【正文】 MET基因復(fù)制數(shù)量的增加賦予單克隆抵抗體抗MET的能力并且建立藥物依賴性關(guān)鍵詞：MET ，MVNV30單克隆抗體，酪氨酸激酶抑制劑，抗性，藥物依賴性【摘要】：被MEI原癌基因編碼的酪氨酸激酶受體領(lǐng)導(dǎo)了具體抑制劑的發(fā)展并在癌癥中起很重要的作用，其中現(xiàn)在一些正處于前進(jìn)的臨床試驗(yàn)階段就以前的經(jīng)驗(yàn)表明對(duì)大多數(shù)靶向治療最主要的限制是抗性的出現(xiàn)。在對(duì)MET單克隆抗體抗性和抗體對(duì)化學(xué)抑制劑旁路抗性（反之亦然）一無(wú)所知時(shí)，酪氨酸激酶抑制劑對(duì)MET的抗性機(jī)制就已經(jīng)被提出。EBC1型肺癌細(xì)胞是MET基因擴(kuò)增的結(jié)果，并且這種細(xì)胞對(duì)MET抑制劑非常敏感，包括MET單克隆抗體的單機(jī)形式在內(nèi)。我們培養(yǎng)生成抵抗抗體的細(xì)胞發(fā)現(xiàn)這種抗性是由于MET基因大量復(fù)制擴(kuò)增和它的受體顯著表達(dá)而來(lái)。這種過(guò)度表達(dá)可以使單克隆抗體的“脫落”活動(dòng)達(dá)到飽和，并且能夠防止表面的MET受體的有效的下調(diào)和抑制劑的活化作用。值得注意的是MVDN30抗體的抗性細(xì)胞是MET耐受細(xì)胞對(duì)MET酪氨酸激酶抑制劑也很敏感。除此之外，抗體抗性細(xì)胞還具有藥物依賴性,MVDN30的去處導(dǎo)致它們死亡是由于它們的過(guò)度信號(hào)表達(dá)。在實(shí)驗(yàn)中，對(duì)MET酪氨酸激酶抑制劑存在抗性的細(xì)胞仍然對(duì)MVDN30抗體的作用敏感。結(jié)果表明一種不連續(xù)的通過(guò)抗體和化學(xué)激酶抑制劑聯(lián)合治療可能會(huì)使靶向治療的臨床反應(yīng)和對(duì)MET抗體治療旁路的抗性增加?？s略語(yǔ)：MVDN30單價(jià)DN30，TKEs—酪氨酸激酶抑制劑，HGF—肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子，MAPK—有絲分裂原活化蛋白激酶可以抑制一個(gè)特定的目標(biāo)分子化合物的靶向治療法開(kāi)辟了治療癌癥的新道路。與主要?dú)⑺罃U(kuò)散細(xì)胞為主的傳統(tǒng)化療不同的是靶向藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞采取一種更具體的治療方式。靶向治療依賴于“癌基因沉癮”的概念。這就意味著單個(gè)基因的抑制或死亡是由于它們的沉癮，或者至少抑制它們的生長(zhǎng)（溫斯坦,2002）。臨床試驗(yàn)中的特定抑制劑的發(fā)展給腫瘤細(xì)胞的“Achille’s heel”的識(shí)別提供支持（溫斯坦和喬，2006）。盡管靶向治療在一部分癌癥患者中取得了較優(yōu)異的效果，還有重要的一點(diǎn)就是部分癌癥病人對(duì)藥物的選擇表達(dá)沒(méi)有起到治療作用（原發(fā)性），除此之外，幾乎總是一開(kāi)始患者反應(yīng)變成后來(lái)對(duì)治療的抵抗和復(fù)發(fā)（繼發(fā)性）。因此，最關(guān)鍵的就是要發(fā)現(xiàn)對(duì)治療抵抗的機(jī)制并且找到繞過(guò)它們的方法。癌基因和人類癌癥密切相關(guān)，酪氨酸激酶起著決定性作用。這個(gè)觀察發(fā)現(xiàn)許多腫瘤沉溺其中使得蛋白激酶成為了治療癌癥的理想目標(biāo)（巴塞爾加，2006。 Gschwind等人，2004）。在臨床診斷中主要使用一種較小的激酶抑制劑和單克隆抗體來(lái)抑制酪氨酸激酶。酪氨酸激酶抑制劑是一種可以抑制靶蛋白酶活性的小分子物質(zhì)。它們能有效地瞄準(zhǔn)膜結(jié)合位點(diǎn)和細(xì)胞內(nèi)的激酶并且很容易在體內(nèi)擴(kuò)散。單克隆抗體已被廣泛用于臨床并取得了可觀的成果。這些分子的優(yōu)點(diǎn)在于它們具有很高的特異性。在癌癥治療中的可以抗癌的RTKs單克隆抗體已經(jīng)被批準(zhǔn)在乳腺癌和結(jié)腸癌中使用(分別針對(duì)HER2和表皮生長(zhǎng)因子受體) 并可作為抗血管增生的藥物（針對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體）。