【正文】 基因工程原理練習(xí)題及其答案一、填空題1． 基因工程是_________年代發(fā)展起來的遺傳學(xué)的一個(gè)分支學(xué)科。2． 基因工程的兩個(gè)基本特點(diǎn)是： (1)____________，(2)___________。3． 基因克隆中三個(gè)基本要點(diǎn)是：___________；_________和__________。4． 通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定基因區(qū)域所得到的不同大小 的片段，可以構(gòu)建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點(diǎn)相互位置的___________。5． 限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結(jié)合的原則命名的，第一個(gè)大寫字母取自_______，第二、三兩個(gè)字母取自_________，第四個(gè)字母則用___________表示。6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。7．第一個(gè)分離的限制性內(nèi)切核酸酶是___________；而第一個(gè)用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是_____________。8．限制性內(nèi)切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的來源不同，但識(shí)別的序列都是_________，它們屬于_____________。9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量為76kDa的大片段，具有兩種酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。10．為了防止DNA的自身環(huán)化，可用_____________去雙鏈DNA__________________。11．EGTA是____________離子螯合劑。12．測(cè)序酶是修飾了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而沒有_______酶的活性。13．切口移位(nick translation)法標(biāo)記DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。14．欲將某一具有突出單鏈末端的雙鏈DNA分子轉(zhuǎn)變成平末端的雙鏈形式，通常可采用_________或_______________。15．反轉(zhuǎn)錄酶除了催化DNA的合成外，還具有____________的作用，可以將DNA RNA雜種雙鏈中的___________水解掉。16．基因工程中有3種主要類型的載體： _______________、_____________、______________。17．就克隆一個(gè)基因(DNA片段)來說，最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個(gè)部分：_______________、_____________、______________。另外，一個(gè)理想的質(zhì)粒載體必須具有低分子量。 18． 一個(gè)帶有質(zhì)粒的細(xì)菌在有EB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間后，一部分細(xì)胞中已測(cè) 不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫 。19． pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，它的復(fù)制子來源于 ，它的四環(huán)素抗性基 因來自于 ，它的氨芐青霉素抗性基因來自于 。20．YAC的最大容載能力是 ，BAC載體的最大容載能力是 。21．pSCl01是一種 復(fù)制的質(zhì)粒。22．pUCl8質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體。pUC系列的載體是通過 和 兩種質(zhì)粒改造而來。它的復(fù)制子來自 ，Amp 抗性基因則是來自 。23．噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的原因：一是 ； 二是 。24． 野生型的M13不適合用作基因工程載體，主要原因是 和 。25． 黏粒(cosmid)是質(zhì)?！删w雜合載體，它的復(fù)制子來自 、COS位點(diǎn)序列來自 ，最大的克隆片段達(dá)到 kb。26． 野生型的l噬菌體DNA不宜作為基因工程載體，原因是：(1) (2) (3) 。27．噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是 ，而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是 。28．l噬菌體載體由于受到包裝的限制，插入外源DNA片段后，總的長度應(yīng)在噬菌體基 因組的 的范圍內(nèi)。29． 在分離DNA時(shí)要使用金屬離子螯合劑，如EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是 。30． 用乙醇沉淀DNA時(shí)，通常要在DNA溶液中加人單價(jià)的陽離子，如NaCl和NaAc， 其目的是 。31． 引物在基因工程中至少有4個(gè)方面的用途：(1) (2) (3) (4) 。32．Clark發(fā)現(xiàn)用Taq DNA聚合酶得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物不是平末端，而是有一個(gè)突出 堿基末端的雙鏈DNA分子。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)設(shè)計(jì)了克隆PCR產(chǎn)物的 。33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在 。34．乙醇沉淀DNA的原理是 。35． 假定克隆一個(gè)編碼某種蛋白質(zhì)的基因，必須考慮其表達(dá)的三個(gè)基本條件： (1)________________________________ (2)_____________________________ (3)_________________________________。36． 受體細(xì)胞的感受態(tài)是___________________________________。37． DNA重組連接的方法大致分為四種：(1)_____________(2)_______________ (3)___________________________(4)___________________________。38． 將含有外源基因組一個(gè)酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個(gè)___________，各種此類質(zhì) 粒的集合體稱之為構(gòu)建了一個(gè)_________________。39．將含有一個(gè)mRNA的DNA拷貝的克隆稱作一個(gè)____________，源于同一批RNA制備 物的克隆群則構(gòu)建了一個(gè)_________________。40．只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用___________可以將這段DNA 進(jìn)行百萬倍的擴(kuò)增。