【正文】 第一篇：分子生物學實驗室常用儀器及使用方法實驗一分子生物學實驗室常用儀器及使用事實證明，在科學飛速發(fā)展的今天，無論從事哪個領域的研究，要想突破，除了有良好的理論基礎外，更重要的是依賴于先進的技術和優(yōu)良的儀器設備以及良好的研究環(huán)境。一個標準的分子生物學實驗室除了具有一般生物學實驗室的常規(guī)儀器設備外，還具有一些特殊用途的儀器，這些儀器一般較精密，價格昂貴。下面介紹這些儀器的使用方法和注意事項。一、冷凍離心機低溫分離技術是分子生物學研究中必不可少的手段。基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中都離不開低溫離心技術，心機成為分子生物學研究中必備的重要儀器。室的高速冷凍離心機為GL20GⅡ型（上海安亭）10ml和12。極限轉速20000rpm。離心機應放置在水平堅固的地面上，應至少距離中，周圍空氣應呈中性，且無導電性灰塵、易燃氣體和腐蝕性氣體，環(huán)境溫度應在之間，相對濕度小于80%。試轉前應先打開蓋門，用手盤動轉軸，輕巧靈活，無異?，F(xiàn)象方可上所用的轉頭。轉子準確到位后打開電源開關，然后用手按住門開關，動后立即停止，并觀察轉軸的轉向，若逆時針旋轉即為正確，機器可投入使用。（1）插上電源，待機指示燈亮；打開電源開關，調速與定時系統(tǒng)的數(shù)碼管顯示的閃爍數(shù)字為機器工作轉速的出廠設定，溫控系統(tǒng)的數(shù)碼管顯示此時離心腔的溫度。（2）設定機器的工作參數(shù)，如工作溫度，運轉時間，工作轉速等。（3）將預先平衡好的樣品放置于轉頭樣品架上，關閉機蓋。（4）按控制面板的運轉鍵，離心機開始運轉。預先設定的值。（5）在預先設定的運轉時間內（不包括減速時間）定的減速時間內降至零。（6）按控制面板上的停止鍵，數(shù)碼管顯示機器已準備好下一次工作。（1）離心機應始終處于水平位置，外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線，機器不使用，要拔掉電源插頭。（2）開機前應檢查轉頭安裝是否牢固，機腔中有無異物掉入。（3）樣品應預先平衡，使用離心筒離心時離心筒與樣品應同時平衡。（4）揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時，應使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機腔或造成事故。在國內，有多個廠家生產(chǎn)冷凍離心機，落地式。配有角式轉頭：10cm在預先設定的加速時間內，其運速升，離心機開始減速，其轉速在預先設dedT，數(shù)秒鐘后即顯示閃爍的轉速值，這時1本實驗650ml、120～30℃至 因此低溫冷凍離 以上且具有良好的通風環(huán)境再按運轉鍵，轉（5）除工作溫度、運轉速度和運轉時間外，不要隨意更改機器的工作參數(shù)，以免影響機器性能。轉速設定不得超過最高轉速，以確保機器安全運轉。（6），機器不運轉，應關機斷電，10秒鐘后重新開機，待所設轉速顯示后，再按運轉鍵，機器將照常運轉。（7）不得在機器運轉過程中或轉子未停穩(wěn)的情況下打開蓋門，以免發(fā)生事故。（8）每次操作完畢應做好使用情況記錄，并定期對機器各項性能進行檢修。二、電泳儀電泳技術是分子生物學研究不可缺少的重要手段。帶電泳大類，自由界面電泳不需支持物，泳目前已很少使用。區(qū)帶電泳需用各種類型的物質作為支持物，纖維薄膜、非凝膠性支持物、是瓊脂糖凝膠電泳。應用電泳法可以對不同物質進行定性或定量分析，組份分析或單個組份提取制備。下面以為例介紹其使用方法。（1）按電源開關，顯示屏出現(xiàn)“歡迎使用同時系統(tǒng)初始化，蜂鳴U:0VU＝I:0mAI ＝P:0WP＝T:00:00T＝其中:左側大寫Mode(模式)：STD(標準（2）設置工作程序。