液相20xx中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程雜質(zhì)檢測,流動相比例調(diào)節(jié)(已修改)
2025-06-09 01:49 本頁面
【正文】 中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 2022年版 高效液相色譜法 1 對儀器的一般要求 ? 所用儀器為高效液相色譜儀，由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成 ，儀器應(yīng)按現(xiàn)行國家技術(shù)監(jiān)督局“液相色譜儀檢定規(guī)程”定期檢定并符合有關(guān)規(guī)定。 色譜柱 ?最常用的色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠 。反相色譜系統(tǒng)使用非極性添充劑 ，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠（如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等）也有使用。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換色譜使用離子交換填充劑；分子排阻色譜使用凝膠或高分子多孔微球等填充劑；對映異構(gòu)體的分離通常使用手性填充劑。 ? 填充劑的性能（如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類型等）以及色譜柱的填充，直接影響供試品的保留行為和分離效果。分析分子量小于 2022的化合物應(yīng)選擇孔徑在 15nm（ 1nm=10?）以下的填料，分析分子量大于 2022的化合物則應(yīng)選擇孔徑在 30nm以上的填料。 ?除另有規(guī)定外，普通分析柱的填充劑粒徑一般在3～ 10μm之間，粒徑更小（約 2μm）的填充劑常用于填裝微徑柱（內(nèi)徑約 2mm）。 ? 使用微徑柱時，輸液泵的性能、進(jìn)樣體積、檢測池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配；如有必要，色譜條件也需作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對其測定的結(jié)果產(chǎn)生爭議時，應(yīng)以品種項下規(guī)定的色譜條件的測定結(jié)果為準(zhǔn)。 ?以硅膠為載體的鍵合固定相的使用溫度通常不超過 40℃ ，為改善分離效果可適當(dāng)提高色譜柱的使用溫度，但不宜超過 60℃ 。 ?流動相的 PH值應(yīng)控制在 2～ 8之間。當(dāng) pH大于 8時，可使載體硅膠溶解；當(dāng) pH小于 2時，與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。當(dāng)色譜系統(tǒng)中需使用 PH大于 8的流動相時，應(yīng)選用耐堿的填充劑，如采用高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠填充劑、包覆聚合物填充劑、有機(jī) 無機(jī)雜化填充劑或非硅膠基鍵合填充劑等；當(dāng)需使用 PH小于 2的流動相時，應(yīng)選用耐酸的填充劑，如具有大體積側(cè)鏈能產(chǎn)生空間位阻保護(hù)作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑、有機(jī) 無機(jī)雜化填充劑等。 檢測器 ?最常用的檢測器為紫外檢測器，包括二極管陣列檢測器，其他常見的檢測器有熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器等。 ?. 紫外、熒光、電化學(xué)檢測器為選擇性檢測器，其響應(yīng)值不僅與待測溶液的濃度有關(guān)，還與化合物的結(jié)構(gòu)有關(guān)；蒸發(fā)光散射檢測器和示差折光檢測器為通用型檢測器，對所有的化合物均有響應(yīng)；蒸發(fā)光散色檢測器對結(jié)構(gòu)類似的化合物，其響應(yīng)值幾乎僅與待測物的質(zhì)量有關(guān)；二極管陣列檢測器可以同時記錄待測物的吸收光譜，故可用于待測物的光譜鑒定和色譜峰的純度檢查。 ?紫外、熒光、電化學(xué)和示差折光檢測器的響應(yīng)值與待測溶液的濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，但蒸發(fā)光散射檢測器響應(yīng)值與待測溶液的濃度通常呈指數(shù)關(guān)系，故進(jìn)行計算時，一般需經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換。 ?不同的檢測器，對流動相的要求不同。如采用紫外檢測器，所用流動相應(yīng)符合紫外 — 可見分光光度法（《中國藥典》 2022年版二部附錄 Ⅳ A）項下對溶劑的要求；采用低波長檢測時，還應(yīng)考慮有機(jī)相中有機(jī)溶劑的截止使用波長，并選用色譜級有機(jī)溶劑。蒸發(fā)光散射檢測器和質(zhì)譜檢測器通常不允許使用含不揮發(fā)鹽組分
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