除此之外，很多針對(duì)于其他目標(biāo)的單克隆抗體正處與發(fā)展和試驗(yàn)階段。最近，一種作為癌癥治療目標(biāo)的RTK受到關(guān)注，這種RTK是由致癌基因編碼的在肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子上的酪氨酸激酶受體。在和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子結(jié)合后，MET活化并啟動(dòng)一個(gè)復(fù)雜的生化程序，這個(gè)過(guò)程被稱作“浸潤(rùn)性上長(zhǎng)”。在腫瘤組織中，浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的增進(jìn)可以迫使腫瘤細(xì)胞從腫瘤組織中分解下來(lái)侵蝕基底膜，滲入基質(zhì)中，甚至定居于新的組織中來(lái)實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)移。很多研究結(jié)果表明MET在人類的許多腫瘤中具有活性，并且它與對(duì)直接激酶療法的持續(xù)抗性密切相關(guān)。除此之外，還表明細(xì)胞顯示大量復(fù)制（超過(guò)8張）和隨之而來(lái)的過(guò)度表達(dá)和獨(dú)立配體的激活都是沉溺于這種致癌基因和抗MET藥物的應(yīng)答中。在前期設(shè)置得到的基本結(jié)果，幾種特定的多目標(biāo)的酪氨酸激酶抑制劑和直接針對(duì)于MET或者HGF的抗體已經(jīng)進(jìn)入了臨床試驗(yàn)階段。在活體和動(dòng)物模型進(jìn)行的研究已經(jīng)表明用TKIs長(zhǎng)期治療會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的治療耐受性。對(duì)MET TKIs的抗性可能是由于一些機(jī)制，比如MET基因擴(kuò)增，過(guò)度表達(dá)，MET點(diǎn)突變，MET平行路徑的激活和KRAS基因的擴(kuò)增機(jī)制。然而，關(guān)于對(duì)MET的單克隆抗體的再次具有抗性一無(wú)所知。我們以前報(bào)道過(guò)主要針對(duì)細(xì)胞外的部分MET的抑制性單克隆抗體的研究進(jìn)展。它的誘導(dǎo)、再結(jié)合、達(dá)到MET脫落閾值的能力使其有抑制活性，剩余的跨膜片段通過(guò)蛋白酶體降解途徑處理掉。因此，DN30結(jié)合到MET后的結(jié)果是使其變成可溶性的誘餌MET并且蛋白水解酶會(huì)講解MET激酶。 這促進(jìn)了MET介導(dǎo)的生物活性的抑制作用。設(shè)計(jì)了這樣一個(gè)過(guò)程就是因?yàn)镈N30的結(jié)合使得MET激酶部分活化并且導(dǎo)致抗體介導(dǎo)的受體同源二聚體化和單價(jià)Fab片段失去競(jìng)爭(zhēng)活性的一個(gè)過(guò)程。在這個(gè)研究中我們表明了不斷用MVDN30來(lái)治療沉癮癌細(xì)胞會(huì)使其具有抗性的原因是MET基因的大量復(fù)制和MET的過(guò)度表達(dá)超過(guò)了MVDN30對(duì)其有效下調(diào)并使其失去活性的的能力。值得注意的是，MVDN30抗性細(xì)胞還會(huì)一直對(duì)MET TKIs產(chǎn)生耐受性和敏感性。有趣的是，它們獲得了藥物耐受性，當(dāng)受到MVDN30的驅(qū)除致死它們的是過(guò)多的信號(hào)表達(dá)。我們還表明對(duì)MET TKIs 有抗性的細(xì)胞也對(duì)MVDN30敏感，所以，MVDN30和MET TKIs 對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用是相互促進(jìn)的。 EBC1 細(xì)胞從一個(gè)患有轉(zhuǎn)移皮膚腫瘤的病人取得，這個(gè)患者還患有肺鱗狀細(xì)胞癌，病例是從日本癌癥資料庫(kù)購(gòu)買得到。 GTL16 是一種實(shí)驗(yàn)室里的克隆胃癌細(xì)胞系。HEK293T細(xì)胞系分離于人類胚胎時(shí)期的腎，A549細(xì)胞系來(lái)源于肺癌，都是從ATCC購(gòu)買來(lái)培養(yǎng)的。對(duì)MVDN30有抗性的EBC1細(xì)胞可以通過(guò)