用鍵盤輸入新的工作程序。例如，要求工作電壓I限制在200mA以內，功率動關掉輸出。則操作步驟如下：①按“模式”鍵，將工作模式由標準（凝膠性支持物及硅膠―4聲，設置常設置。屏幕轉成參數(shù)設置狀態(tài)，見圖一：100V50mA｜50W｜ 01:00｜U: I: P: T:)；TIME(定時W限制在 電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)如等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電G薄層等，分子生物學實驗中最常用的DYY12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）DYY12型電腦三恒多用電泳儀?”等字樣后，Mode：STD中間部分顯示程序的常設值)；VH（伏時）；STEP（分步）100W以內，時間T為3STD）轉為定時（TIME）2醋酸或將一定混合物進行（預置值）。U＝1000V，電流20分，并且到時間自常用的支持物有濾紙、｜為電泳時實際值； 小時 模式。每按一下模式鍵，其工作方式按下列順序改變：STD174。TIME174。VH174。STEP174。STD。②先設置電壓U，按“選擇”鍵，先將其反顯，然后輸入數(shù)字鍵即可設置該參數(shù)的數(shù)值。按數(shù)字1000,則電壓即設置完成。③設置電流I，按“選擇”鍵，先使I反顯，然后輸入數(shù)字200。④設置功率P，按“選擇”鍵，先使P反顯，然后輸入數(shù)字100。⑤設置時間以按“清除”鍵，再重新輸入。⑥確認各參數(shù)無誤后，按“啟動”鍵，啟動電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start!并蜂鳴至設置值。同時在狀態(tài)欄中顯示“壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實際的工作時間（精確到秒）⑦每次啟動輸出時，儀器自動將此時的設置數(shù)值存入“要調用時可以按“讀取”鍵，再按“出執(zhí)行。⑧電泳結束，儀器顯示：(1)U、I、P三個參數(shù)的有效輸入范圍是：(2)一般情況下，當?shù)牡胤?，可以用萬用表的歐姆檔逐段測量。(3)如果輸出端接多個電泳槽，則儀器顯示的電流數(shù)值為各槽電流之和，此時應選擇穩(wěn)壓輸出，以減小各槽的相互影響。(4)注意保持儀器的清潔，不要遮擋儀器后方進風通道。嚴禁將電泳槽放在儀器頂部，避免緩沖液灑進儀器內部。(5)本儀器輸出電壓較高，使用中應不避免接觸輸出回路及電泳槽內部，以免發(fā)生危險。(6）長期不用儀器，應放置在干燥通風的清潔環(huán)境中保存。三、分析天平分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要儀器，充分了解儀器性能及熟練掌握其使用方 T，按“選擇”鍵，先使 4聲，提醒操作者電泳儀將輸出高電壓，“No Load！時，首先應關機檢查電極導線與電泳槽之間是否有接觸不良T反顯，然后輸入數(shù)字Run”，并有兩個不斷閃爍的高壓符號，表示端口已有電0”鍵，按“確定”鍵，即可將上次設置的工作程序取END”，并連續(xù)蜂鳴提醒。此時按任一鍵可止鳴。U：5 3注意安全。3000V；I：320。如果輸入錯誤，可之后逐漸將輸出電壓加 MO”號存儲單元。以后需4～400mA P：4～400W.?！?； 法，是獲得可靠分析結果的保證。分析天平的種類很多，有普通分析天平、半自動/全自動電光分析天平及電子分析天平等。目前實驗室常規(guī)備用的是自動化程度較高的電子分析天平。下面介紹電子分析天平PL203/01型和AL104/01型(METTLERTOLEDO)的性能及使用方法。