酶的提取與分離純化(1)(已修改)
2025-06-07 22:01 本頁面
【正文】 第三節(jié) 酶的精制 (純化 ) 酶純化的基本原則： ①建立一個方便靈敏的分析方法； ②選擇有效的純化方法，盡可能減少純化步驟； ③常在低溫（ 4℃ ）條件下進(jìn)行純化，以避免酶的變性。 第三章 酶的提取與分離純化 一、膜分離 借助一定孔徑的高分子薄膜，將不同大小、形狀、性質(zhì)的顆?；蚍肿舆M(jìn)行分離的技術(shù)。 ★ 1 擴(kuò)散膜分離 —— 透析 （ dialysis） 溶質(zhì)分子 Y 從高濃度一側(cè)通過膜向低濃度一側(cè)移動 ★ 蛋白質(zhì)透析 ★ 透析膜 材 料：纖維素衍生物 袋的形狀 : 管狀 目 的 : 除雜質(zhì) 保 存 : 防腐劑＋冷藏。 ★ 2 加壓膜分離 根據(jù)所截留物質(zhì)顆粒大小的不同，分為： 截留顆粒 直徑 操作壓力 應(yīng)用 微濾 ?m 除菌 超濾 ?m 分離病毒及生物大分子 反滲透 20A 純水制備 ★ ● 微濾 (Microfiltration， MF) 一種靜態(tài)過濾，隨過濾時間延長，膜面上截流沉積不溶物，引起水流阻力增大，透水速率下降，直至微孔全被堵塞； 無流動操作滲透 液原料液★ ● 超濾 (ultrafiltration， UF ) 一種動態(tài)過程，由泵提供推動力，在膜表面產(chǎn)生兩個分力：一個是垂直于膜面的法向分力，使水分子透過膜面，另一個是于膜面平行的切向力，把膜面截流物沖掉。 超濾原理的示意圖 ★ ?超濾法在蛋白質(zhì)溶液除鹽、濃縮及分離純化中有廣泛的應(yīng)用。 ?利用超濾膜在一定壓力下使溶液中大分子滯留，而小分子及溶劑濾過的方法。 常規(guī)過濾 (A)和超濾 (B)的示意圖 (A) (B) ★ ● 反滲透 （ Reverse osmosis， RO） 利用反滲透膜選擇性地只能透過溶劑(通常是水 )的性質(zhì)，對溶液施加壓力，使溶劑通過反滲透膜而從溶液中分離出來的過程。 滲透與反滲透 ★ 3. 電場膜分離 電滲析： 在半透膜的兩側(cè)分別裝上正、負(fù)電極。 離子交換膜電滲析： 用離子交換膜代替一般的半透膜。 應(yīng)用： 脫鹽，海水淡化，純水制備，從發(fā)酵液中分 離檸檬酸、谷氨酸及凝膠電洗脫。 ★ 二、層析法 1 概況 層析法也稱色譜法，是 190
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