbeta binding protein1. J Cell Biol 2021。165(5):72334. 7 XXXXXXXXXXXXXXXXX. 2 項目的研究內容、研究目標 ， 以及擬解決的關鍵問題 研究內容： XXXXX 化學合成與鑒定，二硬脂酸磷酯酰胺 XXXXXXXXXX 合成與鑒定。 不同類型脂質體的制備、技術參數優(yōu)化、物理性質鑒定和脂質體藥物包封率、載藥量、配體結合率鑒定與提高。 大鼠 HSC 分離培養(yǎng)， XXXXXXX 修飾脂質體 與肝星狀細胞體外結合活性研究。 XXXXX 修飾 XXXXXXXXX 對肝星狀細胞活化、增殖、 XXXXXXX 信號通路影響。 XXXXXXXXX 的 藥代動力學特征、組織分布特征和 XXXXXXX 研究。 XXXXXXXX 對 膽總管結扎和 CCl4大鼠肝纖維化防治作用。 研究目標： 研究構 建 XXXXXXXX， 為抗肝纖維化藥物新劑型開發(fā)提供新型靶向載體。 研究 XXXXXX 對 HSC 生物活性影響及機制，為中西藥結合肝纖維化 雙靶向、 多靶點、協同治療提供理論基礎。 研究 XXXXXXXX 體內 HSC 靶向性及防治 實驗性 肝纖維化的有效性， 為開發(fā)中藥新劑型、提高藥物在靶組織濃度、降低有效劑量 、 減輕副作用 和提高療效 提供 實踐基礎 。 擬解決的關鍵問題： 高藥物包封率、高配體修飾率的穩(wěn)定 XXXXXXXX 制備。 放射性計數法測定 XXXXXX 與 HSC 結合活性，有效抑制 HSC 活化的劑量、時間參數等。 XXXX