PL203/01型精密電子天平：最大稱量210g；；AL104/01型高分辨率電子分析天平：最大稱量110g；（1）檢查并調整天平至水平位置。檢查電源電壓是否匹配（使用配置的穩(wěn)壓器），按天平儀器要求通電預熱至所需時間（2）打開天平開關“短時點亮，天平回零時，可進行正式稱量。（3）稱量時將潔凈稱量瓶或稱量紙置于稱盤上，關上側門，天平將顯示該重量，點擊“174。O/T172。”鍵自動校對零，然后逐漸加入待稱物質，直至所需重量為止。（4）稱量結束應及時除去稱量瓶（紙）（1）天平應放置在牢固平穩(wěn)水泥臺或木臺上，室內要求清潔、干燥，同時應避免光線直接照射到天平上。（2）稱量時應從側門取放物質，讀數(shù)時應關閉箱門以免空氣流動引起天平擺動。（3）揮發(fā)性、腐蝕性、強酸強堿類物質應盛于帶蓋稱量瓶內稱量，防止腐蝕天平。（4）電子分析天平若長時間不使用，則應定時通電預熱，每周一次，每次預熱確保儀器始終處于良好使用狀態(tài)。四、分光光度計不同物質對不同波長入射的吸收程度各不相同，從而形成各具特征的吸收光譜原理，應用比色法可以對某些有色物質進行定性或定量分析。而且精度低，已遠遠不能滿足高精度微量分析的要求。不斷地更新?lián)Q代，人們引進了分光光度法的概念，單色器、吸收池、接受器、顯示屏幕所組成，它不僅適應于可見光區(qū)，同時還擴展至紫外光區(qū)及紅外光區(qū)。光密度（而測定某一溶液對該單色光的吸收值。液定量和純度的初步判斷。下面介紹紫外可見光分光光度計的使用方法。該儀器除了能檢測核酸樣品濃度外，的測定，能檢測低至幾微升樣品（30min。on”，天平則自動進行靈敏度及零點調節(jié)。待顯示屏上所有字段，關上側門，切斷電源，并做好使用情況登記。隨著科學技術不斷發(fā)展，分光光度計隨之應用。OD）是許多溶液中的溶質定量的指標之一，通過所產(chǎn)生的單色光分子生物學實驗中常使用紫外分光光度計進行核酸溶還可進行蛋白質濃度以及細胞培養(yǎng)液濃度70181。l和5～7181。l），樣品無需稀釋，測量后還可全部回收。4分光光度計由光源、GeneQantTM Pro2h，以。根據(jù)這一分析儀器也Amersham）但由于比色法僅限于可見光區(qū)，（使用方法(1）打開電源開關（ON），等待數(shù)秒鐘，顯示屏上顯示一系列數(shù)據(jù)，如本機型號、當前日期等，這些數(shù)據(jù)可以重新設置，當出現(xiàn)“instrument Ready”即可進入下一程序。(2）在儀器面板上有許多功能鍵，其中包括檢測base sep、Tm、DNA、RNA、oligo、Protein595assay、Protein280 meas、cell culture等。例如，欲檢測DNA，按DNA鍵，即進入DNA檢測程序。在顯示屏上：以上為儀器預設置的參考數(shù)據(jù)，若按“新設定。(3）取石英樣品杯后放入儀器上的樣品槽中，放入時注意樣品杯的光學面朝前方。(4)按“set ref”鍵，進行空白測試。顯示屏上出現(xiàn)一系列數(shù)據(jù)均““Insert sample 中進行測定。(5）一個樣品測定完畢，按“(6）取出樣品杯，吸出樣品，然后用高純水洗幾次，自然晾干。由于樣品杯十分昂貴，使用時要小心操作。以至鉻酸洗液（濃酸中浸泡不要超過五、數(shù)字式酸度計酸度計是實驗室配置溶液必備的儀器。本實驗室的酸度計為臺式微電腦酸堿度計和溫度計（Hanna（1）將pH70181。l或5。將樣品杯取出，吸干水分，稍干燥后，同樣吸入待測樣品，放入樣品槽 ,測量pH范圍為Pathlengh10mmUnits181。g/181。lUse 320nmNODilution Faotor 1Insert reference，enter”鍵，和“select”鍵可以將以上的參數(shù)進行重7181。l，容量大小根據(jù)需要。