二元手性選擇體系毛細管電泳分離檢測未衍生化氨基酸對映體的研究(已修改)
2025-08-16 13:35 本頁面
【正文】 二元手性選擇體系毛細管電泳分離檢測未衍生化氨基酸對映體的研究陳裕富 謝天堯第一作者 陳裕富（1983年出生），男，中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院應(yīng)用化學(xué)A專業(yè)2003級指導(dǎo)教師 謝天堯 Email：cesxty@.（中山大學(xué) 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，廣州 510275）摘要 以銅L賴氨酸作為配體交換選擇劑，與羥丙基甲基纖維素（HPMC）構(gòu)成二元手性選擇體系，在熔融石英毛細管（50181。m .50 cm）中，用毛細管區(qū)帶電泳－電導(dǎo)法成功對未衍生化苯丙氨酸對映體（D,LPhe）進行分離。在選定體系下：+ mmol/L Cit+ mmol/L Cu(Ac)2+ mmol/L LLys +20mg/L HPMC，苯丙氨酸對映體獲得良好的基線分離。其線性范圍為10～200 mg/L，檢出限（S/N=3）為3 mg/L。對影響分離度的影響因素：電泳運行液組成和濃度、配體選擇劑摩爾比和濃度、HPMC的濃度等進行了詳細的討論。本實驗高效簡便、分析成本低。關(guān)鍵詞 毛細管電泳 電導(dǎo)檢測 苯丙氨酸 配體交換1前言氨基酸是組成生物大分子的基本單元，在生命起源、發(fā)育、病變及衰老等生命過程中都扮演著重要的角色，是蛋白組學(xué)研究的重要內(nèi)容之一[1]。苯丙氨酸(Phe)是一種重要的氨基酸，是人和動物8種必需氨基酸的其中之一，其結(jié)構(gòu)如圖Ⅰ所示。苯丙氨酸[2]主要用作試劑及醫(yī)藥上的胃腸外營養(yǎng)輸液，亦見用作特殊人員合成膳食、必需氨基酸片等營養(yǎng)強化劑的成分；苯丙氨酸還可作為昆蟲人工飼料的成分；苯丙氨酸對治療蘋果皰茄病亦有效。L苯丙氨酸是人和動物所需要的一種氨基酸，而D苯丙氨酸是生產(chǎn)艾滋病病毒抑制劑的重要中間體[3]。配體交換法是氨基酸手性分離的常用方法，基于配體交換原理的分離方式有氣相色譜手性固定相法、液相色譜法、薄層色譜法、膜分離法、毛細管電泳法[4]等。目前已經(jīng)報道的苯丙氨酸對映體的拆分方法，主要有高效液相色譜[5]、手性膜法[6]、薄層色譜[7]、離子色譜法[8]和毛細管電泳[9]等。氨基酸由于其結(jié)構(gòu)簡單，分離難度較大，且沒有紫外或熒光吸收，通常需要柱前、在柱或柱后衍生才可得到檢測。電導(dǎo)檢測法具有通用性，氨基酸無須經(jīng)過衍生即可檢測，操作大大簡化，是氨基酸一種理想的檢測方法。本實驗以銅L賴氨酸作為配體交換選擇劑，與羥丙基甲基纖維素（HPMC）構(gòu)成二元手性選擇體系，用毛細管區(qū)帶電泳－電導(dǎo)法成功對未衍生的苯丙氨酸對映體進行分離，方法高效簡便、分析成本低，可發(fā)展于實際樣品的分析應(yīng)用。2 實驗部分 儀器與試劑CES2003毛細管電泳儀（高壓電源、電導(dǎo)檢測器、毛細管電泳數(shù)據(jù)工作站，中山大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院研制）；pHS3C精密酸度計（上海偉業(yè)儀器廠）；石英毛細管柱50 cm50 181。m（河北永年光導(dǎo)纖維廠），CQ2B型超聲波清洗器（明珠電器有限公司）。 圖Ⅰ 苯丙氨酸的結(jié)構(gòu)式(Phe, pI = )Fig.ⅠThe structure of Phenylalanine and Lysin (Phe, pI = )氫氧化鈉（NaOH，廣州化學(xué)試劑廠，分析純）、檸檬酸(Cit，天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純)、乙酸銅（Cu(CH3COO)2H2O，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心，分析純），羥丙基甲基纖維素（HPMC，山東赫達股份有限公司，分析純），D,L苯丙氨酸、L苯丙氨酸（D,LPhe、LPhe，上?？茖W(xué)院生物化學(xué)研究所，層析純），L賴氨酸（LLys，上海伯奧生物科技有限公司產(chǎn)品，層析純）。所用水為超純水。 溶液的配制 mol/L NaOH、 mol/L Cit、25 mmol/L Cu(Ac)25 mmol/L LLys和100 mg/L HPMC儲備液。實驗
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