【正文】 實驗一：使用高倍顯微鏡觀察幾種細胞一、實驗?zāi)康模簩W(xué)會如何使用顯微鏡觀察細胞；了解細胞的結(jié)構(gòu)；學(xué)會制作臨時裝片。二、實驗材料：（實驗材料可換）松針、動物血液、動物神經(jīng)細胞永久裝片三、實驗用具： 載玻片、蓋玻片、蒸餾水、滴管、鑷子、土豆、刀片、顯微鏡（物鏡5X、10X、40X）四、方法步驟：制作松針的臨時切片：（1）取干凈的載玻片一個平置于試驗臺上，用滴管在載玻片中央滴一滴蒸餾水。（2）將土豆切成條狀（截面約：)取兩條，將一根松針夾在兩個土豆條之間，用刀片削成盡量薄的薄片，削時，手腕不動，靠大臂帶動小臂移動刀片。切片數(shù)次。從中選取較薄的切片，置于載玻片的水滴上。（3）從一側(cè)輕輕蓋上蓋玻片，不要產(chǎn)生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周圍的水滴，即完成臨時切片的制作。觀察切片：（1）取出顯微鏡，置于試驗臺上靠左的位置，打開光源。（2) 將上步制作好的切片置于顯微鏡的載物臺上，調(diào)整載物臺位置，使蓋玻片對準光源。 （3）使用5X物鏡觀察切片，使松針切片在視野中心，換成10X物鏡，觀察松針葉面橫切結(jié)構(gòu)。（4）換成40X物鏡觀察，注意細胞及細胞內(nèi)物質(zhì)結(jié)構(gòu)，畫圖。 動物血液臨時裝片的制作及觀察（除了不用切片，其他類似） 動物神經(jīng)細胞永久裝片的觀察。五、考點提示：松針的葉面結(jié)構(gòu)是什么樣的？動物細胞的結(jié)構(gòu)是什么樣的？與植物細胞又什么不同？顯微鏡的物鏡倍數(shù)愈大，視野的亮度如何？物體的大小如何？如何調(diào)節(jié)焦距？如何才能使切片盡量的?。壳衅暮癖︼@微鏡下觀察的效果有什么影響。實驗二：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)一、實驗?zāi)康模簢L試用化學(xué)試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)，闡明實驗原理—顏色反應(yīng)，識記和區(qū)分用于可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定的試劑及產(chǎn)生的特定顏色，初步掌握鑒定上述化合物的基本方法，學(xué)會描述實驗現(xiàn)象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。二、實驗原理：某些化學(xué)試劑能使生物組織中的有關(guān)有機化合物，產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。生物組織中普遍存在的可溶性糖類較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗糖分子內(nèi)沒有，為非還原糖。實驗中所用的斐林試劑，只能鑒定生物組織中可溶性還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖?？扇苄赃€原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖）與斐林試劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的Cu 2O沉淀。如： 葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH— 加熱 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（磚紅色）+ H 2O即Cu 2+被還原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。用斐林試劑鑒定還原糖時，溶液變化過程為：淺藍色→棕色→磚紅色沉淀淀粉遇碘變藍色（直鏈）或紫（紅）色（支鏈）。脂肪和類脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）統(tǒng)稱為脂類。它是構(gòu)成人體組織的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶劑中。在化學(xué)組成上，脂類屬于脂肪酸的酯或與這些酯有關(guān)的物質(zhì)。脂類的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存積于脂肪組織中，并以油滴狀的微粒存在脂肪細胞漿內(nèi)。 在病理檢驗中，脂類染色法最常用以證明脂肪變性，脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料，最常用的有蘇丹Ⅲ，蘇丹Ⅳ，蘇丹黑及油紅O等。