先用吸管吸高純水入樣品杯中，然 ”并提示插入樣品stop”鍵，返回“Instrument Ready”?？捎脺厮蛳←}酸，乙醇15分鐘），表面只能用柔軟的絨布或拭鏡頭紙擦凈?！?；～℃；～”不能用手指拿樣品杯的光學面，用后要及時洗滌，）電極和溫度探頭與主機連接，主機與電源連接。（2）取出電極保護套，如果有結晶鹽出現(xiàn)，這是電極常見現(xiàn)象，浸入水后就會消逝。如果薄膜玻璃或透析膜發(fā)干，可在HI170300電極保存液中浸泡1小時。（3）pH校準。將pH電極和溫度探棒浸泡在所選的標準緩沖液內4cm（、），緩沖液值可通過“D℃”或“209?！妗辨I來調節(jié)。按“CAL”鍵，儀器將顯示“CAL”和“BUF”符號及“”數(shù)據(jù)。當讀數(shù)不穩(wěn)定時，屏幕會顯示“NOTREADY”；當讀數(shù)穩(wěn)定時，屏幕會顯示“READY”和“CFM”，按“CFM”鍵確認校準值。確認第一校準點后，將pH電極與溫度探棒浸泡在標準緩沖液內4cm（、）；再按“CAL”鍵，儀器將顯示“CAL”和“BUF”符號及“”數(shù)據(jù)。按“CFM”鍵確認校正值。（4）pH測量。校準完畢后，儀器自動進入溶液約4cm，停幾分鐘讓電極讀數(shù)穩(wěn)定。（1）由于pH211酸度計內裝有可充電電池，在剛購買或長時間放置后，再使用時，通電校正測量完畢后，可將電源繼續(xù)還插入電源插座，只需關閉開關，這樣可以保證電池充電，是校正值得以儲存，下次測量時無須校正即可進入精確測量。（2）不可用蒸餾水、去離子水和純水浸泡電極。如果讀數(shù)偏差太大（177。沒有校正或電極變干。為避免電極受損，在關機前要將狀態(tài)時，在電極浸入電極保存液前，電極要與機器分開。（3）如儀器已測過幾種不同的樣品溶液，請用自來水清洗，樣品清洗電極。（4）溫度會影響pH的讀數(shù)，為測量準確的補償，用HI7669/2W溫度探棒浸入樣品中，緊靠電極并停幾分鐘，如果被測溶液的溫度已知或測量是在相同溫度下進行，只需動手補償，示溫度讀數(shù)伴有℃信號閃爍。溫度可通過“六、PCR儀PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴增儀，它是使一對寡核苷酸引物結合到正負上的靶序列兩側，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列三種不同溫度進行DNA變性、引物復性、PCR儀主要應用于基礎研究和應用研究等許多領域，如基因分析、序列分析、進化分析、臨床診斷、法醫(yī)學等等。隨著分子生物學的不斷發(fā)展，因此了解PCR儀的性能，熟練掌握儀器的正確使用方法及使用過程中的注意事項，將是十分必要的。現(xiàn)介紹PCR 擴增儀（Tl Thermocycler）的使用方法和注意事項。pH測量狀態(tài)，將電極與溫度探棒浸泡在待測pH電極從溶液中拿出。當處于關機 或在插入樣品溶液前，用待測pH值，溫度要在適合的范圍內進行自動溫度那么此時溫度探棒是不用連接，209?！妗被颉癉℃”來調節(jié)。DNA片段，它的每一循環(huán)包括在DNA聚合酶催化的延伸反應的三個過程。PCR擴增技術也得到普及推廣應用，61pH），則是由于屏幕上會顯DNA鏈 (1）接通電源開關，儀器進入準備狀態(tài)；在顯示屏上記錄了當前儀器的溫度和蓋子（Lid）的溫度。若儀器正在運行時，須按“B ”鍵（start/stop），才能退出運行并返回準備狀態(tài)。(2）編寫程序段。在準備狀態(tài)下按“C ”鍵(programs)進入編程狀態(tài)，選定一程序號，然后按“enter”鍵，進入下一程序；按 “A”(list)鍵后，選一文件號（empty program）；再按“enter”鍵，進入下一程序；按“ABC”鍵，進入下一程序，用上下左右鍵號選擇一個字母（A、B、C、D