41．人工感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞在溫度為___________時(shí)吸附DNA, ___________時(shí)攝人DNA。42．目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構(gòu)思巧妙、具有極高準(zhǔn)確性的篩選方法。 大致可以分為： (1)_______________(2)_______________(3)___________________ (4)____________________________等。43．PCR擴(kuò)增篩選重組體是比較簡便的篩選方法，它適合于___________________________。44． 核酸雜交探針可分為兩大類： DNA探針和RNA探針。其中DNA探針又分為__________ 探針和__________________探針。45．如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生5’突出的黏性末端，則可以用__________進(jìn)行3’末端標(biāo)記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割DNA產(chǎn)生的是3’突出的黏性末端，可以用__________________進(jìn)行3’末端標(biāo)記。46．單鏈DNA探針的標(biāo)記可以采用下列方法：(1)____________________________________ (2)__________________________(3)_____________________________________。47．根據(jù)Northern雜交的結(jié)果可以說明：__________________________________________。48．差示雜交(differential hybridization)技術(shù)需要_________________________________。49．RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜) 上，同一放射DNA探針雜交的技術(shù)稱_______________________。50．在________________技術(shù)中，DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(或尼龍膜)上，然后與放射性的DNA探針雜交。51．可用T4 DNA聚合酶進(jìn)行平末端的DNA標(biāo)記，因?yàn)檫@種酶具有____________和_______的活性。52．根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因素： (1)_______________ (2)________________________(3)______________________。53．Northern印跡和Southern印跡有兩點(diǎn)根本的區(qū)別： (1)_______________________________________________________________________ (2)_______________________________________________________________________。54．放射免疫篩選的原理基于以下三點(diǎn)： (1)__________________________________ (2)___________________________ (3)__________________________________。答案 1．70 2．(1)分子水平上的操作；(2)細(xì)胞水平上的表達(dá) 3．克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇4．限制性酶切圖譜5．屬名的第一個(gè)字母；種名的前兩個(gè)字母；株名 6．(1)減少酶量；(2)縮短反應(yīng)時(shí)間；(3)增大反應(yīng)體積 7．EcoK；EcoRl 8．GGCC；異源同工酶 9． 枯草桿菌蛋白酶；(1)539。339。合成酶的活性；(2)339。539。外切核酸酶10．堿性磷酸酶；5’端的磷酸基團(tuán) 11． Ca2+ 12． 539。339。合成； 339。539。外切 13． DNA聚合酶I：539。一339。外切核酸酶；539。一339。合成酶 14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶補(bǔ)平 15．核酸水解酶H；RNA16． 質(zhì)粒DNA；病毒DNA；質(zhì)粒和病毒DNA雜合體17． 復(fù)制區(qū)： 含有復(fù)制起點(diǎn)；選擇標(biāo)記： 主要是抗性基因；克隆位點(diǎn)： 便于外源DNA的插入18． 質(zhì)粒消除(或治愈)19， pMBl； pSCl01；pSF2124(R質(zhì)粒)20． 1000kb；300kb21. 嚴(yán)緊22． pBR322和M13；pMBl；轉(zhuǎn)座子23． 它在細(xì)菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源DNA的擴(kuò)增；對(duì)某些噬菌體(如l噬菌)的遺傳結(jié)構(gòu)和功能研究得比較清楚，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也研究得比較詳盡 24． 沒有合適的限制性內(nèi)切核酸酶識(shí)別位點(diǎn)；選擇標(biāo)記25．質(zhì)粒；l噬菌體； 4526． (1)分子量大，(2)酶的多切點(diǎn)，(3)無選擇標(biāo)記27．復(fù)制區(qū)； IG區(qū)28．75％～105％29． 螯合Mg2+離子，抑制核酸酶的活性30． 中和DNA分子的負(fù)電荷，增加DNA分子間的凝聚力31．(1)合成探針；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反應(yīng)；(4)進(jìn)行序列分析32．T—載體33．第二鏈合成時(shí)形成的發(fā)夾環(huán)?34．乙醇使DNA分子脫水35．(1)保持正確的可讀框 (2)能夠使其轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子 (3)具有翻譯的起始和終止信號(hào)36．接受外源DNA的生理狀態(tài)37．(1)黏性末端連接； (2)平末端連接； (3)同聚物接尾連接； (4)接頭連接法38． 基因組DNA克??； 基因組DNA文庫39．cDNA克?。籧DNA文庫40．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)41．0176。C；42176。C42．(1)遺傳學(xué)方法； (2)物理篩選法； (3)核酸雜交法； (4)表達(dá)產(chǎn)物分析法43．插入外源片段的種類較多，大小又極為相似的重組體的篩選44．基因組DNA；cDNA45．Klenow酶填補(bǔ)的方法；T4DNA聚合酶46．(1)用M13噬菌體載體合成單鏈DNA探針；(2)從mRNA反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA探針；(3)用不對(duì)稱PCR合成單鏈DNA探針47．外源基因是否進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄48．兩種不同的細(xì)胞群體能夠表達(dá)不同的基