脂肪被染色，實際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現(xiàn)染料的顏色。經(jīng)研究認為組織中脂質(zhì)在液態(tài)或半液態(tài)時，對蘇丹染料著色效果最好。根據(jù)這一原理，適當提高溫度（37℃60℃）對組織切片染色效果是有好處的。 脂類染色，用冰凍或石蠟切片，以水溶性封固劑封固，如甘油、明膠和阿拉伯糖膠等。脂肪可以被蘇丹Ⅲ染液染成橘黃色或橙紅色（或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色），膽脂素呈淡紅色，脂肪酸不著色，細胞核呈藍色。蛋白質(zhì)與雙縮脲試劑發(fā)生作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。（蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵，在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。）三、實驗材料：做可溶性還原性糖鑒定實驗，應(yīng)選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋果、梨。（因為組織的顏色較淺，易于觀察。）經(jīng)試驗比較，顏色反應(yīng)的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜。做脂肪的鑒定實驗。應(yīng)選富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實驗前一般要浸泡3~4小時（也可用蓖麻種子）。做蛋白質(zhì)的鑒定實驗，可用富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清。淀粉的鑒定：馬鈴薯勻漿。四、實驗用具：雙面刀片、試管（最好用刻度試管）、試管夾、試管架、大小燒杯、小量筒、滴管、酒精燈、三腳架、石棉網(wǎng)、火柴、載玻片、蓋玻片、毛筆、吸水紙、顯微鏡五、實驗試劑：1．斐林試劑（包括甲液：：）2．蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液3．雙縮脲試劑（包括A液：：）4．體積分數(shù)為50%的酒精溶液5．碘液6．蒸餾水六、方法步驟：一、可溶性糖的鑒定操 作 方 法注 意 問 題解 釋1. 制備組織樣液。（去皮、切塊、研磨、過濾）蘋果或梨組織液必須臨時制備。因蘋果多酚氧化酶含量高，組織液很易被氧化成褐色，將產(chǎn)生的顏色掩蓋。2. 取1支試管，向試管內(nèi)注入2mL組織樣液。3. 向試管內(nèi)注入1mL新制的斐林試劑，振蕩。應(yīng)將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配制、儲存，使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑；切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進行檢測。斐林試劑很不穩(wěn)定，甲、乙液混合保存時，生成的Cu ( OH ) 2在70~ 900C下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分別加入時可能會與組織樣液發(fā)生反應(yīng)，無Cu OH生成。4. 試管放在盛有50650C溫水的大燒杯中，加熱約2分鐘，觀察到溶液顏色：淺藍色 → 棕色 → 磚紅色（沉淀）最好用試管夾夾住試管上部，使試管底部不觸及燒杯底部，試管口不朝向?qū)嶒炚?。也可用酒精燈對試管直接加熱。防止試管?nèi)的溶液沖出試管，造成燙傷；縮短實驗時間。二、脂肪的鑒定操 作 方 法注 意 問 題解 釋花生種子浸泡、去皮、切下一些子葉薄片，將薄片放在載玻片的水滴中，用吸水紙吸去裝片中的水。干種子要浸泡3~4小時，新花生的浸泡時間可縮短。因為浸泡時間短，不易切片；浸泡時間過長，組織較軟，切片不易成形。切片要盡可能薄些，便于觀察。在子葉薄片上滴2~3滴蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液，染色1分鐘。染色時間不宜過長。用吸水紙吸去薄片周圍染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，會影響對橘黃色脂肪滴的觀察。同時，酒精是脂溶性溶劑，可將花生細胞中的脂肪顆粒溶解成油滴。用吸水紙吸去薄片周圍酒精，滴上1~2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片。