華中農(nóng)業(yè)大學(xué)病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)第六章病毒純化(xxxx)(已修改)
2025-01-09 06:44 本頁(yè)面
【正文】 第六章 病毒的純化 利用各種物理、化學(xué)方法，以 不使病毒受損傷和失活為前提 ，去除宿主細(xì)胞組分等非病毒雜質(zhì)，提取出高純度濃縮的病毒樣品。 ?病毒微細(xì)結(jié)構(gòu)的研究 ?病毒抗原蛋白的分離純化 ?病毒化學(xué)成分及其遺傳物質(zhì)的研究 ?病毒感染的分子細(xì)節(jié)的研究 一、病毒純化的標(biāo)準(zhǔn) ?保持感染性 ?具有均一性： ?結(jié)晶形成 檢測(cè)病毒制備物均一性的方法： ?電鏡觀察： 大小、形態(tài)均一 ?超速離心： 沉降速率和密度一致，只出現(xiàn)一條沉降帶 ?電泳： 顆粒大小及表面電荷均一，只形成一條電泳帶 ?免疫學(xué)方法： 只與特異性抗體發(fā)生反應(yīng) 大小、形態(tài)、密度、化學(xué)組成、分子量、抗原性 二、病毒純化的理論依據(jù) ?病毒體外表面的主要化學(xué)組成是蛋白質(zhì) ，可利用蛋白質(zhì)提純的方法純化病毒 ?病毒體具有一定大小 、 形狀和密度 ， 可利用超速離心技術(shù)提純病毒 三、病毒純化前的預(yù)處理 病毒感染的組織、臟器或細(xì)胞 ?研磨勻漿 ?超聲波處理 ?反復(fù)凍融 ?低速離心去掉細(xì)胞碎片 細(xì)胞培養(yǎng)液、雞胚尿囊液 低速離心去掉可能含有的雜質(zhì)或直接用于病毒的分離純化 ?沉淀法 ?超速離心法 ?超濾法 ?層析法 ?兩相溶劑間分配系數(shù)法 ?吸附法 ?電泳法 四、病毒純化的方法 （一）沉淀法 主要從稀的病毒懸浮液中濃縮病毒。 ?中性鹽沉淀法（鹽析） ?聚乙二醇沉淀法 ?有機(jī)溶劑沉淀法 ?等電點(diǎn)沉淀法 ?皂土法 ?魚(yú)精蛋白沉淀法 中性鹽沉淀法（鹽析） 先用其它方法去除材料中的大量雜質(zhì)，再以高濃度的中性鹽溶液鹽析，析出的沉淀用緩沖液懸浮后再進(jìn)行鹽析，反復(fù)幾次后，懸浮沉淀，用透析法或其它方法脫鹽。 病毒一般在 45%以
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