滴上清水可防止蓋蓋玻片時產(chǎn)生氣泡。低倍鏡下找到花生子葉薄片的最薄處，可看到細胞中有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒。裝片不宜久放。時間一長，油滴會溶解在乙醇中。三、蛋白質(zhì)的鑒定操 作 方 法注 意 問 題解 釋制備組織樣液。（浸泡、去皮研磨、過濾。）黃豆浸泡1至2天，容易研磨成漿，也可購新鮮豆?jié){以節(jié)約實驗時間。鑒定。加樣液約2ml于試管中，加入雙縮脲試劑A，搖勻；再加入雙縮脲試劑B液3~4滴，搖勻，溶液變紫色。A液和B液也要分開配制，儲存。鑒定時先加A液后加B液。CuSO4溶液不能多加。先加NaOH溶液，為Cu2+與蛋白質(zhì)反應(yīng)提供一個堿性的環(huán)境。A、B液混裝或同時加入，會導(dǎo)致Cu2+變成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。否則CuSO4的藍色會遮蓋反應(yīng)的真實顏色。可用蛋清代替豆?jié){。蛋清要先稀釋。如果稀釋不夠，在實驗中蛋清粘在試管壁，與雙縮脲試劑反應(yīng)后會粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不容易徹底，并且試管也不易洗干凈。附：淀粉的檢測和觀察用試管取2ml待測組織樣液，向試管內(nèi)滴加2滴碘液，觀察顏色變化。碘液不要滴太多以免影響顏色觀察七、考點提示：常見還原性糖與非還原性糖有哪些？ 答：葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖；淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。 還原性糖植物組織取材條件？ 答：含糖量較高、顏色為白色或近于白色，如：蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜等。 研磨中為何要加石英砂？不加石英砂對實驗有何影響？ 答：加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時溶液顏色變化不明顯。 斐林試劑甲、乙兩液的使用方法？混合的目的？為何要現(xiàn)混現(xiàn)用？ 答：混合后使用；產(chǎn)生氫氧化銅；氫氧化銅不穩(wěn)定。 還原性糖中加入斐林試劑后，溶液顏色變化的順序為？ 答：淺藍色 棕色 磚紅色?；ㄉN子切片為何要??？ 答：只有很薄的切片，才能透光，而用于顯微鏡的觀察。 轉(zhuǎn)動細準焦螺旋時，若花生切片的細胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？ 答：切片的厚薄不均勻。 脂肪鑒定中乙醇作用？ 答：洗去浮色。 雙縮脲試劑A、B兩液是否混合后用？先加A液的目的怎樣通過對比看顏色變化？ 答：不能混合；先加A液的目的是使溶液呈堿性；先留出一些大豆組織樣液做對比。實驗三：觀察DNA和RNA在細胞中的分布一、實驗原理：真核細胞的DNA主要分布在細胞核內(nèi)，RNA主要分布在細胞質(zhì)中。甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同，甲基綠對DNA親和力強，使DNA顯現(xiàn)出綠色，而吡羅紅對RNA的親和力強，使RNA呈現(xiàn)出紅色。用甲基綠、吡羅紅的混合染色劑將細胞染色，可同時顯示DNA和RNA在細胞中的分布。鹽酸的作用① 鹽酸能改變細胞膜的通透性，加速染色劑的跨膜運輸；② 鹽酸使染色體中的DNA與蛋白質(zhì)分離，便于DNA與染色劑的結(jié)合二、實驗材料：人的口腔上皮細胞、洋蔥鱗片葉表皮細胞三、實驗用具：大小燒杯、溫度計、滴管、消毒牙簽、載玻片、蓋玻片、鐵架臺、石棉網(wǎng)、火柴、酒精燈、吸水紙、顯微鏡四、方法步驟：取材① 滴：%的NaCl溶液；② 刮：用消毒牙簽在口腔內(nèi)側(cè)壁上輕輕地刮幾下；③ 涂：將牙簽上的碎屑涂抹在載玻片的生理鹽水中；④ 烘：將涂有口腔上皮細胞的載玻片在酒精燈的火焰上烘干。水解① 解：將烘干的載玻片放入裝有30ml質(zhì)量分數(shù)為8%的鹽酸的小燒杯中，進行材料的水解；② 保：將小燒杯放入裝有30℃溫水的大燒杯中保溫5分鐘。沖洗涂片① 沖：用緩緩的蒸餾水沖洗載玻片10秒鐘；② 吸：用吸水紙吸去載玻片上的水分。染色① 染：用2滴吡羅紅甲基綠混合染色劑滴在載玻片上，染色5分鐘；② 吸：吸去多余染色劑；③ 蓋：蓋上蓋玻片。觀察① 低：在低倍物鏡下，尋找染色均勻，色澤淺的區(qū)域，移至視野中央，將物像調(diào)節(jié)清晰；② 高：轉(zhuǎn)到高倍物鏡，調(diào)節(jié)細準焦螺旋，觀察細胞核和細胞質(zhì)的染色情況。五、考點提示：